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Nouvelle approche pour modifier le tropisme des vecteurs adénoviraux à l’aide de ligands bispécifiques

机译：使用双特异性配体修饰腺病毒载体向性的新方法

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摘要

L’adénovirus a été étudié dans l’optique de développer de nouveaux traitementspour différentes maladies. Les vecteurs adénoviraux (AdV) sont des outils intéressants dufait qu’ils peuvent être produits en grandes quantités (1X1012 particules par millilitre) et depar leur capacité à infecter des cellules quiescentes ou en division rapide. Les AdVs ontsubi bon nombre de modifications pour leur permettre de traiter des cellules tumorales oupour transporter des séquences génétiques exogènes essentielles pour le traitement demaladies monogéniques. Toutefois, les faibles niveaux d’expression du récepteur primairede l’adénovirus, le CAR (récepteur à l’adénovirus et au virus coxsackie), réduit grandementl’efficacité de transduction dans plusieurs tumeurs. De plus, certains tissus normaux commeles muscles n’expriment que très peu de CAR, rendant l’utilisation des AdVs moinssignificative. Pour pallier à cette limitation, plusieurs modifications ont été générées sur lescapsides virales. L’objectif de ces modifications était d’augmenter l’affinité des AdVs pourdes récepteurs cellulaires spécifiques surexprimés dans les tumeurs et qui seraient exemptsdans les tissus sains avoisinant. On peut mentionner dans les approches étudiées:l’utilisation de ligands bispécifiques, l’incorporation de peptides dans différentes régions dela fibre ou la substitution par une fibre de sérotypes différents.Notre hypothèse était que les domaines d’interaction complémentaire (K-Coil et ECoil)permettraient aux ligands de s’associer aux particules virales et d’altérer le tropismede l’AdV. Pour ce faire, nous avons inclus un domaine d’interaction synthétique, le K-Coil,dans différentes régions de la fibre virale en plus de générer des mutations spécifiques pourabolir le tropisme naturel. Pour permettre la liaison avec les récepteurs d’intérêt dontl’EGF-R, l’IGF-IR et le CEA6, nous avons fusionné le domaine d’interactioncomplémentaire, le E-Coil, soit dans les ligands des récepteurs ciblés dont l’EGF et l’IGF-I,soit sur un anticorps à un seul domaine reconnaissant la protéine membranaire CEA6,l’AFAI.Suite à la construction des différents ligands de même que des différentes fibresvirales modifiées, nous avons determiné tout d’abord que les différents ligands de mêmeque les virus modifiés pouvaient être produits et que les différentes composantes pouvaientinteragir ensemble. Les productions virales ont été optimisées par l’utilisation d’un nouveauprotocole utilisant l’iodixanol. Ensuite, nous avons démontré que l’association des ligandsavec le virus arborant une fibre modifiée pouvait entraîner une augmentation detransduction de 2 à 21 fois dans différentes lignées cellulaires. À cause de la difficulté desadénovirus à infecter les fibres musculaires occasionnée par l’absence du CAR, nous avonscherché à savoir si le changement de tropisme pourrait accroître l’infectivité des AdVs.Nous avons démontré que l’association avec le ligand bispécifique IGF-E5 permettaitd’accroître la transduction autant dans les myoblastes que dans les myotubes de souris.Nous avons finalement réussi à démontrer que notre système pouvait induire uneaugmentation de 1,6 fois de la transduction suite à l’infection des muscles de souriceauxMDX. Ces résultats nous amènent à la conclusion que le système est fonctionnel et qu’ilpourrait être évalué dans des AdVs encodant pour différents gènes thérapeutiques.
机译：为了开发针对不同疾病的新疗法，已经研究了腺病毒。腺病毒载体（AdV）是有趣的工具，因为它们可以大量生产（每毫升1x1012颗粒），并且可以感染静止或快速分裂的细胞。 AdVs有许多修饰，可以使它们治疗肿瘤细胞或转运对于治疗单基因疾病必不可少的外源基因序列。但是，初级腺病毒受体，CAR（腺病毒和柯萨奇病毒受体）的低水平表达大大降低了几种肿瘤的转导效率。此外，某些正常组织（例如肌肉）表达的CAR很少，因此使用VAS的意义不大。为了克服该限制，已经在病毒胶囊上产生了几种修饰。这些改变的目的是增加AdV对肿瘤中过度表达的特定细胞受体的亲和力，而该肿瘤在附近的健康组织中将是游离的。在研究的方法中，我们可以提到：使用双特异性配体，在纤维的不同区域掺入肽或被不同血清型的纤维取代。我们的假设是互补相互作用域（K-Coil和ECoil）将使配体与病毒颗粒缔合并改变AdV的向性。为此，我们在病毒纤维的不同区域添加了一个合成的相互作用域K-Coil，此外还产生了特定的突变来破坏自然趋向性。为了与包括EGF-R，IGF-IR和CEA6在内的目标受体结合，我们将互补相互作用域E-Coil合并到了包括EGF在内的靶向受体的配体中和IGF-I，分别位于识别CEA6膜蛋白AFAI的单域抗体上，在构建了不同的配体以及不同的修饰病毒纤维之后，我们首先确定了可以产生配体以及修饰的病毒，并且不同的成分可以相互作用。通过使用使用碘克沙醇的新方案，已经优化了病毒生产。接下来，我们证明了配体与带有修饰纤维的病毒的缔合可能导致不同细胞系中的转导增加2到21倍。由于缺乏CAR导致腺病毒难以感染肌纤维，因此我们研究了向性的改变是否会增加AdVs的感染性，并表明与双特异性配体IGF-E5的相关性最终，我们成功地证明了我们的系统可以在感染小鼠肌肉后诱导1.6倍的转导增加。这些结果使我们得出结论，该系统具有功能，可以在编码不同治疗基因的AdV中进行评估。

著录项

  • 作者

    Pinard Maxime;

  • 作者单位
  • 年度 2011
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  • 正文语种 fr
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