含白皮杉醇组合物及含有该含白皮杉醇组合物的饮食品和化妆品

技术领域

本发明涉及一种来自西番莲果（passion fruit）种子的含有白皮杉 醇的含白皮杉醇组合物以及含有该含白皮杉醇组合物的饮食品和化 妆品。

背景技术

下述非专利文献1中，记载了来自葡萄的多酚类化合物白藜芦醇 （Resveratrol）及白皮杉醇（Piceatannol）具有抑制黑色素生成细胞 生成黑色素的作用。但是，其作用效果的确认试验使用的是市售的试 剂，且对于从葡萄等天然物中获取含有白皮杉醇等的组合物没有记 载。

另外，下述专利文献1中记载了从虎杖（Reynoutria japonica  Houtt.var.japnica）根的提取物中廉价地进行有选择性且有效的白藜芦 醇的浓缩回收；下述专利文献2中记载了含有白藜芦醇的越橘提取 物；下述专利文献3、4中记载了西番莲果（西番莲科，passiflora sp.） 的提取物，特别是西番莲果的果皮的提取物，并记载了其提取物在食 品、营养辅助食品、以及医学上的使用。

但是，上述文献的技术都是从天然物中获得的组合物，不能提供 含有较高的白皮杉醇的物质。

先行技术文献

专利文献

专利文献1：日本特许公开2005‐281179号公报

专利文献2：日本特许公开2009‐13159号公报

专利文献3：日本特许公开2007‐302659号公报

专利文献4：日本特许公布2007‐531734号公报

非专利文献

非专利文献1：Takako Yokozawa and You Jung Kim,Piceatannol  Inhibits Melanogenesis by Its Antioxidative Actions,Biological& PharmaceuticaI Bulletin Vol.30(2007)No.11p2007‐2011

从有关食品安全的一般观念出发，添加在功能性食品及健康食品 等饮食品中的白皮杉醇，最好是来自天然物。但是，以住我们没有发 现含有丰富的白皮杉醇的天然物，另外，从葡萄等天然物中仅能获取 含有量非常低的组合物。

因此，本发明的目的在于，提供一种来自天然物的、含有较高的 白皮杉醇的含白皮杉醇组合物及含有该含白皮杉醇组合物的饮食品 和化妆品。

发明内容

本发明的发明人为达到上述目的，经过锐意研究，发现以往因毫 无用途而被废弃的西番莲果种子中含有丰富的白皮杉醇，从而完成了 本发明。

即，本发明的含白皮杉醇组合物是从西番莲果种子中获得，其特 征在于以大于10至99.9质量%的含有量含有白皮杉醇。

通过本发明的含白皮杉醇组合物，可以提供来自天然物的、以较 高的含有量含有白皮杉醇的组合物。而且，由于是来自天然物的组合 物，因而可以将其用于化妆品、医药品、以及功能性食品、健康食品 等的饮食品中。

另外，本发明的含白皮杉醇组合物的制备方法的特征在于，将西 番莲果种子粉碎后，添加从含水醇系溶媒及含水酮系溶媒中选择的至 少1种溶媒进行搅拌，从该溶媒含有的西番莲果种子中提取白皮杉 醇。

通过本发明的含白皮杉醇组合物的制备方法，在从西番莲果种子 中提取白皮杉醇时，由于使用含水醇系溶媒或含水酮系溶媒，因而可 以以较高的生成率制备来自天然物的、以较高的含有量含有白皮杉醇 的组合物。

在本发明的含白皮杉醇组合物的制备方法中，将西番莲果种子粉 碎后，添加含水醇系溶媒及含水酮系溶媒中的任一种溶媒进行搅拌， 从该溶媒含有的西番莲果种子中提取白皮杉醇获得第1提取物，再在 未作为所述提取物回收的残渣中，添加含水醇系溶媒及含水酮系溶媒 中的上述未选择的溶媒进行搅拌，从该溶媒含有的西番莲果种子中提 取白皮杉醇获得第2提取物，随后将所述第1提取物和第2提取物混 合。通过这种方式，使用多种溶媒进行阶段性的提取，因而可以以更 高的生成率制备含有大量白皮杉醇的含白皮杉醇组合物。

在本发明的含白皮杉醇组合物的制备方法中，所述西番莲果种子 最好是西番莲果的生的种子、或是将西番莲果的生的种子干燥后的种 子。

另外，在本发明的含白皮杉醇组合物的制备方法中，所述含水醇 系溶媒最好为含水乙醇，或，所述含水酮系溶媒最好为含水丙酮。关 于其含水率，含水乙醇最好为含有20～99.9体积%的乙醇；含水丙酮 最好为含有20～99.9体积%的丙酮。通过这样的形态，可以提高白皮 杉醇的提取效率。

在本发明的含白皮杉醇组合物的制备方法中，所述在各溶媒中的 搅拌，最好以超声波振动或振荡进行。通过这种形态，可以提高白皮 杉醇的提取效率。

另外，在本发明的含白皮杉醇组合物的制备方法中，在提取后， 最好通过减压蒸馏将溶媒去除。

另外，本发明还涉及一种饮食品，其中添加了从西番莲果种子中 获得的、以0.0001～99.9质量%的含有量含有白皮杉醇的含白皮杉醇 组合物。

另外，本发明还涉及一种化妆品，其中添加了从西番莲果种子中 获得的、以大于10至99.9质量%的含有量含有白皮杉醇的含白皮杉 醇组合物。

通过本发明的含白皮杉醇组合物，可以提供来自天然物的、以较 高的含有量含有白皮杉醇的组合物。而且，由于是来自天然物的组合 物，因而可以应用于化妆品、医药品、以及功能性食品、健康食品等 饮食品中。另外，通过本发明的含白皮杉醇组合物的制备方法，作为 从西番莲果种子中提取白皮杉醇的溶媒，使用的是含水醇系溶媒或含 水酮系溶媒，从而可以以较高的生成率制备来自天然物的、含有大量 白皮杉醇的组合物。另外，可以通过属于含水醇系溶媒或含水酮系溶 媒的多种溶媒进行阶段性的提取，从而以更高的生成率进行制备。

附图说明

图1是表示从种子（A）果皮（B）及果肉（C）中提取的提取物 的HPLC色谱的图表；

图2是表示在图1的HPLC分析中在41分附近溶出的成分的MS 光谱图（A）及UV光谱图（B）的图表；

图3是表示白藜芦醇（Resveratrol，分子量228）的MS光谱图（A） 及UV光谱图（B）的图表；

图4是表示白皮杉醇（Piceatannol，分子量244）的MS光谱图 （A）及UV光谱图（B）的图表；

图5是表示乙醇（A）或丙酮（B）的含水率对白皮杉醇的提取效 率的影响的图表。

具体实施方式

本发明的含白皮杉醇组合物是从西番莲果种子中获得的组合物， 以0.0001～99.9质量%的含有量含有白皮杉醇。其形状可以为液状、 固状、半固状、凝胶状等，另外，西番莲果种子可以是该种子本身及 将种子粉碎后的糊状物、或是将种子冻干粉碎后的粉末等的种子加工 物。白皮杉醇的固态换算含有量，可以为0.0001～99.9质量%、更理 想的是0.01～50质量%、最理想的是0.1～10质量%。

白皮杉醇（Piceatannol）以下述化学式（1）表达。

[化1]

上术化学式表达的白皮杉醇，是2个苯基以反式的烯基连接的结 构，是反式的白皮杉醇，但在本发明中，白皮杉醇（Piceatannol）的 概念，是在上述化学式中还包含2个苯基以顺式的烯基连接的结构的 顺式白皮杉醇。

西番莲果是西番莲科西番莲属的植物，别名：鸡蛋果，果实酸甜 可口，可作为水果直接食用，也可将其榨取果汁饮用，或添加至果冻、 糕点等饮食品中增加味道。西番莲果的种子较硬，在榨取果汁等时需 要将其从果实中去除，即使将果实的种子一同加入饮食中，也会因其 外皮过硬难以消化而被直接排泄。本发明是在发现以往因毫无用途而 被废弃的西番莲果种子中含有丰富的白皮杉醇的基础上的发明。另 外，本发明中使用的西番莲果种子，由以往的食用西番莲果的经验可 以证明，即使将其添加在功能性食品及健康食品等饮食品中，也不会 存在安全性的问题。

本发明的含白皮杉醇组合物，最好是将例如生的、或是干燥后的 西番莲果种子粉碎后，使用不同溶媒进行提取的方法获得。为了提高 提取效率，也可适当对西番莲果种子实施酸或碱分解、酶分解等化学 处理后再进行提取。另外，通过下述说明的本发明的含白皮杉醇组合 物的制备方法，可以以较高的生成率获得含有大量白皮杉醇的组合 物，因此最好使用该方法获取。

下面对本发明的含白皮杉醇组合物的制备方法进行说明。

在本发明的含白皮杉醇组合物的制备方法中，首先将西番莲果种 子粉碎。西番莲果种子可以使用生的、或是干燥后的西番莲果种子， 为了提高提取效率，也可适当对西番莲果种子实施酸或碱分解、酶分 解等化学处理后再进行提取。粉碎处理可以使用通用的粉碎机进行。 另外，由于西番莲果种子中油分较多，粉碎后可能会呈糊状。

随后，在粉碎后的西番莲果种子中添加从含水醇系溶媒及含水酮 系溶媒中选择的至少一种溶媒进行搅拌，从该溶媒中提取白皮杉醇。

含水醇系溶媒可以使用乙醇、甲醇、丙醇等含水溶媒，其中最好 使用含水乙醇。另外，含水酮系溶媒可以使用丙酮、丁酮、二乙基甲 酮、氯丙酮等含水溶媒，其中最好使用含水丙酮。

关于其含水率，含水乙醇可以为包含20～99.9体积%的乙醇，更 理想的是包含40～99.9体积%的乙醇，最理想的是包含60～80体积% 的乙醇；含水丙酮可以为包含20～99.9体积%的丙酮，更理想的是包 含40～99.9体积%的丙酮，最理想的是包含60～80体积%的丙酮。如 果超出上述范围，可能会导致提取效率下降。另外，为了将含水溶媒 的含水率表述简单化，以下将例如含水20体积%的80体积%乙醇表 述为“80%含水乙醇”，将例如含水30体积%的70体积%乙醇表述为 “70%含水乙醇”，再例如将含水30体积%的70体积%丙酮表述为 “70%含水丙酮”。

在本发明的含白皮杉醇组合物的制备方法中，在上述各溶媒中的 搅拌，最好使用超声波振动或振荡进行。这样可以让已粉碎并与上述 各溶媒接触的西番莲果种子有效振动，从而可以提高从西番莲果种子 向上述各溶媒中提取白皮杉醇的提取效率。超声波振动可以使用通用 的超声波装置进行。另外，振荡也可以使用通用的振荡装置进行。

另外，在本发明的含白皮杉醇组合物的制备方法中，提取后，最 好使用减压蒸馏法去除上述溶媒。这样组合物中就不会包含有机溶 媒，作为向功能性食品及健康食品等饮食品中添加的食品材料，可以 符合其安全性的标准等。

在本发明的含白皮杉醇组合物的制备方法中，可以通过多种溶媒 进行阶段性的提取。这样可以以更高的生成率制备含有大量白皮杉醇 的含白皮杉醇组合物。

具体是，例如将西番莲果种子粉碎后，添加所述含水醇系溶媒及 所述含水酮系溶媒中的任一种溶媒进行搅拌，从该溶媒中提取白皮杉 醇获得第1提取物。通过离心等方式将提取物和未被作为提取物回收 的残渣分离，在残渣中添加所述溶媒中未被选择的另一种溶媒进行搅 拌，从该溶媒中提取白皮杉醇获得第2提取物。随后将所述第1提取 物和第2提取物混合。当然，该第2提取物也可单独作为西番莲果种 子的提取物进行利用。

另外，西番莲果种子由于接受了通过所述含水醇系溶媒或所述含 水酮系溶媒的第1提取处理，其结构等的特性因提取而变得更加适 宜，所以在接下来的第2提取处理时，无论使用所述含水醇系溶媒或 所述含水酮系溶媒、还是使用此外的其它溶媒，均可期待其提取效率 得到改善。而且，如后述的实施方式所述，所述含水醇系溶媒或所述 含水酮系溶媒的提取效率是基于其含水，所以在用水或水溶性溶媒对 西番莲果种子进行第1提取处理后，在接下来的第2提取处理时，无 论使用所述含水醇系溶媒或所述含水酮系溶媒、还是使用此外的其它 溶媒，均可期待其提取效率得到改善。

通过上述方法获得的西番莲果种子的提取物，可直接或将其浓缩 的液体状的物质作为含白皮杉醇组合物。也可通过冷冻干燥或喷雾干 燥将其粉末化，将粉末状的物质作为含白皮杉醇组合物。另外，本发 明不限于这些形态。可将提取物中所含的不溶物适当通过过滤等方式 去除，也可将不溶物再粉碎，形成微细粒子状。

另外，对于按上述方法获得的西番莲果种子的初次提取物，可以 通过离子交换、尺寸排阻色谱法、HPLC法、凝胶过滤、膜分离等方 法，将白皮杉醇按指标进行分级、精制后，将其作为含白皮杉醇组合 物。

具体是，例如后述的实施所示，将从西番莲果种子中提取的组合 物在下述条件下使用HPLC法，白皮杉醇在41分附近被溶出。另外， 对该溶出部分通过质量分析装置进行质谱（mass spectrum）测定，负 离子模式的信号呈m/z243。

[HPLC条件]

·柱：Mightysil RP‐18GP150‐4.6径4.6mm、长150mm（关东 化学株式会社）

·柱温度：40℃

·溶出条件：流速1ml/min，0%甲醇→30%甲醇（60min）

·UV检测：280nm

这样，在本发明中，以上述示例的白皮杉醇的物性为指标进行适 当分级、精制，从而可以制备提高了白皮杉醇的含有量的、来自西番 莲果种子的含白皮杉醇组合物。

本发明的含白皮杉醇组合物，根据需要可添加药物学容许的基质 或载体，形成片剂、颗粒剂、散剂、液剂、粉末、颗粒、胶囊剂、胶 状剂等的形态用于医药，此外，还可形成软膏剂、乳霜剂、凝胶、面 膜、化妆水、保湿品等形态用于化妆品。

另外，本发明的含白皮杉醇组合物，还可添加至特定保健用食品、 营养辅助食品、功能性食品等以供摄取。这样的食品例如有巧克力、 饼干、口香糖、糖果、曲奇饼、果冻、压缩饼干等的糕点类食品；谷 类食品；粉末饮料、清凉饮料、乳饮料、营养饮料、碳酸饮料、凝胶 饮料等的饮料；冰淇淋、冰糕等的冰点。另外，荞麦面、面食、面条、 挂面等的面类也是很好的例子。另外，特定保健用食品及营养辅助食 品等可以是粉末、颗粒、胶囊、糖浆、片剂、糖衣剂等的形态。

实施例

下面通过实施例对本发明进行具体说明，但本发明的范围并不以 这些实施方式为限。

<试验例1>[西番莲果中的白皮杉醇的检测及同定]

将西番莲果分为果皮、果肉、种子3个部位，分别进行冷冻干燥， 用粉碎机（商品名“samplemil型式SK‐M”，协立理工株式会社）粉 碎后，用80%含水乙醇对各部位进行提取。远心后取上层清液，用蒸 发器浓缩后，进行冷冻干燥形成粉末。将该粉末溶于水即为提取物。 随后，将各个固态的浓度进行稀释，种子提取物稀释至0.01g/ml，果 皮提取物或果肉提取物稀释至0.1g/ml，并各取5μl进行HPLC分析。

HPLC的分析条件如下：

·柱：Mightysil RP‐18GP150‐4.6径4.6mm，长150mm（关东 化学株式会社制）

·柱温度：40℃

·溶出条件：流速1ml/min，0%甲醇→30%甲醇（60min）

·UV检测：280nm

图1A～图1C表示的是上述各提取物的HPLC色谱。其结果如图 1A所示，种子提取物在41分附近达到峰。与此相比，果皮及果肉的 提取物，虽然注入的固态浓度是种子提取物的10倍，但在41分附近 未确认峰。

接下来，对种子提取物在上述保持时间41分附近溶出的成分是 什么物质进行下述的同定。

首先，使用HPLC/质量分析装置（THERMO ELECTRON株式会社制， 装置名称“Thermo‐LCQ‐MS/MS”）测定其质谱（图2A）。通过阳极、 阴极两种离子模式进行确认，在阴极发现了良好的离子，所以使用其 数据。其结果是，主要信号m/z243为（M‐H）^‐，其它峰m/z279属于 （M+2H₂O‐H）^‐，m/z487属于（M×2‐H）^‐。因此决定了分子量为244。 另外，取UV光谱，作为λmax，观察到220nm、304nm、322nm（图 2B）。

这些质谱及UV光谱的结果，与花生皮所含的多酚——白藜芦醇 （Resveratrol，分子量228）类似（参照图3A、B）。另外，还另行确 认了向吸附多酚的树脂聚乙烯吡咯烷酮（PVPP： polyvinylpolypyrrolidone）的吸附。另外，上述41分附近的峰与相同 HPLC条件下的白藜芦醇的保持时间相比，向反相柱的保持时间较短。 综上所述，上述种子提取物在保持时间41分附近溶出的成分，是比 白藜芦醇大1个分子量的羟基的、下述式（1）所示的白皮杉醇 （Piceatannol，分子量244）。

[化2]

因此，对白皮杉醇的纯化合物（SIGMA公司制）在与上述相同条 件下进行了HPLC分析，再次获得质谱及UV光谱（图4A、B）。其结 果是，在HPLC的保持时间及质谱和UV光谱的归属完全一致。

由此可以确认，上述种子提取物在上述HPLC分析中的41分附近 的峰是白皮杉醇的峰，西番莲果的种子中含有大量的白皮杉醇。另外， 西番莲果的果皮及果肉中未检测出白皮杉醇。

<试验例2>[从西番莲果种子中提取白皮杉醇1]

我们对从西番莲果种子中提取白皮杉醇的方法进行了研究。具体 是使用不同的溶媒，对从国内产及国外产的2种西番莲果的种子中提 取白皮杉醇的效率进行了确认。

（1）使用80%含水乙醇的提取

在5g粉碎的种子中加入80%含水乙醇50ml，在30分钟超声波 振动的同时进行提取。回收其上层清液后，重复2次同样的操作，共 计进行3次提取。随后将回收的提取液集中，将获得的提取液以80% 含水乙醇定容至200ml，将其10μl进行HPLC分析。随后，按常用方 法，从HPLC分析的峰下面积开始，将其作为标准品浓度的测量线， 从而对提取物中所含的白皮杉醇的量进行定量。另外，为了进行参考， 对白藜芦醇也同样定量。

（2）使用70%含水丙酮的提取

在上述用80%含水乙醇提取后的提取残渣中，加入70%含水丙酮 50ml，在30分钟超声波振动的同时进行提取。回收其上层清液后， 重复2次同样的操作，共计进行3次提取。随后将回收的提取液集中， 将获得的提取液以70%含水丙酮定容至200ml，与上述同样，对提取 物中所含的白皮杉醇及白藜芦醇的量进行定量。

（3）使用乙酸乙酯的提取

将溶媒更换为乙酸乙酯，与上述使用80%含水乙醇的提取同样， 对西番莲果（上述外国产）的种子进行提取，将从冷冻干燥后的5g 种子粉末中提取的白皮杉醇及白藜芦醇的量进行定量。

（4）使用二氯甲烷（dichloromethane）的提取

将溶媒更换为二氯甲烷，与上述使用80%含水乙醇的提取同样， 对西番莲果（上述外国产）的种子进行提取，将从冷冻干燥后的5g 种子粉末中提取的白皮杉醇及白藜芦醇的量进行定量。

将结果整理后如下述表1所示。另外，在该表1中，提取效率的 结果，是换算为从冷冻干燥后的100g种子粉末中提取的白皮杉醇的 量或白藜芦醇的量进行表示的。

[表1]

如表1所示，即使在使用80%含水乙醇提取后的提取残渣中，与 使用80%含水乙醇的提取相比，仍然提取了更多的白皮杉醇。另外， 单独使用乙酸乙酯的提取效率较低，单独使用二氯甲烷进行提取时， 未能检测出白皮杉醇及白藜芦醇。由此可知，使用70含丙酮进行提 取的效率最好。另外还可以知道，将使用80含水乙醇的提取与70% 含水丙酮的提取并用，可以获得更好的提取效率。

<试验例3>[从西番莲果种子中提取白皮杉醇2]

我们对从西番莲果种子中提取白皮杉醇的方法进行了进一步的 研究。具体是对作为溶媒的乙醇及丙酮的含水率对提取效率的影响进 行了确认。

为此，我们使用不同含水率的乙醇或丙酮作为溶媒，与上述试验 例2同样，对从西番莲果（上述外国产）冷冻干燥后的5g种子粉末 中提取的白皮杉醇及白藜芦醇的量进行定量。另外，在上述试验例2 中使用的溶媒乙酸乙酯及二氯甲烷，由于其与水的相溶性较低，均未 能调制出同样含水率的溶媒。

将结果整理后如下述表1所示。另外，在图5中，将白皮杉醇的 结果整理成图表。另外，在该表2和图5中，提取效率的结果，均是 换算为从冷冻干燥后的每100g种子粉末中提取的白皮杉醇的量或白 藜芦醇的量进行表示的。

[表2]

*：无数据

如表2、图5所示，使用乙醇时，使用80%含水乙醇的提取最为 有效。另外，在使用丙酮时，使用70%含水丙酮的提取最为有效。

<试验例4>

称量在上述试验例2中除去溶媒后的提取物（来自上述外国产）， 算出固态白皮杉醇含量。其值如表3所示。

[表3]

如表3所示，使用80%含水乙醇提取时，白皮杉醇的固态部分浓 度为2.6mg/100mg提取物（2.6质量%）。另外，在使用80%含水乙醇 提取后使用70%含水丙酮提取时，为3.7mg/100mg提取物（3.7质量 %）。因此，使用70%含水丙酮提取可以获得更多的白皮杉醇（如试验 例2、3所示），同时，白皮杉醇的纯度也更高。