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首页> 外文期刊>Journal of bacteriology >Site-Directed Mutagenesis Studies of Tn5 Transposase Residues Involved in Synaptic Complex Formation
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Site-Directed Mutagenesis Studies of Tn5 Transposase Residues Involved in Synaptic Complex Formation

机译：Tn5转座酶残基参与突触复合物形成的定点诱变研究

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Transposition (the movement of discrete segments of DNA, resulting in rearrangement of genomic DNA) initiates when transposase forms a dimeric DNA-protein synaptic complex with transposon DNA end sequences. The synaptic complex is a prerequisite for catalytic reactions that occur during the transposition process. The transposase-DNA interactions involved in the synaptic complex have been of great interest. Here we undertook a study to verify the protein-DNA interactions that lead to synapsis in the Tn5 system. Specifically, we studied (i) Arg342, Glu344, and Asn348 and (ii) Ser438, Lys439, and Ser445, which, based on the previously published cocrystal structure of Tn5 transposase bound to a precleaved transposon end sequence, make cis and trans contacts with transposon end sequence DNA, respectively. By using genetic and biochemical assays, we showed that in all cases except one, each of these residues plays an important role in synaptic complex formation, as predicted by the cocrystal structure.
机译：当转座酶与转座子DNA末端序列形成二聚体DNA-蛋白质突触复合物时，开始转座（DNA离散片段的运动，导致基因组DNA的重新排列）。突触复合物是转座过程中发生催化反应的先决条件。涉及突触复合物的转座酶-DNA相互作用引起了极大的兴趣。在这里，我们进行了一项研究，以验证导致Tn 5 系统突触的蛋白质-DNA相互作用。具体来说，我们研究了（i）Arg342，Glu344和Asn348，以及（ii）Ser438，Lys439和Ser445，它们是基于先前公开的与预先切割的转座子末端结合的Tn 5 转座酶的共晶体结构序列，分别使 cis 和 trans 与转座子末端序列DNA接触。通过使用遗传和生化分析，我们发现在所有情况下，除了一种情况，这些残基中的每一个在突触复合物的形成中都起着重要作用，正如共晶结构所预测的那样。

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