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首页> 外文期刊>Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America >Generation of influenza A viruses entirely from cloned cDNAs
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Generation of influenza A viruses entirely from cloned cDNAs

机译：完全从克隆的cDNA产生甲型流感病毒

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We describe a new reverse-genetics system that allows one to efficiently generate influenza A viruses entirely from cloned cDNAs. Human embryonic kidney cells (293T) were transfected with eight plasmids, each eucoding a viral RNA OF the A/WSN/33 (HIN1) (niNi) or sApr/8/34/(HINI) virus, flanked by the human RNA polymerase I promoter and the mouse RNA polymerase I terminator-together with plas- mids encoding viral nucleoprotein and the PB2, PBI, and PA viral polymerases. This strategy yielded >I x lo~3 plaque- forming units (pfu) of virus per ml of supernatant at 48 hr posttransfection. The addition of plasmids expressing all of the remainiug viral structural proteins led to a substantial increase in virus production, 3 x 10~4-5 x IO, pfu/ml. We also used reverse genetics to generate a reassortant virus contain. ing the PBI gene of the A/PR/8/34 virus, with all other genes representing A/WSN/33. Additional viruses produced by this method had mutations in the PA gene or possessed a foreign epitope in the head of the neuraminidase protein. This efficient system, which does not require helper virus infection, should be useful in viral mutagenesis studies and in the production of vaccines and gene therapy vectors.
机译：我们描述了一种新的反向遗传学系统，该系统可以完全从克隆的cDNA有效地产生甲型流感病毒。用八个质粒转染人类胚胎肾细胞（293T），每个质粒均编码A / WSN / 33（HIN1）（niNi）或sApr / 8/34 /（HINI）病毒的病毒RNA，侧翼是人RNA聚合酶I启动子和小鼠RNA聚合酶I终止子，以及编码病毒核蛋白和PB2，PBI和PA病毒聚合酶的质粒。该策略在转染后48小时每ml上清液产生了超过1 x lo〜3个噬菌斑形成单位（pfu）。表达所有剩余的病毒结构蛋白的质粒的加入导致病毒产量显着增加，pfu / ml为3 x 10〜4-5 x 10。我们还使用了反向遗传学来产生重组病毒。 A / PR / 8/34病毒的PBI基因，所有其他基因均代表A / WSN / 33。通过这种方法产生的其他病毒在PA基因中具有突变，或者在神经氨酸酶蛋白的头部具有外源表位。这种不需要辅助病毒感染的有效系统，在病毒诱变研究以及疫苗和基因治疗载体的生产中应该是有用的。

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