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【24h】

Surfactant Protein A2 (SP-A2) Variants Expressed in CHO Cells Stimulate Phagocytosis of Pseudomonas aeruginosa More than Do SP-A1 Variants

机译：在CHO细胞中表达的表面活性蛋白A2（SP-A2）变体比SP-A1变体刺激铜绿假单胞菌的吞噬作用

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Surfactant protein A (SP-A) enhances phagocytosis of Pseudomonas aeruginosa. Two functional genes, SP-A1 and SP-A2, encode human SP-A. As we showed before, baculovirus-mediated insect cell-expressed SP-A2 enhances the association of P. aeruginosa with rat alveolar macrophages (rAMs) more than does SP-A1. However, true phagocytosis (internalization) was not shown, and insect cell derived proteins lack or are defective in certain mammalian posttranslational modifications that may be important for SP-A1 and SP-A2 activity and specificity. Here we used SP-A1 (6A2, 6A4) and SP-A2 (1A0, 1A1) allele variants expressed by CHO (Chinese hamster ovary) mammalian cells to study their effect on association and/or internalization of P. aeruginosa by rAMs and/or human AMs (hAMs) and to study if phagocytosis can be modulated differentially and/or more effectively by CHO cell-expressed SP-A variants than by insect-cell expressed SP-A variants. For cell association and internalization assessments, light microscopy and fluorescence-activated cell sorter analyses were used, respectively. We found the following for the first time. (i) SP-A2 variants enhanced phagocytosis (cell association and/or internalization) of P. aeruginosa more than SP-A1 variants did, and the cell association correlated with internalization. (ii) Differences in the activities of SP-A variants were observed in the following order: 1A1P. aeruginosa more effectively than SP-A1 variants and that posttranslational modifications positively influence the phagocytic activity of SP-A.
机译：表面活性蛋白A（SP-A）可增强铜绿假单胞菌的吞噬作用。 SP-A1 和 SP-A2 这两个功能基因编码人SP-A。如前所述，杆状病毒介导的昆虫细胞表达的SP-A2增强了 P的结合。与SP-A1相比，具有大鼠肺泡巨噬细胞（rAM）的铜绿假单胞菌。但是，没有显示真正的吞噬作用（内在化），并且昆虫细胞衍生的蛋白质在某些哺乳动物翻译后修饰中缺少或有缺陷，这些修饰对SP-A1和SP-A2的活性和特异性很重要。在这里我们使用SP-A1（6A 2 ，6A 4 ）和SP-A2（1A 0 ，1A 1 ）等位基因变体，由CHO（中国仓鼠卵巢）哺乳动物细胞表达，以研究其对 P的缔合和/或内在化的影响。通过rAM和/或人类AMs（hAMs）对铜绿假单胞菌进行研究，以研究吞噬作用是否可以通过CHO细胞表达的SP-A变异体比通过昆虫细胞表达的SP-A变异体有所差异和/或更有效地调节。对于细胞缔合和内在化评估，分别使用了光学显微镜和荧光激活细胞分选仪分析。我们是第一次发现以下内容。 （i）SP-A2变体增强了 P的吞噬作用（细胞结合和/或内在化）。铜绿假单胞菌比SP-A1变种多，并且细胞缔合与内在化相关。 （ii）按以下顺序观察到SP-A变体的活性差异：1A 1 。 （iii）rAM尽管比hAM具有更高的活性，但是一个合适的模型，因为SP-A2变体的活性高于具有rAM或hAM的SP-A1变体。 （iv）CHO细胞表达的SP-A比昆虫细胞表达的变体更具活性。我们得出结论，SP-A2变体刺激了 P的吞噬作用。铜绿假单胞菌比SP-A1变体更有效，并且翻译后修饰对SP-A的吞噬活性有积极影响。

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