...
  • 主题
高级搜索  >
历史搜索 清空历史
首页> 外文期刊>Биотехнология >Клонирование и экспрессия гена pal Rhodosporidium toruloides и характеристика синтезируемой L-фенилаланин-аммоний-лиазы
【24h】

Клонирование и экспрессия гена pal Rhodosporidium toruloides и характеристика синтезируемой L-фенилаланин-аммоний-лиазы

机译：克隆和表达PAL rhodosporidim Toruloides基因及合成的L-苯丙氨酸铵leases的特征

获取原文
获取原文并翻译 | 示例
           
页面导航
  • 摘要
  • 著录项
  • 相似文献
  • 相关主题

摘要

Ген pal, кодирующий L-фенилаланин-аммоний-лиазу Rhodosporidium toruloides (GenBank: Х12702.1), клонирован в составе экспрессирующего вектора рЕТ28а. Для экспрессии были выбраны штаммы Е. сой BL21(DE3)/pLysECodonPlus RP и Rozetta(DE3). В результате оптимизации экспрессии максимальная продуктивность штаммов-продуцентов в отношении рекомбинантной L-фенилаланин-аммоний-лиа-зы составила 40±1% от общего клеточного белка при использовании в качестве индуктора ИПТГ, времени индукции 24 ч и температуры культивирования 23°. Было показано, что рекомбинантный белок на 99% находится в растворимой фракции клеточного содержимого. За одну стадию очистки методом аффинной хроматографии был получен препарат белка со степенью чистоты 90%. Поскольку выход целевого белка, по данным электрофореза, был выше при использовании Е. соИ Rozetta (ВЕ3), этот штамм является более перспективным для продукции L-фенилаланин-аммоний-лиазы. При этом выход целевого белка при одностадийной очистке составлял ～130 мг/л, а средняя удельная активность фермента - 0,237 Е/мг.
机译：编码L-苯基丙氨酸氨基氨氏龙孢菌孢子苷（Genbank：X12702.1）的PAL基因，作为表达载体Ret28a的一部分克隆。对于表达，选择E. Soy BL21（DE3）/ Plysecodonplus RP和Rozetta（DE3）。由于表达优化，当用作ITTH诱导剂时，重组L-苯丙氨酸氨基铵 - Lia-Lia-Lia-Lia-Lia-Lia-Lia-Lia-Lia-Lia-Lia-Lia-Lia-Lia-Lia-Lia-Lia-Lia-Lia-Lia-Lia-Lia-Lia-Lia-Zh的最大生产率为40±1％ 23°。结果表明，重组蛋白为99％是细胞含量的可溶性分数。在通过亲和层析纯化的一种Phait中，获得纯度为90％的蛋白质制剂。由于使用E.大豆罗zetta（V3）时，根据电泳的靶蛋白的产率较高，因此该菌株对L-苯丙氨酸 - 铵 - 烯化株更为希望。同时，在一步纯化中靶蛋白的产率为约130mg / L，酶的平均比活性为0.237e / mg。

著录项

相似文献

  • 外文文献
  • 中文文献
  • 专利
获取原文

客服邮箱：kefu@zhangqiaokeyan.com

京公网安备：11010802029741号 ICP备案号：京ICP备15016152号-6 六维联合信息科技 (北京) 有限公司©版权所有

  • 客服微信

  • 服务号