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首页> 外文期刊>Applied Microbiology >Streptomyces lividans Blasticidin S Deaminase and Its Application in Engineering a Blasticidin S-Producing Strain for Ease of Genetic Manipulation
【24h】

Streptomyces lividans Blasticidin S Deaminase and Its Application in Engineering a Blasticidin S-Producing Strain for Ease of Genetic Manipulation

机译：Lividans链霉菌弹性蛋白S脱氨酶及其在工程化生产弹性蛋白S的菌株中的应用，以简化遗传操作。

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Blasticidin S is a peptidyl nucleoside antibiotic produced by Streptomyces griseochromogenes that exhibits strong fungicidal activity. To circumvent an effective DNA uptake barrier system in the native producer and investigate its biosynthesis in vivo , the blasticidin S biosynthetic gene cluster ( bls ) was engrafted to the chromosome of Streptomyces lividans . However, the resulting mutant, LL2, produced the inactive deaminohydroxyblasticidin S instead of blasticidin S. Subsequently, a blasticidin S deaminase (SLBSD, for S. lividans blasticidin S deaminase) was identified in S. lividans and shown to govern this in vivo conversion. Purified SLBSD was found to be capable of transforming blasticidin S to deaminohydroxyblasticidin S in vitro . It also catalyzed deamination of the cytosine moiety of cytosylglucuronic acid, an intermediate in blasticidin S biosynthesis. Disruption of the SLBSD gene in S. lividans LL2 led to successful production of active blasticidin S in the resultant mutant, S. lividans WJ2. To demonstrate the easy manipulation of the blasticidin S biosynthetic gene cluster, blsE , blsF , and blsL , encoding a predicted radical S -adenosylmethionine (SAM) protein, an unknown protein, and a guanidino methyltransferase, were individually inactivated to access their role in blasticidin S biosynthesis.
机译：弹性蛋白S是灰链霉菌产生的肽基核苷抗生素，具有很强的杀真菌活性。为了规避本地生产者有效的DNA吸收屏障系统并研究其在体内的生物合成，将blasticidin S生物合成基因簇（bls）移植到淡链霉菌的染色体上。但是，产生的突变体LL2产生了无活性的脱氨基羟基杀稻瘟素S而不是杀稻瘟素S。随后，在紫葡萄链霉菌中鉴定了一种杀稻瘟菌素S脱氨酶（SLBSD，用于S. lividans杀稻瘟菌素S脱氨酶），并证明可控制这种体内转化。发现纯化的SLBSD能够在体外将稻瘟菌素S转化为脱氨基羟基稻瘟素S。它还催化了杀菌素S生物合成的中间体胞嘧啶葡萄糖醛酸的胞嘧啶部分的脱氨基。 lividans LL2中SLBSD基因的破坏导致在所产生的突变体lividans WJ2中成功产生活性杀稻瘟素S。为了证明对稻瘟菌素S生物合成基因簇的易操作性，分别编码了预测的S-腺苷甲硫氨酸（SAM）自由基蛋白，未知蛋白和胍基甲基转移酶的blsE，blsF和blsL分别失活，以了解它们在稻瘟菌素中的作用S的生物合成。

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