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An improved phycobilin extraction method

机译：一种改进的藻胆素提取方法

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摘要

One unique feature in cyanoprokaryotes, rhodophytes, and cryptophytes is the presence of phycobilin pigments-these water soluble pigments can absorb red, orange, yellow, and green light enhancing the spectral range available for cellular conversion to chemical energy. The presence of phycobilin pigment complexes can be detected using fluorescence, or absorbance measures. Efficient detection of these compounds is essential for use in calibrating absorbance in remote sensing or in physiological studies. The standard procedure for phycobilin analysis involves sonication, extraction in buffer potentially coupled with additional digestion steps using enzymes, repeated freeze and thawing cycles, followed by filtration, and spectrophotometric analyses. An alternative method, using asolectin-CHAPS ((3-[(3-cholamidopropyl)dimethylammonio]propanesulfonic acid - AC)) solution for extraction, and three cycles of freeze/thawing/sonication, was compared to the phosphate buffer (PB) standard procedure. Cultures of both coccoid and filamentous cyanoprokaryota had improved extraction efficiency (38-80%) using AC. After two complete extractions, no pigment was detectable in AC and near baseline fluorescence was observed in the cell pellet, whereas the PB extraction method removed <90% of the phycobilins after two extractions. Phycocyanin concentration measured by AC extraction was better correlated to lipophilic pigment concentration than using phosphate buffer extraction. AC buffered to pH 6.7 was more effective than AC 3.75. One potential source of experimental error was determined to be the use of a baseline correction for the extraction buffer, not the sample.
机译：蓝原核生物，红藻植物和隐藻植物的一个独特特征是藻胆素颜料的存在-这些水溶性颜料可以吸收红色，橙色，黄色和绿色的光，从而增强了细胞转化为化学能的光谱范围。可以使用荧光或吸光度检测出藻胆素色素复合物的存在。这些化合物的有效检测对于校准遥感或生理研究中的吸光度至关重要。藻胆素分析的标准程序包括超声处理，在缓冲液中提取，可能与使用酶的其他消化步骤相结合，重复的冷冻和解冻循环，然后过滤和分光光度法分析。将一种替代方法，使用乳凝素-CHAPS（（3-[（3-苯甲酰氨基丙基）二甲基铵]丙烷磺酸-AC））溶液进行萃取，并进行了三个冷冻/解冻/超声处理周期，将其与磷酸盐缓冲液（PB）标准液进行了比较。程序。球状和丝状氰基原核生物的培养物使用交流电均提高了提取效率（38-80％）。两次完全萃取后，在AC中未检测到色素，并且在细胞沉淀中观察到接近基线的荧光，而PB萃取方法两次萃取后去除了<90％的藻胆素。与使用磷酸盐缓冲液提取法相比，通过AC提取法测定的藻蓝蛋白浓度与亲脂性颜料浓度之间的相关性更好。 AC缓冲至pH 6.7比AC 3.75更有效。实验误差的一个潜在来源被确定为对提取缓冲液而不是样品进行了基线校正。

著录项

  • 来源
    《Harmful Algae》 |2012年第5期|35-39|共5页
  • 作者

    Paul V. Zimba;

  • 作者单位

    National Warmwater Aquaculture Center, Post Office Box 38, Stoneville, MS 38776, USA,Center for Coastal Studies, Texas A&M University Corpus Christi.TX 788412, USA;

  • 收录信息
  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 eng
  • 中图分类
  • 关键词

    asolectin; CHAPS; cyanoprokaryota; phycobilin; pigment extraction;

    机译：芦荟素CHAPS;氰基原核生物;藻胆素;色素提取;

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