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Rapid Identification of Yeasts in Positive Blood Cultures by a Multiplex PCR Method

机译：多重PCR法快速鉴定阳性血液培养物中的酵母

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Yeasts are emerging as important etiological agents of nosocomial bloodstream infections. A multiplex PCR method was developed to rapidly identify clinically important yeasts that cause fungemia. The method amplified the internal transcribed spacer 1 (ITS1) region between the 18S and 5.8S rRNA genes and a specific DNA fragment within the ITS2 region of Candida albicans. With this method, C. albicans produced two amplicons, whereas other species produced only one. Through sequence analysis, the precise lengths of the PCR products were found to be as follows: C. glabrata (482 or 483 bp), C. guilliermondii (248 bp),C. parapsilosis (229 bp),C. albicans (218 or 219 and 110 bp), C. tropicalis (218 bp), Cryptococcus neoformans (201 bp), and C. krusei (182 bp). The PCR products could be effectively separated by disk polyacrylamide gel electrophoresis. The method was used to test 249 positive blood cultures (255 isolates), from which the following species (strain number) were isolated: C. albicans (128),C. tropicalis (51), C.glabrata (28), C.parapsilosis (23), C. neoformans (9), C.krusei (5), C.guilliermondii (3), and other, minor species (8). The test sensitivity of the method was 96.9% (247 of 255 isolates). The eight minor species were either misidentified (one strain) or not identified (seven strains). From the time at which a positive bottle was found, the multiplex PCR could be completed within 8 h; the present method is simpler than any previously reported molecular method for the identification of blood yeasts.
机译：酵母正在成为医院血流感染的重要病原体。开发了多重PCR方法以快速鉴定引起真菌病的临床上重要的酵母。该方法扩增了18S和5.8S rRNA基因之间的内部转录间隔区1（ITS1）区域以及 Candida albicans 的ITS2区域内的特定DNA片段。使用此方法， C 。 白色念珠产生两个扩增子，而其他物种仅产生一个。通过序列分析，发现PCR产物的精确长度如下： C 。 glabrata （482或483 bp）， C 。 guilliermondii （248 bp）， C 。 parapsilosis （229 bp）， C 。 白化病（218或219和110 bp）， C 。 tropicalis （218 bp），隐球菌 neoformans （201 bp）和 C 。 krusei （182 bp）。圆盘聚丙烯酰胺凝胶电泳可有效分离PCR产物。该方法用于测试249种阳性血液培养物（255个分离株），并从中分离出以下物种（菌株编号）： C 。 albicans （128）， C 。 tropicalis （51）， C 。 glabrata （28）， C 。副截瘫 （23）， C。 新福尔摩斯（9）， C 。 krusei （5）， C 。 guilliermondii （3）和其他次要物种（8）。该方法的测试灵敏度为96.9％（255个分离株中的247个）。八个次要物种被误认（一个品系）或未被识别（七个品系）。从发现阳性瓶开始，多重PCR可以在8小时内完成;本方法比以前报道的用于鉴定血酵母的分子方法更简单。

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