一种防治心肌纤维化或心肌肥厚的中药组合物

技术领域

本发明为传统中药的临床应用领域，主要为一种中药组合物在防治心肌纤维化或心肌肥厚 中的应用，同时本发明还涉及该中药组合物的制备方法。

背景技术

心肌纤维化或心肌肥厚是心脏长期负荷过重时发生的一种心室重构，除心肌细胞间结缔 组织沉积外，还伴随心肌细胞蛋白质合成增加和细胞体积增大，严重影响心脏的正常收缩与 舒张功能。心肌纤维化或心肌肥厚是多种心血管系统疾病，如高血压病、冠心病，心脏瓣膜 病、先天性心脏病、心肌炎症等的常见并发症和病理基础。持续的心肌纤维化或心肌肥厚， 将导致严重的心律失常、心力衰竭。

临床可用于治疗心肌纤维化或心肌肥厚的药物有血管紧张素转化酶抑制剂，醛固酮受体拮 抗剂，钙通道道阻滞剂，血管紧张素受体阻滞剂，β-受体阻滞剂，基质金属蛋白酶抑制剂， 内皮素受体阻断剂等。目前，这些药物中，只有血管紧张素转化酶抑制剂取得了一定的临床 治疗效果，但作用有限，不能取得非常明显的抗心肌纤维化或心肌肥厚的作用，其它药物目 前尚无明显的证据显示可以改善心肌纤维化或心肌肥厚，所以目前缺乏针对性强和疗效好的 治疗药物。本发明所涉及的中药组合物，具有疗效确切，安全性高，作用靶点丰富，副作用 小，价格低廉的优点。

中国专利CN 101780071A于2010年7月21日公开了中药活性成分蛇床子素在制备防 治心肌纤维化药物中的应用。蛇床子素能明显降低心重指数、羟脯氨酸含量、CVF，减少心 肌细胞间的纤维组织。

中国专利CN102000095A于2011年4月6日公开了积雪苷在制备预防或治疗心肌纤 维化的药物中的应用。积雪苷具有抗自发性高血压大鼠(SHR)心肌纤维化的作用，可明显 降低全心重、左心室重，减少心内、外膜及小动脉心肌胶原容积分数。

发明内容

本发明所要解决的技术问题之一在于发明了心肌纤维化或心肌肥厚患者提供能够防治心 肌纤维化损伤或心肌肥厚的中药组合物。

本发明提供的防治心肌纤维化或心肌肥厚的中药组合物，由下述重量份的原料药制备而 成：竹节参5-20份，全瓜蒌8-24份，葛根10-20份，川芎8-16份，薤白6-18份。

优选地，本发明上述中药组合物的重量份分别为：竹节参10-20份，全瓜蒌12-24份，葛 根10-15份，川芎8-12份，薤白6-12份。

优选地，本发明上述中药组合物的重量份分别为：竹节参15份，全瓜蒌24份，葛根12 份，川芎10份，薤白12份。

本发明上述中药组合物为片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液或注射液中的一种。

优选地，本发明上述药剂为合剂。

本发明中药组合物经体内实验证明其有明显的抗心肌纤维化或心肌肥厚的作用。

本发明取雄性wistar大鼠经冠状动脉结扎复制心肌纤维化或心肌肥厚动物模型，对上述中 药组合物的研究表明：

(1)心肌纤维化或心肌肥厚模型组大鼠给予本发明中药组合物后，明显降低全心重/体重、心 室重/体重。

(2)心肌纤维化或心肌肥厚模型组大鼠HE染色发现心脏组织中有广泛的炎性细胞浸润；心肌 纤维断裂，排列紊乱；心肌细胞坏死。给予本发明中药组合物后，心脏组织炎性细胞明显减 少。

(3)心肌纤维化或心肌肥厚模型组大鼠Masson染色发现大量胶原结缔组织增生。给予本发明 中药组合物后，心肌细胞间质胶原明显减少，CVF明显降低。

附图说明

图1为HE染色后心脏组织病理学变化，其中1为伪手术组，2为模型组，3为本发明组合物 高剂量组。

图2为Masson染色后心脏组织病理学变化，其中1为伪手术组，2为模型组，3为本发明组 合物高剂量组。

图3为免疫组化染色后TGF-β1的变化，其中1为伪手术组，2为模型组，3为本发明组合 物高剂量组。

具体实施方式

根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，实施例所描述的具体的物料配比、工 艺条件及其结果仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围。在阅读了本发明记载的 内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等效变化和修饰同样落入 本发明权利要求所限定的范围。

本发明以下实施例所用竹节参为五加科竹节参Panax japonicus C.A.May的干燥根茎。

本发明以下实施例所用瓜蒌为葫芦科植物栝楼Trichosanthes kirilowii Maxim的全果实；

本发明以下实施例所用葛根为豆科野葛pueraria lobata(Willd.)Ohwir的干燥根。

本发明以下实施例所用川芎为伞形科川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根茎。

本发明以下实施例所用薤白为百合科植物小根蒜Allium macrostemon Bunge的干燥磷茎；

实施例

以实验数据来表明本发明所述中药组合物的体内抗心肌纤维化或心肌肥厚作用。

1.受试药物

按比例称取原料药7天量，分别加18倍量的50％乙醇回流提取3次，每次1.5小时。过 滤，合并提取液，减压浓缩至每毫升相当于lg生药。

2.实验动物

Wiatar大鼠，雄性，体重250-300g，上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供 [SCXK(沪)2008-0016]。

3.实验方法

3.1心肌纤维化或心肌肥厚模型的建立

大鼠腹腔注射10％水合氯醛麻醉(0.3mL·100g-1)后固定于操作台上。打开呼吸机(呼吸 频率72次·min-1，潮气量18mL，呼吸比设为1∶2)，用气管插管从大鼠口中插入，至大鼠 胸部起伏与呼吸机频率一致，说明已经插入气管。左前胸去毛，碘伏消毒，手术刀于第三根 肋骨处切开皮肤，顺肌肉纹理分离皮下组织和肌肉，钝性分离第3根和第4根肋骨间隙，撕 开心包膜，暴露并挤出心脏。缝针从大鼠心脏左心耳下缘下针，至肺动脉圆锥处出针，进针 深度控制在0.1cm左右，结扎左冠状动脉前降支。结扎后观察到左心室壁缺血区心肌变白， 室壁运动减弱，心耳充血明显，即提示结扎成功。止血后逐层关胸，拔出气管内插管，清理 大鼠气道分泌物，待其恢复自主呼吸并清醒后放入笼中。术后每只大鼠肌肉注射青霉素 20IU·天-1，连续3天。伪手术组大鼠心脏冠脉处只穿线不结扎，其余操作同模型组。

3.2分组给药

造模后2周，造模动物随机分为：心肌纤维化或心肌肥厚模型组(以下简称模型组)， 中药组合物大、中、小剂量组(12g，6g，3g生药/kg)，阳性药卡托普利组(50mg/kg)。加伪 手术组一共6组。每天给药一次，给药体积10ml/kg，连续给药4周。伪手术组与模型组给予 等体积蒸馏水。造模后第42天，即给药后第28天，末次给药后处理动物。

3.3指标检测

心肌纤维化是指心肌组织内胶原浓度显著升高或胶原容积分数(collagen volume fraction， CVF)显著高于正常值，其主要特征为成纤维细胞数目增多和心肌细胞外间质胶原过度沉积。 TGF-β信号通路在各种心血管疾病引起的心肌纤维化中发挥着关键作用。心肌肥厚则是表现 为心脏组织中有广泛的炎性细胞浸润，心肌纤维断裂，排列紊乱，心肌细胞坏死。

心重指数：取心脏，称重，计算心脏/体重及心室/体重比值。

心脏组织羟脯氨酸含量检测：羟脯氨酸是胶原中特有的氨基酸，它的含量可用于分析组 织中胶原蛋白的含量。称取心脏约50-100mg，测定心脏组织中羟脯氨酸含量。

心脏组织病理学观察：10％福尔马林固定，进行HE染色，光学显微镜下观察心脏组织 结构变化。

心肌胶原容积分数：masson染色是胶原的特异性染色。心脏切片masson染色，经Zessi  Axioskop2显微镜采集图像，经Image-pro plus图像处理软件分析并计算masson染色阳性(胶 原呈蓝色)面积百分比，即心肌胶原容积分数(collagen volume fraction，CVF)。每张切片随机 选取5个视野作图像分析，以CVF均值作为该样本的测量值。CVF越大，表示胶原含量越多。

心脏组织TGF-β1检测：采用免疫组织化学法检测心脏组织中TGF-β1的表达。采集 图像，每张切片随机选取5个视野，采集图像，Image-pro plus图像处理软件自动分析计算出 阳性细胞数，以阳性细胞均数作为该样本的测量值。

4.实验结果

4.1心重指数：模型组动物的心脏/体重及心室/体重比值明显较伪手术组高(P＜0.05～0.01)。与 模型组比较，本发明的中药组合物可明显降低心脏/体重及心室/体重值(P＜0.05)，对心肌肥厚 有良好的治疗作用。见表1。

表1中药组合物对心肌纤维化/心肌肥厚大鼠心重系数的影响

与伪手术组比较^△△p＜0.01，与模型组比较^*p＜0.05，^**p＜0.01

4.2心脏组织羟脯氨酸含量：模型组动物心脏组织中羟脯氨酸含量与伪手术组明显增加，给 予本发明中药组合物后，心脏组织中羟脯氨酸含量明显减少(P＜0.05～0.01)。见表2。

表2中药组合物对心肌纤维化/心肌肥厚大鼠 CVF值、羟脯氨酸含量和TGF-β1的影响

与伪手术组比较△△p＜0.01，与模型组比较^*p＜0.05，^**p＜0.01

4.3心脏组织病理学变化

HE染色切片显微镜下观察，伪手术组大鼠心脏组织结构排列整齐，未见断裂、变性、坏 死及炎性细胞浸润；心室内膜和外膜未见异常改变；模型组大鼠心脏组织中有广泛的炎性细 胞浸润；心肌纤维断裂，排列紊乱；心肌细胞坏死。本发明的中药组合物组可明显降低模型 动物的病变程度，减少炎性细胞浸润及心肌细胞的坏死。(HE染色，见图1)。

利用Masson染色对大鼠心肌组织染色，胶原呈蓝色。显微镜下观察，伪手术组大鼠心肌 组织为红色，有极少部分胶原呈蓝色；模型组大鼠心肌组织红色染色较少，胶原蓝色染色区 域较大，主要分布在心肌坏死灶边(Masson染色，见图2)，表明在病灶局部胶原结缔组织 增生，发生纤维化。本发明的中药组合物组可明显减少蓝色染色区，即心肌胶原明显减少， 其CVF值较模型组明显降低(P＜0.05～0.01)。见表2。

4.4免疫组化TGF-β1表达

与伪手术组相比，模型组大鼠心肌组织TGF-β1表达显著升高，见图3，TGF-β1阳性 表达细胞数显著升高(p＜0.01)，给予本发明中药组合物后，心脏组织TGF-β1表达显著降低 (P＜0.01)。见表2。

以上结果提示本发明的中药组合物有明显的抗心肌纤维化或心肌肥厚作用，其作用可能 与降低TGF-β1表达有关。

总结：动物实验表明本发明的组合物具有明显的抗心肌肥厚或心肌纤维化功效。本发明 的组合物进一步还可与药学上可接受的辅料，制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液或注射液 等不同剂型的药物。