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Fluoride-cleavable, fluorescently labelled reversible terminators: Synthesis and use in primer extension

机译：可氟化物切割，荧光标记的可逆终止子：合成及其在引物延伸中的用途

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Fluorescent 2′-deoxynucleotides containing a protecting group at the 3′-O-position are reversible terminators that enable array-based DNA sequencing-by-synthesis (SBS) approaches. Herein, we describe the synthesis and full characterisation of four reversible terminators bearing a 3′-blocking moiety and a linker-dye system that is removable under the same fluoride-based treatment. Each nucleotide analogue has a different fluorophore attached to the base through a fluoride-cleavable linker and a 2-cyanoethyl moiety as the 3′-blocking group, which can be removed by using a fluoride treatment as well. Furthermore, we identified a DNA polymerase, namely, RevertAid M-MuLV reverse transcriptase, which can incorporate the four modified reversible terminators. The synthesised nucleotides and the optimised DNA polymerase were used on CodeLink slides spotted with hairpin oligonucleotides to demonstrate their potential in a cyclic reversible terminating approach.
机译：在3'-O位置包含保护基的荧光2'-脱氧核苷酸是可逆终止子，可实现基于阵列的DNA合成测序（SBS）方法。在本文中，我们描述了带有3'封闭部分的四个可逆终止剂的合成和完整表征，以及在相同的基于氟化物的处理下可移动的接头染料系统。每个核苷酸类似物具有通过氟可裂解的连接子和2-氰基乙基部分作为3'-封闭基团连接至碱基的不同荧光团，也可以通过使用氟化物处理将其除去。此外，我们鉴定了一种DNA聚合酶，即RevertAid M-MuLV逆转录酶，它可以整合四个修饰的可逆终止子。合成的核苷酸和优化的DNA聚合酶用于点缀有发夹寡核苷酸的CodeLink载玻片上，以证明其在循环可逆终止方法中的潜力。

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