Biochemical characterization of a novel ulvan lyase from <em>Pseudoalteromonas</em> sp. strain PLSV

Hui-Min Qin; Panpan Xu; Qianqian Guo; Xiaotao Cheng; Dengke Gao; Dengyue Sun; Zhangliang Zhu; Fuping Lu

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Biochemical characterization of a novel ulvan lyase from Pseudoalteromonas sp. strain PLSV

机译：假单胞菌 sp。一种新型ulvan裂解酶的生化特性。 PLSV菌株

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Ulvans, complex polysaccharides found in the ulvales (green seaweed) cell wall, contain predominantly 3-sulfated rhamnose (Rha3S) linked to either D-glucuronic acid, L-iduronic acid or D-xylose. The ulvan lyase endolytically cleaves the glycoside bond between Rha3S and uronic acid via a β-elimination mechanism. Ulvan lyase has been identified as belonging to the polysaccharide lyase family PL24 or PL25 in the carbohydrate active enzymes database, in which fewer members have been characterized. We present the cloning and characterization of a novel ulvan lyase from Pseudoalteromonas sp. strain PLSV (PsPL). The enzymes were heterologously expressed in Escherichia coli BL21 (DE3) and purified as the His-tag fusion protein using affinity chromatography, ion-exchange chromatography and size-exclusion chromatography. The degradation products were determined by thin-layer chromatography (TLC), liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS) to be mainly disaccharides and tetrasaccharides. Ulvan lyase provides an example of degrading ulvales into oligosaccharides. Arg265, His152 and Tyr249 were considered to serve as catalytic residues based on PsPL structural model analysis. 展开▼

机译：Ulvans是在溃疡（绿色海藻）细胞壁中发现的复杂多糖，主要包含与 D -葡萄糖醛酸， L -艾杜糖醛酸相关的3-硫酸鼠李糖（Rha3S）。或 D -木糖。 ulvan裂解酶通过β-消除机制内切切割Rha3S和糖醛酸之间的糖苷键。在碳水化合物活性酶数据库中，Ulvan裂解酶已被鉴定为属于多糖裂解酶家族PL24或PL25，其中已鉴定出较少的成员。我们目前从 Pseudoalteromonas sp。的新型ulvan裂解酶的克隆和鉴定。 PLSV株（PsPL）。这些酶在大肠杆菌BL21（DE3）中异源表达，并使用亲和色谱，离子交换色谱和尺寸排阻色谱纯化为His-tag融合蛋白。通过薄层色谱法（TLC），液相色谱-质谱法（LC-MS）确定降解产物主要是二糖和四糖。 Ulvan裂解酶提供了一个将ulvales降解为寡糖的实例。根据PsPL结构模型分析，认为Arg265，His152和Tyr249可作为催化残基。 展开▼

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来源
《RSC Advances》 |2018年第5期|共6页

作者
Hui-Min Qin; Panpan Xu; Qianqian Guo; Xiaotao Cheng; Dengke Gao; Dengyue Sun; Zhangliang Zhu; Fuping Lu;
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