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【24h】

Entwicklung und Prüfung von spezifischen Sera gegen Phoma Ungarn (Tode ex Fr.) Desm., den Erreger der Wurzelhals- und Stengelfaule an Winterraps

机译：开发和测试针对匈牙利Phoma（Death ex Fr.）血清的特定血清，冬季油菜腐烂的根和茎腐的病原体

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Fr die Entwicklung eines Phoma Ungam (P. lingam)-spezifischen Antiserums wurden Kaninchen mit lyophiliseriertem und zermor-sertem Pilzmyzel eines aggressiven Isolates immunisiert und das Rohserum gewonnen. Zur Herstellung von monospezifischen Antikorpern wurden Trichloressigsaure-gefallte P. Ungam-Proteine in einer SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese aufgetrennt. Nach dem Blotten des Polyacrylamidgels auf Nitrozellulosefilter mit dem "Se-midry"-Verfahren wurde der Westernblol: mit polyklonalem Rohserum, das gegen das aggressive Isolat gerichtet war, inkubiert. Es konnten monospezifische Antikorper gewonnen werden, die mit einer 22 kD-Proteinbande von P. Ungam reagierten. Unterschiedliche Aggressivitaten waren aber mit den monospezifischen Antikorpern nicht erfassbar. Mit den ebenfalls an Raps auftretenden Pilzen Alternaria brassicae und Verticillium dahliae zeigten die monospezifischen 22 kD-Antikorper auf dem Western Blot keine Kreuzreaktionen. Parallel dazu wurde das Rohserum zur Verminderung vonKreuz-reaktionen im standardisierten indirekten ELISA mit Kaolin und DEAE-Zellulose aufgereinigt. Alle Antikorperaufarbeitungen wurden zur Ermittlung ihrer Eignung für einen indirekten ELISA auf ihre Spezifitat und Kreuzreaktion getestet, Das mit Kaolin aufgerei-nigte Antiserum war in Bezug auf den Arbeitsaufwand am besten ge-ssignet, da damit P. lingam in infiziertem Pflanzenmaterial nachgewiesen werden konnte, Eine Unterscheidung zwischen aggressivemund nicht-aggressivem P. lingam-Isolat war mit keinem der getesteten Antisera moglich.%For the development of a Phoma Ungam (P. Ungam) specific antiserum rabbits were immunized against lyophylized and grinded mycelia of an aggressive isolate to obtain raw serum. To generate monospecific antibodies tri-chloracetate precipitated P. lingam proteins were separated on an SDS po-lyacrylamide gel. After blotting the proteins from the polyacrylamide gel onto nitrocellulose filter by the semidry procedure the Western blot was incubated with polyclonal antibodies obtained from the aggressive isolate. Monospecific antibodies directed against a 22 kD protein band of P. lingam were obtained. However, differences in the aggression of the isolates were not delected. When a Western blot was incubated with the monospecific 22 kD antibodies no cross-reaction was found with proteins of Alternaria brassicae and Verlictlllum dahliae, also occurring on rape. In parallel experiments raw serum was purified by incubation with Kaolin and DEAE cellulose to prevent cross-reactions in a standardized indirect ELISA. All antibody preparations were tested for their suitability regarding specificity and cross-reactivity in an indirect BUSA. Antiserum purified with Kaolin was found to be best suitable for the detection of P. lingam in infected plant tissue with a view to the labour and time invested. However, a differentiation between aggressive and non-aggressive P. lingam isolates was not possible with any of the tested anlisera.
机译：为了开发Phoma Ungam（P. lingam）特异性抗血清，用冻干并从侵袭性分离物中粉碎的真菌菌丝体免疫兔，并获得原始血清。在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中分离出三氯乙酸沉淀的P. Ungam蛋白，以产生单特异性抗体。使用“ Se Midry”方法将聚丙烯酰胺凝胶印迹在硝酸纤维素滤膜上后，将Western blol：与未加工的多克隆血清一起孵育，该多克隆血清可用于攻击性分离株。可以获得与P.Ungam的22kD蛋白条带反应的单特异性抗体。单特异性抗体无法检测到不同的攻击性。对于在油菜籽上也出现的真菌Alternaria bracericae和Verticillium dahliae，单特异性22 kD抗体在蛋白质印迹上未显示任何交叉反应。同时，在标准的间接高岭土和DEAE纤维素间接ELISA中，降低了原始血清以减少交叉反应。测试所有抗体后处理的特异性和交叉反应，以确定它们是否适用于间接ELISA。就工作量而言，用高岭土纯化的抗血清是最好的标记，因为因此可以在感染的植物材料中检测到林格氏菌。用任何一种经过测试的抗血清都无法区分侵略性和非侵袭性灵芝P. lingam分离物。％为了开发Phoma Ungam（P. Ungam），对特异性抗血清进行免疫，以抵抗侵略性分离物的冻干和磨碎菌丝体，以获得未加工的血清。为了产生单特异性抗体，在SDS聚丙烯酰胺凝胶上分离出三氯乙酸沉淀的ling.lingam蛋白，然后通过半干法将聚丙烯酰胺凝胶上的蛋白印迹到硝酸纤维素滤膜上，将Western印迹与从侵袭性分离物中获得的多克隆抗体一起孵育。 。获得了针对灵芝假单胞菌的22kD蛋白带的单特异性抗体。但是，没有发现分离物的攻击性差异。当将Western blot与单特异性22 kD抗体一起孵育时，未发现与油菜链格孢和大白菊的蛋白发生交叉反应。在平行实验中，将原始血清与高岭土和DEAE纤维素一起纯化，以防止在标准间接ELISA中发生交叉反应。测试了所有抗体制剂在间接BUSA中关于特异性和交叉反应性的适用性。为了节省劳力和时间，发现用高岭土纯化的抗血清最适合检测受感染植物组织中的灵芝假单胞菌。但是，用任何一种被测试的anlisera都无法在侵略性和非侵略性林氏疟原虫分离株之间进行区分。

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