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Untersuchungen zur frühzeitigen Entdeckung einer Resistenz-entwicklung des Maiszünslers (Ostrinia nubilalis) gegenüber dem B.t.-Mais-Toxin Cry1Ab und zur Aufklärung möglicher Resistenzmechanismen

机译:对欧洲玉米bore(Ostrinia nubilalis)对B.t.玉米毒素Cry1Ab抗药性发展的早期发现的调查,并阐明了可能的抗药性机制

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摘要

For the early detection of resistance development of the European corn borer to B.t.-corn-toxin Cry1Ab, late instar larvae were collected in B. t. -corn fields in a German area called Oder-bruch and tested in an F2-screening. In autumn 2001,2002, and 2003 a total number of about 1.8 Mio. maize plants were checked and 1855 larvae were found. With the resulting moths single pairs (PG) were formed, the progenies were bred as isogenic strains and with F_1-moths pairs were formed. The early 1st instar F_2-larvae were tested in bioassays for their reaction to B. t.-corn-toxin Cry1Ab. As a result, it can be concluded, that no resistant European corn borer individuals were found. In other B.t.-toxin-pest-systems the resistance mechanisms are mainly proteinase- or receptor-mediated.%Um eine Resistenzentwicklung des Maiszünslers gegenüber dem B.t.-Mais-Toxin Cry1Ab frühzeitig erkennen zu können, wurden Altlarven in B.t.-Mais-Feldern im Oderbruch gesammelt und einem F_2-Screening unterzogen. Im Herbst der Jahre 2001, 2002 und 2003 wurden insgesamt ca. 1,8 Mio. Maispflanzen durchsucht und dabei 1855 Larven gefunden. Mit den resultierenden Faltern wurden Einzelpärchen (PG) gebildet und deren Nachkommen als isogene Linien weitergezüchtet, um mit den F_1-Faltern Geschwister-Paarungen vorzunehmen. Die frisch geschlüpften F_2-Larven wurden einem Biotest unterzogen, um ihre Reaktion gegenüber dem B.t.-Mais-Toxin Cry1Ab festzustellen. Als Fazit bleibt festzuhalten, dass keine resistenten Maiszünsler gefunden wurden. Da die bisher in anderen B.t.-Toxin-Schädlings-Systemen beschriebenen Resistenzmechanismen meist protease- oder rezeptorbedingt sind, wurden entsprechende Referenzsysteme zur Aufklärung möglicher Resistenzmechanismen gegenüber dem B.t.-Mais-Toxin Cry1Ab mit Darmsaft- und Darmwand-Material anfälliger Maiszünsler Larven erstellt. Im Darmsaft wurden in erster Linie die Protease-Aktivitäten mit photometrischen Tests untersucht, wobei die Proteasen Tryp-sin, Chymotrypsin, Elastase und Aminopeptidase nachgewiesen wurden. Daneben wurde der proteolytische Abbau des To-xins bzw. Protoxins mit Darmsaft und den nachgewiesenen Proteasen simuliert. Sowohl das 65 kDa Toxin, als auch das 135 kDa Protoxin wurden von allen nachgewiesenen Proteasen - außer Aminopeptidase - zu ca. 63 kDa Proteinen abgebaut. Aus dem Darmwand-Material wurden BBMV's (brush border membrane vesicles) hergestellt, um mittels Bindungsstudien mit biotinyliertem Toxin und der Ligand-Blot Technik sowie Streptavidin-Meerettich-Peroxidase-Konjugat und dem ECL-System die Bindung des Toxins an die Darmwand nachzuweisen und die Rezeptoren zu charakterisieren.
机译:为了早期发现欧洲玉米bore对B.t.-玉米毒素Cry1Ab的抗性发展,在B.t.中收集了晚龄幼虫。玉米田在德国的奥德布鲁(Oder-bruch)地区进行了F2筛选。在2001、2002和2003年秋季,总数约为1.8Mio。检查了玉米植物,发现了1855个幼虫。用形成的蛾形成单对(PG),后代作为同基因品系繁殖,并形成F_1-蛾。在生物测定中测试了第一龄幼虫F_2幼虫对玉米芽孢杆菌玉米毒素Cry1Ab的反应。结果,可以得出结论,没有发现抗药性的欧洲玉米bore个体。在其他Bt毒素-害虫系统中,耐药机制主要是蛋白酶或受体介导的。微生物的耐药性Cry1Ab抗体在Bt-Mais的Wurden Altlarven中gesammelt和einem F_2-筛选致癌物。 Im Herbst der Jahre 2001、2002和2003年的wurden insgesamt ca. 1,8神达Maispflanzen durchsucht und dabei 1855年幼稚园。结果由Faltern WurdenEinzelpärchen(PG)和LenienWeitergezüchtet共同完成,F_1-Faltern Geschwister-Paarungen折扣。 F_2-Larven wurden einem Biotest Unterzogen,以及Re-tionGegenüberdem B.t.-Mais-Toxin Cry1Ab festzustellen。 Als Fazit bleibt festzuhalten,戴斯·凯因·梅森(Daiss keine抵抗)安德伦B.t.毒素-Schädlings-SystemenBeschriebenen抗药性机理中的双态,Wurden Entsprechende我用酯酶进行的Darmesaft wurden可以进行蛋白酶检测,还可以进行蛋白酶,胰蛋白酶,胰凝乳蛋白酶,弹性蛋白酶和氨基肽酶的检测。 Daneben Wurde der proteolytische Abbau des To-xinsbzw。 Protosensim Protoxins mit Darmsaft und den nachgewiesenen。 Sowohl das 65 kDa毒素,al auch das 135 kDa毒素,蛋白质-氨基酸肽酶-zuca。 63 kDa蛋白质Abgebaut。达姆旺氏材料-腹股沟BBMV的(刷状边缘膜囊泡)Hergestellt,um mittels Bindungsstudien mit生物素,毒素和配体技术Rezeptoren zu charakterisieren。

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