杨梅素在制备抑制铁调素表达的制剂中的应用

（一）技术领域

本发明涉及杨梅素Myricetin在制备抑制铁调素Hepcidin表达的制剂 中的应用。

（二）背景技术

铁是人体必需微量元素之一，铁代谢平衡紊乱，会导致体内铁缺乏或 铁过载。肝脏分泌的铁调素Hepcidin通过控制铁的吸收和再循环利用维 持体内铁稳态的平衡。遗传缺陷导致的低水平Hepcidin是原发性血色病 发生发展的重要因素；而在难治性缺铁性贫血（IRIDA）和慢性炎症性贫 血（ACI）中Hepcidin的高表达为疾病的治疗带来一定难度。

因此，以铁调素Hepcidin为靶点，靶向筛选Hepcidin的激动剂或拮 抗剂，对铁代谢紊乱疾病的治疗都具有重要意义。

（三）发明内容

本发明目的是提供杨梅素在制备抑制铁调素Hepcidin表达的制剂中 的应用，为新药筛选提供基础。

本发明采用的技术方案是：

杨梅素在制备抑制铁调素表达的制剂中的应用。

在此前的研究中，发明人发现黑豆皮提取物能显著抑制铁调素 Hepcidin的表达，根据文献报道，选取黑豆皮提取物中几类代表性活性成 分，筛选其潜在的活性分子。研究发现杨梅素Myricetin能在体外通过降 低Smad1/5/8信号通路的磷酸化而显著抑制人源肝癌细胞HepG2铁调素 Hepcidin的表达，呈现较强的时间、剂量依赖性。通过荧光素酶报告基因 手段，发现杨梅素Myricetin对HAMP基因的转录展现出一致的抑制效果。 在2种铁调素Hepcidin的激动剂BMP6和炎症因子IL-6刺激的条件下， 杨梅素仍能抑制住铁调素Hepcidin上升。进一步动物体内试验证实，杨 梅素抑制肝脏Hepcidin表达的同时，可以减少肝脏铁、脾脏铁的含量， 增加外周血清铁浓度。富有意义的是，动物体内研究显示，杨梅素或可改 善机体的造血功能，膳食期间机体的红细胞数量、血红蛋白量及红细胞压 积显著上升，同时对血小板亦有一定程度的响应。此外，杨梅素膳食处理 的小鼠能显著改善急性LPS对小鼠铁调素Hepcidin及机体铁代谢的影响。 高铁膳食条件下，杨梅素能显著增加小鼠机体的血清铁，降低肝脏、脾脏 等组织铁，更进一步证实了杨梅素促进机体的铁动员。该研究结果为杨梅 素改善Hepcidin升高性疾病提供了理论依据，特别是对慢性炎症性贫血 及缺铁性贫血的药物研发提供了基础。

具体的，所述杨梅素可用于制备防治慢性炎症性贫血（ACI）、难治 性缺铁性贫血（IRIDA）或肾性贫血的饮食补充剂（如保健品）或药物。

通常，所述的饮食补充剂含0.01～50wt%，较佳地为0.1～5wt%的 杨梅素；以及食品上可接受的载体。

所述的药物可添加药学上可接受的载体，制成常规的剂型，如片剂、 胶囊、颗粒剂等。

药学上可接受的载体指用于治疗剂给药的载体，包括各种赋形剂和稀 释剂，它们本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性。合适 的载体是本领域普通技术人员所熟知的，可含有液体，如水、盐水、甘油 和乙醇。另外，这些载体中还可能存在辅助性的物质，如填充剂、润滑剂、 助流剂、润湿剂或乳化剂、矫味剂、pH缓冲物质等。

从易于制备和给药的立场看，优选的药物是口服药物，尤其是片 剂和固体填充或液体填充的胶囊。

本发明所述的药物的剂型可以是多种多样的，只要是能够使活性 成分有效地到达哺乳动物体内的剂型都是可以的。比如可选自：片剂、 胶囊、粉末、颗粒、糖浆、溶液、悬浮液、或气雾剂。其中杨梅素可 以存在于适宜的固体或液体的载体或稀释液中，也可储存在适宜于注 射或滴注的消毒器具中。通常，在制备的药物中，杨梅素占总重量的 0.01～20wt%，较佳地为0.05～5wt%，其余为药学上可接受的载体以及 其它添加剂等物质。

本发明的有益效果主要体现在：本发明提供了杨梅素在制备抑制铁调 素Hepcidin表达的制剂中的应用，为杨梅素改善Hepcidin升高性疾病提 供了理论依据，特别是对慢性炎症性贫血及缺铁性贫血的药物研发提供了 基础。

（四）附图说明

图1为杨梅素体外抑制HepG2细胞HAMP基因表达；

A：黑豆皮潜在活性成分对人肝癌细胞系HepG2细胞Hepcidin mRNA表 达的影响；

B：不同浓度的杨梅素处理HepG2细胞，处理12小时，对HAMP基因表 达的抑制作用；

C：浓度为50μg/mL杨梅素处理HepG2细胞从0h到24h对HAMP基因 表达的抑制作用；

D：不同浓度的杨梅素处理HepG2细胞，western blot检测BMP-SMAD、 JAK-STAT、ERK1/2相关通路蛋白变化水平，处理时间12小时；

E：浓度为50μg/mL杨梅素从0h至24h处理HepG2细胞对Hepcidin表达 通路相关蛋白的影响，western blot检测BMP-SMAD、JAK-STAT、ERK1/2 通路蛋白水平。

图2为杨梅素抑制BMP6或IL-6诱导的HAMP表达；

A：杨梅素（50μg/mL）和BMP6（10ng/mL）共处理HepG2细胞12小 时，对HepG2细胞Hepcidin mRNA表达的抑制效果；

B：杨梅素（50μg/mL）和IL-6（50ng/mL）共处理HepG2细胞12小时， 对HepG2细胞Hepcidin mRNA表达的抑制效果；

C：杨梅素（0-100μg/mL）和BMP6（10ng/mL）共处理HepG2细胞12 小时，对HepG2细胞Hepcidin表达的抑制效果，western blot分析磷酸化 Smad1/5/8、磷酸化Stat3和磷酸化Erk1/2水平；

D：杨梅素（0-100μg/mL）和IL-6（50ng/mL）共处理HepG2细胞12小 时，对HepG2细胞Hepcidin表达的抑制效果，western blot分析磷酸化 Smad1/5/8、磷酸化Stat3和磷酸化Erk1/2水平。

图3为杨梅素显著抑制HAMP基因的转录；

A：不同浓度杨梅素（0-100ug/mL）处理HepG2细胞12h，荧光素酶报告 基因检测HAMP基因转录情况；

B：杨梅素（50ug/mL）处理HepG2细胞0-24h，荧光素酶报告基因检测 HAMP基因转录情况；

C：不同浓度的杨梅素（0-100μg/mL）和BMP6（10ng/mL）共处理HepG2 细胞24小时，荧光素酶报告基因检测HAMP基因的转录情况；

D：不同浓度的杨梅素（0-100μg/mL）和IL-6（50ng/mL）共处理HepG2 细胞24小时，荧光素酶报告基因检测HAMP基因转录情况。

图4为杨梅素腹腔给药24小时抑制正常小鼠肝脏Hamp1表达；

A：杨梅素（40mg/kg）腹腔注射24小时，C57BL/6小鼠肝脏Hamp1表 达量情况

B：杨梅素（40mg/kg）腹腔注射24小时，C57BL/6小鼠肝脏Bmp6表达 量情况

C：杨梅素（40mg/kg）腹腔注射24小时，C57BL/6小鼠肝脏Id1表达量 情况

D：杨梅素（40mg/kg）腹腔注射24小时，C57BL/6小鼠血清铁水平情况。

图5为杨梅素腹腔给药1周抑制正常小鼠肝脏Hamp1表达；

A：杨梅素（每天20mg/kg）腹腔注射1周，C57BL/6小鼠肝脏Hamp1 表达量情况；

B：杨梅素（每天20mg/kg）腹腔注射1周，C57BL/6小鼠肝脏Bmp6表 达量情况；

C：杨梅素（每天20mg/kg）腹腔注射1周，C57BL/6小鼠肝脏Fpn1表 达量情况；

D：杨梅素（每天20mg/kg）腹腔注射1周，C57BL/6小鼠血清铁水平情 况；

E：杨梅素（每天20mg/kg）腹腔注射1周，C57BL/6小鼠非血红素肝铁 水平情况；

F：杨梅素（每天20mg/kg）腹腔注射1周，C57BL/6小鼠非血红素脾铁 水平情况。

图6为杨梅素膳食能抑制小鼠体内Hamp1基因表达；

A：杨梅素（3‰）膳食，15-30天，C57BL/6小鼠肝脏Hamp1表达量情 况；

B：杨梅素（3‰）膳食，15-30天，C57BL/6小鼠肝脏Bmp6表达量情况；

C：杨梅素（3‰）膳食，15-30天，C57BL/6小鼠肝脏Id1表达量情况；

D：杨梅素（3‰）膳食30天，，C57BL/6小鼠肝脏Epo表达量情况。

图7为杨梅素显著改善急性脂多糖LPS对小鼠机体铁水平的影响；

A：C57BL/6小鼠肝脏Hamp1表达量情况；

B：C57BL/6小鼠血清铁水平情况；

C：C57BL/6小鼠血清转铁蛋白水平情况；

D：C57BL/6小鼠脾脏非血红素铁水平情况。

图8：高铁膳食下，杨梅素能显著增加机体的铁动员；

A：C57BL/6小鼠肝脏血清铁水平情况；

B：C57BL/6小鼠非血红素肝铁水平情况；

C：C57BL/6小鼠非血红素脾铁水平情况；

D：C57BL/6小鼠转铁蛋白饱和度水平情况；

E：C57BL/6小鼠不饱和铁结合力水平情况；

F：C57BL/6小鼠总铁结合力水平情况。

（五）具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围 并不仅限于此：

实施例1：

1.材料和方法

1.1实验原料制备

黑豆皮中几种代表活性成分：Cyanin chloride、Kuromanin chloride、 (+)-Catechin hydrate、β-Sitosterol、Myricetin均购自SIGMA公司。所有活 性单体溶于无菌二甲基亚砜DMSO中，配置成所需浓度。脂多糖LPS购 自Santa Cruz Biotech公司。

1.2细胞株

人肝癌细胞株HepG2及人肾脏细胞株HEK293由中国科学院上海生 命科学院细胞库提供。培养条件：含10％FBS（GIBCO）的DMEM高糖 型培养基（GIBCO），37℃，5％CO2饱和湿度培养箱。

1.3Luciferase荧光素酶报告基因检测

按照HD Transfection Reagent-Promega转染系统说明，于转 染前1日接HEK293接种于24孔板，5×10⁴/孔，第2日当细胞约60%融 合时，更新细胞培养液，共同转染HAMP-promoter2.7kb-pGL3和内参 Renilla报告基因质粒。共转24h后，根据实验设计，加药处理不同的浓 度、时间后，裂解收集细胞，离心取上清，用Dual-Luciferase Reporter Assay  System测定裂解细胞上清内Luciferase（HAMP Luc和Renilla Luc）活性， 计算HAMP Luc/Renilla Luc比值。每种处理各个设3复孔。

1.4实验动物

6～10周龄SPF级C57BL/6雄性小鼠购自上海斯莱克实验动物有限公 司，SPF环境饲养。基础饲料AIN-76A（铁含量0.9mg/Kg，Research Diets, Inc）适应喂养一周后，按体重随机分组，每组6～8只，根据实验设计， 对照组和实验组分别予以不同处理后，5%水合氯醛腹腔麻醉后，心脏采 血（及时分离血清），并收集肝脾肾组织（液氮保存）。

1.5RNA提取和Realtime-PCR

Trizol（Life Technologies）法提取细胞和组织的RNA，具体操作按说 明书进行。Nanodrop1000Spectrophotometer上检测RNA纯度 （OD260/OD280≈1.9-2.1）及RNA浓度（ng/μl），调整RNA浓度到1μg/μl。 2.0μg RNA经DNase（Promega）处理后，M-MLV反转录酶（Promega） 和Oligo（dT）18primer（Takara Bio Inc.）进行反转录。CFX96Real-Time  System(Bio-Rad)中进行Realtime PCR，检测体积为10ul，试剂采用iQ  SYBR Green Supermix（Bio-Rad），引物序列如下：

HAMP:

forward CAGCTGGATGCCCATGTTC

reverse CAGCAGCCGCAGCAGAA；

ACTIN:

forward CACGGCATCGTCACCAACT

reverse CACGCAGCTCATTGTAGAAGGT；

mouse Hamp1:

forward GCACCACCTATCTCCATCAACA

reverse TTCTTCCCCGTGCAAAGG；

mouse Actb(β-actin):

forward AAATCGTGCGTGACATCAAAGA

reverse GCCATCTCCTGCTCGAAGTC；

mouse Id1:

forward CGCAGCCACCGGACTCT

reverse AACCCCCTCCCCAAAGTC；

mouse Bmp6:

forward ATGGCAGGACTGGATCATTGC

reverse CCATCACAGTAGTTGGCAGCG；

mouse Tfr2:

forward TCCAAGAAACCCAGAGACCTGTT

reverse CCGAGTCCTGAGTGGGAAGA；

mouse Hfe:

forward TGTGAGGTGCATGAAGACAACAG

reverse TCTTGCCCGTCATAACCATATCT；

mouse Hjv:

forward CCAGGCTGAGGTGGACAATC

reverse GTCGGTCGCCCCCATT；

mouse Epo:

forward TCCCCCACGCCTCATCT

reverse TTTCTGCCTCCTTGGCCTCTA；

mouse Tmprss6:

forward ACGTGCATTTCACTGCCTAGAG

reverse TGTTCTTCGTCACTGCCATTG；

mouse Fpn1:

forward TCACCTGGCTACGTCGAAAAT

reverse GCTGGGCTAGTCCTGAGAATAGAC；

1.6Western blot

用含有PMSF（Sigma-Aldrich）和磷酸酶抑制剂（PhosSTOP，Roche） 的RIPA裂解液（碧云天生物技术研究所）裂解细胞或组织后，提取总蛋 白。细胞蛋白取30ug，肝组织蛋白取100ug，经10%SDS-PAGE胶电泳 后，转移至PVDF膜，该膜与特异性抗体4℃孵育过夜。洗涤三遍，与 过氧化物酶标记的二抗（anti-rabbit or anti-mouse IgG1:4000,Proteintech  Group）室温孵育1小时后，Westernblot试剂盒（ECL system，Pierce,Thermo  Scientific）显色。

所用一抗如下：

兔抗anti-pSmad1/5/8（1:1000浓度稀释；Cell Signaling Technology）， 兔抗anti-Smad1（1:1000浓度稀释；Cell Signaling Technology），兔抗 anti-pStat3（1:1000浓度稀释；Cell Signaling Technology），兔抗anti-Stat3 （1:1000浓度稀释；Cell Signaling Technology），兔抗anti-pErk1/2（1:1000 浓度稀释；Cell Signaling Technology），兔抗anti-Erk1/2（1:1000浓度稀 释；Cell Signaling Technology）and鼠抗antiβ-actin（1:2000浓度稀释； Sigma-Aldrich）。

1.7统计方法

所用统计采用R软件分析，实验数据以Mean±SD表示。细胞和动物 实验的组间比较采用Tukey’s检验(ANOVA)，两组间比较以Student's t-test 检验，以P<0.05认为有统计学意义。

2结果

2.1杨梅素抑制人肝癌细胞HepG2细胞HAMP基因表达

在体外培养HepG2细胞，将文献筛选的5种活性单体分别加入细胞 培养液中，终浓度为20μg/mL，处理12小时后，弃上清培养基，PBS漂 洗3遍，Trizol法提取RNA，Realtime-PCR检测HAMP基因表达量。每 种活性单体每次处理设3复孔，实验重复3次。

实验发现杨梅素可显著抑制HepG2细胞HAMP基因的表达（图1A）。 且杨梅素抑制HAMP基因的表达程度与剂量和作用时间相关。杨梅素的 浓度为20μg/mL时，HAMP基因的表达量约为对照组的10%（图1B）。 50μg/mL的杨梅素处理，随着时间的变化，HAMP表达量开始极剧下降， 处理12-24小时后，表达量明显不足对照组的2%（图1C）。

用含有PMSF（Sigma-Aldrich）和磷酸酶抑制剂（PhosSTOP,Roche） 的RIPA裂解液（碧云天生物技术研究所）裂解细胞或组织后，提取总蛋 白。通过western-blot，检测Hepcidin分子调控的主要信号通路 BMP-SMAD、JAK-STAT、ERK中各因子的表达情况[6,7]。Western Blot 结果显示，随着杨梅素浓度的增加，磷酸化Smad1/5/8蛋白表达水平亦显 著降低（图1D），并且6小时后，Smad1/5/8蛋白磷酸化的水平显著被抑 制（图1E），这提示杨梅素通过降低Smad1/5/8蛋白的磷酸化水平抑制 Hepcidin mRNA表达。

2.2杨梅素能分别显著抑制BMP6诱导和IL-6诱导的的HAMP表达

BMP6是生理条件下最强的Hepcidin刺激剂，为了探讨杨梅素对 BMP6诱导的Hepcidin表达的抑制效果，将杨梅素（50μg/mL）先于BMP6 （10ng/mL）30min加入到HepG2细胞的培养液中，培养12小时后， 检测Hepcidin mRNA表达量。BMP6可使Hepcidin mRNA表达量升高到 正常值的4-5倍。杨梅素能够减弱BMP6的刺激作用，Hepcidin mRNA 的表达量仅为正常值的40%（图2A）。Western Blot结果显示，BMP6可 明显增加Smad1/5/8蛋白磷酸化水平，随着杨梅素浓度的增加，BMP6刺 激条件下的磷酸化Smad1/5/8蛋白表达水平亦显著降低（图2C）。

细胞因子IL-6主要在炎症状态下通过JAK-STAT信号通路激活 Hepcidin表达。为了评价杨梅素在炎症状态下对Hepcidin的抑制作用， 我们将杨梅素（50μg/mL）先于IL-6（50ng/mL）15min加入到HepG2细 胞的培养液中，培养12小时后，检测Hepcidin mRNA表达量。结果与抑 制BMP6相似，IL-6可使Hepcidin mRNA表达量升高到正常值的2倍。 杨梅素能够减弱IL-6的刺激作用，使Hepcidin mRNA的表达量仅为正常 值的22%（图2B）。Western Blot结果显示，IL-6可明显增加JAK-STAT 信号通路Stat3蛋白磷酸化水平及Smad1/5/8蛋白磷酸化水平。随着加入 杨梅素浓度的增加，IL-6条件刺激下的磷酸化Smad1/5/8蛋白表达水平亦 显著降低，而Stat3蛋白磷酸化水平未有变化（图2D）。

由此推测杨梅素抑制IL-6诱导Hepcidin表达的作用，不是直接通过 抑制Stat通路发挥作用，而是通过抑制Smad通路间接实现。这更进一步 证实，杨梅素抑制铁调素Hepcidin表达的潜在靶点可能为BMP-SMAD 信号通路中Smad1/5/8蛋白。

2.3杨梅素抑制HAMP基因的转录

利用HEK293细胞株，按照HD Transfection  Reagent-Promega转染系统，共同转染HAMP-promoter2.7kb-pGL3和内参 Renilla报告基因质粒。共转24h后，处理不同浓度的杨梅素，终浓度分 别为10ug/ml、20ug/ml、50ug/ml、100ug/ml。处理24h后，裂解收集细 胞，离心取上清，用Dual-Luciferase Reporter Assay System测定裂解细胞 上清内Luciferase（HAMP Luc和Renilla Luc）活性，计算HAMP Luc/Renilla  Luc比值。实验发现，杨梅素随着浓度的增加能显著抑制HAMP Luc的相 对活性，20ug/ml的浓度时，HAMP Luc的相对活性已不足对照组的10% （图3A）。此外，杨梅素对HAMP基因转录的抑制呈现出时间依赖， 50ug/ml浓度处理下，6小时后，HAMP Luc的相对活性显著下降（图3B）

为了探讨杨梅素分别对BMP6和IL-6诱导条件下HAMP基因转录的 抑制效果，我们将不同浓度的杨梅素（0-100μg/mL）分别先于BMP6（10 ng/mL）30min，先于IL-6（50ng/ml）15min加入到转染后的HEK293细 胞培养液中，24小时后，同样利用双荧光素酶检测报告基因检。

实验发现，BMP6可使HAMP Luc相对活性升高到约为正常值的2.5 倍，显著增强HAMP基因的转录水平。不同浓度的杨梅素能够减弱BMP6 的该种刺激作用，甚至使BMP6对HAMP基因转录的诱导作用消失 （20-100μg/mL），HAMP Luc相对活性约为正常值的7%（图3C）。与 BMP6结果相似，IL-6可使HAMP Luc相对活性升高到正常值的3.5倍。 不同浓度的杨梅素能够减弱IL-6的该种刺激作用（20-100μg/mL），较高 浓度的杨梅素甚至使IL-6对HAMP基因转录的诱导作用降至约为正常值 的10%（图3D）。基于此，我们推测杨梅素可通过抑制HAMP基因的转 录影响到铁调素Hepcidin的表达。

2.4杨梅素腹腔给药能抑制小鼠体内HAMP1基因表达，增加血清铁水平

6-8周龄C57BL/6雄性小鼠随机分组后，通过腹腔注射每天杨梅素 40mg/kg处理小鼠24小时，检测肝脏组织Hepcidin mRNA表达水平，血 清铁等变化情况。结果发现，给药24小时，小鼠肝脏Hepcidin表达明显 下降（图4A）。通常与肝脏Hamp1基因表达一致的Bmp6、Id1，也均受 到了抑制效果（图4B、4C）。

血清铁呈上升趋势（图4D）。此外，每天通过腹腔注射20mg/kg杨 梅素，给药7天，与对照组比较，展现出一致的效果，Hamp1、Bmp6、 Id1均受到了显著性的抑制（图5A、5B、5C）。7天后，小鼠机体血清铁 水平显著增加（5D），肝脏铁、脾脏铁水平显著降低（图5E、5F）。特别 的，杨梅素腹腔给药7天（每天20mg/kg，每组6-8只），杨梅素能显著改善机体 的造血功能，小鼠红细胞、血红蛋白、红细胞压积均有显著性升高（表1）。

表1：杨梅素腹腔给药1周、显著改善正常小鼠机体的造血功能

2.5杨梅素膳食能抑制小鼠体内Hamp1基因表达，促进机体的造血功能

6-8周龄C57BL/6雄性小鼠随机分组后，喂饲含杨梅素3‰的混合饲 料。分别处理0，15和30天，5%水合氯醛腹腔麻醉后，心脏采血，送于 上海市徐汇区中心医院进行血常规检测。15天起，小鼠肝脏Hamp1、 Bmp6、Id1水平均受到了不同程度的抑制（图6A、6B、6C）。此外，血 常规结果发现，膳食喂养30天，小鼠肝脏Epo水平显著增加（图6D）， 小鼠红细胞、血红蛋白、红细胞压积均有显著性升高（表2）。

表2：杨梅素膳食能促进机体的造血功能

基于此，可验证之前的设想，杨梅素或可通过影响肝脏铁调素 Hepcidin的表达，进而改善机体铁代谢的状态，增加机体铁的动员，进而 改善机体的造血功能，从而发挥补血的功能。

2.6杨梅素能显著改善急性脂多糖LPS对小鼠机体铁水平的影响

炎症是造成机体贫血的常见因素，为了探讨杨梅素对炎症刺激下小鼠 铁代谢的改善效果。我们将6-8周龄C57BL/6雄性小鼠随机分组后：正 常组、脂多糖LPS组、脂多糖LPS+杨梅素组。杨梅素组（10mg/kg）每 天通过腹腔给药，正常组、脂多糖LPS组分别给予空白对照。5天后，脂 多糖LPS按2.5mg/kg分别处理脂多糖LPS组、脂多糖LPS+杨梅素组， 正常组予以0.9%生理盐水对照处理。6小时后，5%水合氯醛腹腔麻醉后， 心脏采血、取样，血液送于上海市徐汇区中心医院进行血常规检测。

小鼠在脂多糖的刺激下，小鼠肝脏Hamp1水平显著增加，约为正常 值的2倍，而杨梅素能显著抑制该刺激，使其水平与正常值无显著差异（图 7A）。此外，脂多糖LPS的急性刺激，能显著降低机体的血清铁水平、转 铁蛋白饱和度，杨梅素能显著改善机体血清铁及转铁蛋白度的降低（图 7B、7C）。并且，杨梅素能显著抑制脂多糖LPS引起的脾脏铁增加（图 7D）。此外，血常规检测结果，同样发现杨梅素能显著改善小鼠的造血功 能（表3）。

表3：杨梅素能显著改善急性脂多糖LPS对小鼠机体铁水平的影响

组间没有相同字母，表示有显著性差异，P＜0.05。

2.7高铁膳食下，杨梅素能显著增加机体的铁动员

为了进一步探讨杨梅素对高铁刺激下小鼠铁代谢的改善效果。我们将 6-8周龄C57BL/6雄性小鼠随机分组后：正常组、高铁膳食组、高铁膳食 +杨梅素组。杨梅素组（20mg/kg）每天通过腹腔给药，正常组、高铁膳 食组分别给予空白对照。5天后，5%水合氯醛腹腔麻醉后，心脏采血、 取样。

小鼠在高铁的刺激下，小鼠肝脏Hamp1水平显著增加，约为正常值 的5倍，而杨梅素未能显著抑制该刺激（未展示）。高铁膳食，小鼠的血 清铁、转铁蛋白饱和度略有降低，机体的肝脏铁、脾脏铁均显著升高，而 杨梅素处理组，能显著改善高铁刺激引起的这些变化，杨梅素能显著增加 机体的血清铁、转铁蛋白饱和度（图8A、8D），抑制高铁膳食带来的肝 脏铁（图8B）、脾脏铁的上升（图8C）。

基于此，可进一步证实，在高铁条件下，杨梅素能显著促进机体的铁 动员水平。