...
首页> 外文期刊>东京农业大学农学集报 >Rab5結合因子同定のための迅速且っ簡便なFar-westernblotting
【24h】

Rab5結合因子同定のための迅速且っ簡便なFar-westernblotting

机译:Rab5结合因子识别的快速和易于幻灯片

获取原文
获取原文并翻译 | 示例
           

摘要

:低分子量Gタンパク質Rab5は細胞膜から初期ェンドソームへの小胞輸送や初期ェンドソーム同上 の融合に関与する因子であることが知られている。過去の報告では,GTPγSなどの加水分解耐性GTPアナ ログを使用しFar-western blottingを行うことによってRab5結合因子が検出されている。しかしながら, この方決ではNEおよびNS反応の際に多量の加水分解耐性GTP アナログが必要であり,実験時間やコス トが非常にかかる。本論文ではFar-western blottingのプローブとして常時活性型変異体Rab5Q79Lを用 いることによって,NE反応とNS反応が必要なく加水分解耐性GTPアナログを使用しない簡便且っ実験 コストが低い方法について記述する。この方法を評価するため,既知のRab5結合因子であるEEA1 と Rab5 が結合するか否か検証したところ結合が確認された。さらにLC MS/MSによってRab5結合因子の同定を 試みたところactin betaが同定された。我々の方法では実験時間が3-4時間程短縮され,実験コストは90- 95%削減された。我々はこの方法がRab5による細胞内小胞輸送における重要な知見をもたらすものと考え る。
机译::已知低分子量G蛋白RAB5是涉及熔体传输融合的因素,并从细胞膜初始递送到初始体。在过去的报告中,通过使用水解的抗性GTP类似物如GTPγs进行FAR-Western印迹来检测RAB5结合因子。然而,在这种情况下,在NE和NS反应期间需要大量的水解电阻GTP类似物,并且实验时间和成本非常高。本文介绍了一种具有低直观和NS反应的方法和低实验成本,而不需要耐水解GTP类似物作为远期印迹的探针。为了评估该方法,证实了当EEA1和RAB5已知Rab5结合因子的结合时确认结合。此外,当我尝试通过LCS / MS进行鉴定的RAB5结合因子时,鉴定了actinβ。在我们的方法中,实验时间缩短至3-4小时,实验成本降低了90-95%。我们考虑这种方法,导致RAB5细胞内囊泡的重要发现。

著录项

相似文献

  • 外文文献
  • 中文文献
  • 专利
获取原文

客服邮箱:kefu@zhangqiaokeyan.com

京公网安备:11010802029741号 ICP备案号:京ICP备15016152号-6 六维联合信息科技 (北京) 有限公司©版权所有
  • 客服微信

  • 服务号