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DULIP: A Dual Luminescence-Based Co-Immunoprecipitation Assay for Interactome Mapping in Mammalian Cells

机译：抗抑制：哺乳动物细胞中的互乱组映射的基于双发光的共分免疫沉淀测定

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Mapping of protein protein interactions (PPIs) is critical for understanding protein function and complex biological processes. Here, we present DULIP, a dual luminescence-based co-immunoprecipitation assay, for systematic PPI mapping in mammalian cells. DULIP is a second-generation luminescence-based PPI screening method for the systematic and quantitative analysis of co-immunoprecipitations using two different luciferase tags. Benchmarking studies with positive and negative PPI reference sets revealed that DULIP allows the detection of interactions with high sensitivity and specificity. Furthermore, the analysis of a PPI reference set with known binding affinities demonstrated that both low- and high-affinity interactions can be detected with DULIP assays. Finally, using the well-characterized interaction between Syntaxin-1 and Munc18, we found that DULIP is capable of detecting the effects of point mutations on interaction strength. Taken together, our studies demonstrate that DULIP is a sensitive and reliable method of great utility for systematic interactome research. It can be applied for interaction screening and validation of PPIs in mammalian cells. Moreover, DULIP permits the specific analysis of mutation-dependent binding patterns. (c) 2015 Elsevier Ltd. All rights reserved.
机译：蛋白质蛋白质相互作用（PPI）的测绘对于了解蛋白质功能和复杂的生物过程至关重要。在这里，我们呈现佛普，一种基于哺乳动物细胞中的系统PPI映射的双发光的共免疫沉淀测定。杜普是一种基于第二代发光的PPI筛选方法，用于使用两种不同的荧光素酶标记进行系统和定量分析共免疫沉淀。基准研究具有正面和阴性PPI参考集的基准研究表明，抑郁液允许检测高灵敏度和特异性的相互作用。此外，具有已知结合亲和力的PPI参考组的分析表明，可以用杜坡测定检测低和高亲和力相互作用。最后，使用Syntaxin-1和Munc18之间的良好表征的相互作用，我们发现Dulip能够检测点突变对相互作用强度的影响。我们的研究携带，表明郁金普是系统互乱研究的敏感性和可靠的方法。它可以应用于哺乳动物细胞中PPI的相互作用筛选和验证。此外，杜贝允许突变依赖性结合模式的具体分析。 （c）2015 Elsevier Ltd.保留所有权利。

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