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Estudio 'in vitro' de la diferenciación condrogénica de células madre mesenquimales, procedentes de médula ósea humana, sobre biomateriales de colágeno

机译:胶原生物材料对人骨髓间充质干细胞软骨分化的“体外”研究

摘要

Introducción: La osteoartritis es una enfermedad degenerativa caracterizada por la degradación del cartílago y el hueso subcondral. En la actualidad no existen tratamientos eficaces que la curen, siendo la terapia celular una herramienta prometedora para la formación de cartílago hialino. Las células madre mesenquimales (CMMs) se obtienen con facilidad de multitud de tejidos, entre ellos la médula ósea (CMMs-MOh). La combinación de terapia celular empleando CMMs-MOh con scaffolds que aporten un sustrato adecuado para su proliferación y diferenciación hacia condrocitos, favorece la formación de cartílago funcional que podría ser empleado posteriormente para la regeneración de las zonas dañadas.Objetivos: Evaluar la capacidad de diferenciación condrogénica in vitro de CMMs-MOh cuando son cultivadas sobre biomateriales de colágeno.Material y métodos: Las células se aislaron de MOh y se caracterizaron. Posteriormente se sembraron sobre los biomateriales constituidos por colágeno y heparán sulfato (HS) en distintas proporciones, cultivándose en medio de inducción condrogénico durante 30 días. Transcurridos 15 y 30 días de cultivo, se evaluó el grado de diferenciación condrogénica de las células, así como la calidad del tejido neo-sintetizado in vitro. Para ellos se emplearon técnicas de biología molecular, microscopía electrónica, histológicas e inmunohistoquímicas.Resultados: Las células aisladas de la MOh mostraban capacidad de diferenciación osteogénica y condrogénica, además de un perfil de marcadores de membrana característico de CMMs-MOh. Transcurridos los 30 días de cultivo, en todos los biomateriales se observó un elevado porcentaje celular y gran cantidad de matriz extracelular, distribuidos homogéneamente por la totalidad del biomaterial. En la MEC secretada por las células se detectó expresión de marcadores característicos de cartílago hialino. El ARN de las células diferenciadas expresó marcadores específicos de linaje condrogénico. Por último, seprodujo liberación de colágeno al medio de cultivo por parte de las células.Conclusiones: Los biomateriales de colágeno son un soporte adecuado para permitir la diferenciación condrogénica de CMMs-MOh y la neo-formación de un tejido cartilaginoso
机译:简介:骨关节炎是一种退行性疾病,其特征是软骨和软骨下骨退化。目前,尚无有效的治疗方法,细胞疗法是形成透明软骨的有前途的工具。间充质干细胞(CMMs)容易从多种组织中获得,包括骨髓(CMMs-MOh)。使用CMMs-MOh和支架的细胞疗法相结合,可为软骨细胞的增殖和分化提供足够的底物,有利于功能性软骨的形成,随后可将其用于受损区域的再生。在胶原生物材料上培养CMMs-MOh的体外成软骨作用材料和方法:从MOh中分离细胞并进行表征。随后,将它们以不同比例播种在由胶原蛋白和硫酸乙酰肝素(HS)组成的生物材料上,并在软骨诱导培养基中生长30天。培养15和30天后,评估了细胞的软骨形成分化程度,以及体外新合成组织的质量。结果:分离的MOh细胞除具有CMMs-MOh的膜标记特征外,还具有成骨和软骨形成的能力。培养30天后,在所有生物材料中均观察到高细胞百分比和大量细胞外基质,均匀分布在整个生物材料中。在细胞分泌的MEC中检测到特征性透明软骨标记物的表达。分化细胞的RNA表达了软骨生成谱系的特异性标记。最后,胶原蛋白被细胞释放到培养基中。结论:胶原蛋白生物材料是足以支持CMMs-MOh软骨分化和软骨组织新形成的支持物。

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