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Free sulfhydryl in recombinant monoclonal antibodies

机译：重组单克隆抗体中的游离巯基

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Monoclonal antibody (mAb) therapy applications have been growing rapidly in recent years.Like other recombinant proteindrugs,therapeutic mAb's need to be well characterized toensure their structural and functional integrity.IgG mAb's are composed of two heavy and twolight chains covalently linked by interchaind isulfide bonds.Eachdomain of the heavy or light chain conains one additional disulfide bond.Native IgG mAb's,with completely formed disulfide bonds,should not bear any free sulfhydryl.This report describes detection and quantification of free sulfhydryl in recombinant mAb's producedin Chinese hamster ovary (CHO) cells using a fluorescent technique.The method utilizes the fluorescent probe N-(1-pyrenyl)maleimide (NPM).The purified mAb's appear to be homogeneous under native conditions with approximately 0.02 molof free sulfhydryl per mole of protein.Upon denaturation,minor species related to the mAb's are observed on sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE),and the free sulfhydryl levelis determined to be approximately 0.1 mol/mol of protein.These results suggest that a small portion of these recombinant mAb's lackin intermolecula rdisulfide bonds but remain noncovalently associated under native conditions.The formation of the free sulfhydryl containing mAb species is likely to occur during hte culture process and/or protein folding processin the endoplamic reticulum(ER).
机译：单克隆抗体（mAb）疗法的应用近年来发展迅速。与其他重组蛋白药物一样，治疗性单克隆抗体也需要得到很好的表征以确保其结构和功能完整性。IgGmAb由两条重链和两条轻链组成，这些两条重链和两条轻链通过链间异硫键共价连接重链或轻链的每个域都包含一个额外的二硫键。具有完全形成的二硫键的天然IgG mAb不应带有任何游离巯基。本报告介绍了中国仓鼠卵巢（CHO）产生的重组mAb中游离巯基的检测和定量。该方法使用荧光探针N-（1-吡啶基）马来酰亚胺（NPM）。纯化的mAb在天然条件下似乎是均质的，每摩尔蛋白质约0.02 mol游离巯基。变性时，次要物种在十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS- PAGE），游离巯基水平约为蛋白质的0.1 mol / mol。这些结果表明，这些重组mAb的一小部分缺乏分子间二硫键，但在自然条件下仍保持非共价结合。形成含游离巯基的mAb内质网（ER）的培养过程和/或蛋白质折叠过程中很可能会发生这种物种。

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