模仿人EPO的铰链核心模仿体、组合物、方法和用途

                 发明背景

发明领域

本发明涉及模仿哺乳动物EPO的铰链核心模仿体(mimetibodies)，对生物活性的蛋白、片段或配体特异性的特定部分和变体，模仿EPO的铰链核心模仿体的编码和互补核酸，宿主细胞，和其制备和使用方法，包括治疗制剂、施用和装置。

相关领域

重组蛋白是一类新兴的治疗剂。这样的重组治疗剂在蛋白制剂和化学修饰方面具有进步。这样的修饰可以潜在地增强治疗蛋白的治疗效用，例如通过提高半衰期(例如，通过阻断它们暴露于蛋白水解酶)，增强生物活性，或减少不希望的副作用。一种这样的修饰是，使用融合到受体蛋白上的免疫球蛋白片段，例如enteracept。还已经使用Fc结构域构建了治疗蛋白，以尝试提供更长的半衰期，或整合如下功能，例如Fc受体结合、A蛋白结合和补体结合。哺乳动物造血系统的一个特异性的和关键的作用是，生产红血球或红细胞，其能将氧转运到动物身体的各种组织。生产红血球的过程(“红细胞生成”)连续地发生在动物整个生活期限，以弥补红血球破坏。一般的红细胞具有相对较短的生活期限，通常100-120天。红细胞生成是精确控制的生理机理，由此生产足够数目的红血球，以确保合适的组织氧合作用，但是不会多到阻碍循环。

现在，已知红细胞生成主要由多肽促红细胞生成素(EPO)控制，后者是一种酸性糖蛋白。作为表达位于哺乳动物染色体中的单拷贝基因的结果，生成促红细胞生成素。重组人EPO(“rHuEPO”)的氨基酸序列基本上与从人尿来源得到的EPO的氨基酸序列相同。但是，rHuEPO的糖基化与尿EPO和人血清EPO的糖基化不同。

在健康的哺乳动物中，EPO以非常低的浓度存在于血浆中，因为现有数目的循环红血球足以氧合组织。EPO的存在会刺激新的红血球的生成，以替代在老化过程中损失的那些。另外，在缺氧的条件下，会刺激EPO生成，其中向身体组织的氧供给减少到低于正常的生理水平，尽管血液对组织进行足够的灌注。缺氧的原因可以是：出血、辐射诱发的红血球破坏、各种贫血、高海拔或长期无意识。相反地，当循环的红细胞的数目超过了正常的组织氧合所需时，会减少EPO的生产。

但是，某些疾病状态包含异常的红细胞生成。在许多国家，治疗性地使用重组人EPO(rHuEPO)。在美国，美国食品和药品管理局(U.S.Food and Drag Administration)(FDA)已经批准了rHuEPO在治疗与末期肾病有关的贫血中的用途。接受血液透析来治疗该障碍的患者一般患有严重的贫血，后者作为透析治疗的结果，由红血球的破裂和过早死亡造成。EPO也用于治疗其它类型的贫血。例如，可以用EPO治疗化疗诱发的贫血、与脊髓发育不良有关的贫血、与各种先天性障碍有关的贫血、AIDS-有关的贫血和早熟-有关的贫血。另外，EPO可以在其它的领域起作用，例如在下述患者中帮助更迅速地恢复正常的血细胞比容：骨髓移植患者、准备自体输血的患者和患有铁过载障碍的患者。

促红细胞生成素(EPO)是由165个氨基酸和4个糖链组成的糖蛋白激素，其通过结合红血球前体细胞表面上的特异性的受体，起红细胞生成的主要调节剂的作用。该结合会发出它们增殖和向成熟的红细胞分化的信号。促红细胞生成素受体是对促红细胞生成素具有高亲和力的484-氨基酸糖蛋白。对于促红细胞生成素受体，配体诱发的同二聚体化作用可能是控制活化的关键事件之一。

促红细胞生成素具有相对较短的半衰期。在患有CRF的患者中，以与具有约3-4小时循环半衰期的一级动力学相一致的速度，清除静脉内施用的促红细胞生成素。在治疗剂量范围内，可检测水平的血浆促红细胞生成素能维持至少24小时。皮下施用促红细胞生成素后，在5-24小时内达到峰值血清水平，此后缓慢下降。

通过筛选随机的噬菌体展示肽文库对促红细胞生成素受体的亲和力，几个研究组鉴别出了促红细胞生成素的小肽模仿物(peptidomimetics)。这些序列与促红细胞生成素没有同源性。在功能测定中，这些肽中的几种表现出了活性，但是仅仅是重组促红细胞生成素的1/100,000。尽管已经通过制备肽模仿物的共价二聚体或多聚体，进行了提高这些肽的效力的几种尝试，但在摩尔基础上，这些化合物仍然是促红细胞生成素的活性的1/10,000-1/1,000，且具有非常短的半衰期，这使得它们不适用作治疗剂。

因此，需要提供改善的和/或修饰形式的EPO治疗蛋白，其能克服这些和本领域已知的其它问题中的多个。

发明概述

本发明提供了模仿人EPO的铰链核心模仿体，包括修饰的免疫球蛋白、其剪切产物和其它的特定部分和变体，以及模仿EPO的铰链核心模仿体组合物、编码或互补核酸、载体、宿主细胞、组合物、制剂、装置、转基因动物、转基因植物和其制备和使用方法，如本文所述和/或使得成为可能的，与本领域所已知的相组合。

本发明还提供了如本文所述的和/或如本领域已知的至少一种分离的模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体。模仿EPO的铰链核心模仿体可以任选地包含至少一个CH3区域，后者直接连接到至少一个CH2区域，后者直接连接到至少一个铰链区或其片段的至少一部分(H)，后者直接连接到任选的接头序列(L)，后者直接连接到至少一个模仿EPO的治疗肽(P)，后者任选地进一步直接连接到至少一个可变的抗体序列的至少一部分(V)。在一个优选的实施方案中，为一对具有任选的N-末端抗体序列的CH3-CH2-铰链-接头-治疗肽，该对任选地通过缔合或共价连接相连，例如，但不限于，至少一个Cys-Cys二硫键或至少一个CH4或其它的免疫球蛋白序列。在一个实施方案中，模仿EPO的铰链核心模仿体包含式(I)：

((V(m)-P(n)-L(o)-H(p)-CH2(q)-CH3(r))(s)

其中V是免疫球蛋白可变区的N-末端的至少一部分，P是至少一个生物活性的模仿EPO的多肽，L是至少一个接头序列，H是免疫球蛋白可变区的至少一部分，CH2是免疫球蛋白CH2恒定区的至少一部分，CH3是免疫球蛋白CH3恒定区的至少一部分，m、n、o、p、q、r和s可以独立地是0、1或2至10的整数，从而模仿不同类型的免疫球蛋白分子，例如，但不限于IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2、IgM、IgD、IgE或其任何亚类等，或其任何组合。

因而，本发明的模仿EPO的铰链核心模仿体能模仿具有它的固有性质和功能的抗体或免疫球蛋白结构或功能的至少一部分，同时提供了治疗肽和它的固有的或获得的体外、体内或原位性质或活性。本发明的抗体的各个部分和至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体的治疗肽部分，可以与本领域所已知的共同如本文所述变化。

在一个方面，本发明提供了分离的核酸分子，其包含能编码特异性的模仿体或其特定部分或变体的多核苷酸、与所述多核苷酸互补、与所述多核苷酸具有显著的同一性或能与所述多核苷酸杂交，其包含至少一个指定的序列，其结构域、部分或变体。本发明还提供了包含至少一种所述分离的模仿EPO的铰链核心模仿体核酸分子的重组载体、含有这样的核酸和/或重组载体的宿主细胞以及制备和/或使用这样的模仿EPO的铰链核心模仿体核酸、载体和/或宿主细胞的方法。

至少一种本发明的模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体能模仿模仿体的P部分向至少一个配体的结合，或具有其至少一种蛋白、亚基、片段、部分或任何组合的至少一种生物活性。

本发明还提供了如本文所述和/或如本领域已知的至少一种分离的模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体，其中模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体具有至少一种活性，例如，但不限于与式I的P部分相对应的至少一种生物活性的肽或多肽的已知的生物活性。因而，根据已知的方法，可以筛选模仿EPO的铰链核心模仿体的对应活性，例如至少一种针对蛋白或其片段的中和活性。

本发明还提供了至少一种组合物，其包含(a)至少一种分离的模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的编码核酸和/或如本文所述的模仿EPO的铰链核心模仿体；和(b)合适的载体或稀释剂。根据已知的方法，载体或稀释剂可以任选地是药学上可接受的。组合物还可以任选地包含至少一种其它的化合物、蛋白或组合物。

本发明还提供了至少一种在宿主细胞中表达至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的方法，其包含在能以可检测的和/或可回收的量表达至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的条件下，培养如本文所述和/或如本领域已知的宿主细胞。

当以治疗有效量施用，用于调节、治疗或减少至少一种下述的障碍的症状时，所述障碍为：骨和关节障碍、心血管障碍、牙齿或口的障碍、皮肤病学的障碍、耳、鼻或喉的障碍、内分泌或代谢障碍、胃肠障碍、妇科障碍、肝或胆的障碍、产科障碍、血液学障碍、免疫性或变应性障碍、传染病、肌肉骨骼障碍、肿瘤学障碍、神经学障碍、营养障碍、眼科障碍、儿科障碍、中毒障碍、精神病学障碍、肾障碍、肺障碍或任何其它已知的障碍(见，例如，The Merck Manual，第17版，Merck Research Laboratories，Merck and Co.，WhitehouseStation，NJ(1999)，在本文中全文引作参考)，如在许多不同状况下所需要的，例如但不限于，在如本领域已知的有关疾病或治疗状况之前、之后或期间，本发明还在方法或组合物中提供了至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体，特定部分或变体。

当以治疗有效量施用，用于调节、治疗或减少至少一种下述的疾病的症状时，所述疾病为：在细胞、组织、器官、动物或患者中的免疫的、心血管的、传染性的、恶性的和/或神经的疾病，和/或，如在许多不同状况下所需要的，例如但不限于，在如本领域已知的和/或如本文所述的有关疾病或治疗状况之前、之后或期间，本发明还在方法或组合物中提供了至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体、特定部分或变体。

本发明还提供了送递治疗或预防有效量的根据本发明的至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的至少一种组合物、装置和/或方法。

本发明还提供了本发明的抗至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体的至少一种抗独特型抗体。抗独特型抗体包括含有包含免疫球蛋白分子的至少一部分的分子的任何蛋白或肽，例如但不限于重链或轻链的至少一个互补决定区(CDR)或其配体结合部分、重链或轻链可变区、重链或轻链恒定区、构架区或其任意部分，其能竞争性地结合本发明的至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体的EPO受体结合区。本发明的这种独特型抗体可以包括或源自任意的哺乳动物，例如但不限于人、小鼠、兔、大鼠、啮齿类动物、灵长类动物等。

本发明还提供了至少一种分离的核酸分子，其包含能编码至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体抗独特型抗体的多核苷酸、与所述多核苷酸互补或能与所述多核苷酸杂交，其包含至少一个指定的序列，其结构域、部分或变体。本发明还提供了包含所述的模仿EPO的铰链核心模仿体抗独特型抗体的编码核酸分子的重组载体、含有这样的核酸和/或重组载体的宿主细胞，以及制备和/或使用这样的抗独特型抗体核酸、载体和/或宿主细胞的方法。

本发明还提供了至少一种在宿主细胞中表达至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或模仿EPO的铰链核心模仿体抗独特型抗体的方法，其包含在能以可检测的和/或可回收的量表达至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或抗独特型抗体的条件下，培养如本文所述的宿主细胞。

本发明还提供了至少一种组合物，其包含(a)分离的模仿EPO的铰链核心模仿体的编码核酸和/或如本文所述的模仿EPO的铰链核心模仿体；和(b)合适的载体或稀释剂。根据已知的载体或稀释剂，载体或稀释剂可以任选地是药学上可接受的。组合物还可以任选地包含至少一种其它的化合物、蛋白或组合物。

本发明还提供了至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体的方法或组合物，用于施用治疗有效量，以调节或治疗细胞、组织、器官、动物或患者中至少一种蛋白有关的状况，和/或，在有关状况之前、之后或期间，如本领域已知的和/或如本文所述的。

本发明还提供了送递治疗或预防有效量的根据本发明的至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体的至少一种组合物、装置和/或方法。

本发明还提供了至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体的方法或组合物，用于诊断细胞、组织、器官、动物或患者中至少一种EPO有关的状况，和/或，在有关状况之前、之后或期间，如本领域已知的和/或如本文所述的。

本发明还提供了送递用于诊断的根据本发明的至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体的至少一种组合物、装置和/或方法。

在一个方面，本发明提供了至少一种分离的模仿人EPO的铰链核心模仿体，其包含至少一个P(n)区域，后者包含SEQ ID NO：1-30中的至少一个的至少一部分，例如，如下面的表1所示，或任选地具有一个或多个替代、缺失或插入，如本文所述或如本领域已知的。在其它方面，本发明提供了至少一种分离的模仿人EPO的铰链核心模仿体，其中模仿EPO的铰链核心模仿体能特异性地结合至少一个表位，后者包含至少一种配体或结合区中的至少1-3个，该配体能结合如下面的表1所示的SEQ ID NO：1-30中的至少一个的至少一部分，或任选地具有一个或多个替代、缺失或插入，如本文所述或如本领域已知的。

所述至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体可以任选地进一步是下面的至少一种：结合蛋白，其具有选自至少10^-9M、至少10^-10M、至少10^-11M或至少10^-12M的至少一种亲和力；基本上中和至少一种蛋白或其部分的至少一种活性。还提供了编码至少一种分离的模仿人EPO的铰链核心模仿体的分离核酸；含有所述分离核酸的分离的核酸载体；和/或含有所述分离核酸的原核或者真核宿主细胞。该宿主细胞可以任选为选自COS-1、COS-7、HEK293、BHK21、CHO、BSC-1、Hep G2、653、SP2/0、293、HeLa、骨髓瘤或淋巴瘤细胞、或者它们的任意衍生的、无限增殖化的或者转化的细胞的至少一种。还提供了产生至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体的方法，其包括在体外、体内或者原位翻译所述模仿EPO的铰链核心模仿体的编码核酸，从而模仿EPO的铰链核心模仿体以可检测的或者可回收的量表达。

还提供了含有至少一种分离的模仿人EPO的铰链核心模仿体和至少一种药学上可接受的载体或者稀释剂的组合物。该组合物可以任选还含有有效量的至少一种化合物或者蛋白，其选自至少一种可检测的标记或者报道分子、抗感染药物、心血管(CV)系统药物、中枢神经系统(CNS)药物、自主神经系统(ANS)药物、呼吸道药物、胃肠(GI)道药物、激素药物、用于流体或者电解质平衡的药物、血液药物、抗癌药、免疫调制药物、眼、耳或鼻药物、局部药物、营养药物、TNF拮抗剂、抗风湿药、肌肉松弛药、麻醉药、非类固醇消炎药(NTHE)、镇痛药、麻醉剂、镇静剂、局部麻醉剂、神经肌肉阻滞剂、抗微生物剂、抗牛皮癣剂、皮质类固醇、促蛋白合成类固醇、促红细胞生成素、免疫剂(immunization)、免疫球蛋白、免疫抑制剂、生长激素、激素替代药、防辐射药物、抗抑郁药、抗精神病药、兴奋剂、哮喘药、β激动剂、吸入类固醇、肾上腺素或类似物、细胞因子或者细胞因子拮抗剂。

本发明还提供了特异结合本发明的至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体的抗独特型抗体或者片段。

还提供了诊断或者治疗细胞、组织、器官或者动物中疾病状况的方法，其包括

(a)将含有有效量的至少一种本发明分离的模仿人EPO的铰链核心模仿体的组合物接触或者施用于细胞、组织、器官或者动物。该方法可以任选还包括使用0.001-50mg/千克细胞、组织、器官或者动物的有效量。该方法可以任选还包括通过至少一种方式接触或者施用，所述方式选自肠胃外、皮下、肌内、静脉内、关节内、支气管内、腹内、囊内、软骨内、腔内、体腔内、小脑内(intracelebellar)、脑室内、结肠内、颈内、胃内、肝内、心肌内、骨内、骨盆内、心包内、腹膜内、胸膜内、前列腺内、肺内、直肠内、肾内、视网膜内、脊柱内、滑膜内、胸内、子宫内、膀胱内、快速灌注、阴道、直肠、口腔、舌下、鼻内或者经皮。该方法可以任选还包括在(a)接触或施用之前、同时或者之后施用至少一种组合物，其含有有效量的至少一种化合物或者蛋白，该化合物或者蛋白选自至少一种可检测的标记或者报道分子、抗感染药物、心血管(CV)系统药物、中枢神经系统(CNS)药、自主神经系统(ANS)药、呼吸道药物、胃肠(GI)道药物、激素药物、用于流体或者电解质平衡的药物、血液药物、抗癌药、免疫调制药物、眼、耳或鼻药物、局部药物、营养药物、TNF拮抗剂、抗风湿药、肌肉松弛药、麻醉药、非类固醇消炎药(NSAID)、镇痛药、麻醉剂、镇静剂、局部麻醉剂、神经肌肉阻滞剂、抗微生物剂、抗牛皮癣剂、皮质类固醇、促蛋白合成类固醇、促红细胞生成素、免疫剂、免疫球蛋白、免疫抑制剂、生长激素、激素替代药、防辐射药物、抗抑郁药、抗精神病药、兴奋剂、哮喘药、β激动剂、吸入类固醇、肾上腺素或类似物、细胞因子或者细胞因子拮抗剂。

还提供了医学装置，其含有至少一种本发明的分离的模仿人EPO的铰链核心模仿体，其中该装置适于通过选自肠胃外、皮下、肌内、静脉内、关节内、支气管内、腹内、囊内、软骨内、腔内、体腔内、小脑内、脑室内、结肠内、颈内、胃内、肝内、心肌内、骨内、骨盆内、心包内、腹膜内、胸膜内、前列腺内、肺内、直肠内、肾内、视网膜内、脊柱内、滑膜内、胸内、子宫内、膀胱内、快速灌注、阴道、直肠、口腔、舌下、鼻内或者经皮的至少一种方式接触或者施用至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体。

还提供了用于人类药物或者诊断用途的制品，其含有包装材料和容器，所述包装材料和容器包含至少一种本发明的分离的模仿人EPO的铰链核心模仿体的溶液或者冻干形式。所述制品可以任选包含作为肠胃外、皮下、肌内、静脉内、关节内、支气管内、腹内、囊内、软骨内、腔内、体腔内、小脑内、脑室内、结肠内、颈内、胃内、肝内、心肌内、骨内、骨盆内、心包内、腹膜内、胸膜内、前列腺内、肺内、直肠内、肾内、视网膜内、脊柱内、滑膜内、胸内、子宫内、膀胱内、快速灌注、阴道、直肠、口腔、舌下、鼻内或者经皮递送装置或者系统的组分的容器。

还提供了生产至少一种本发明的分离的模仿人EPO的铰链核心模仿体的方法，其包含提供能以可回收的量表达模仿EPO的铰链核心模仿体的宿主细胞或转基因动物或转基因植物或植物细胞。在本发明中还提供了通过上述方法生产的至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体。

本发明还提供了至少一种在宿主细胞中表达至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或抗独特型抗体的方法，包含在以可检测的和/或可回收的量表达至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体的条件下，培养如本文所述的宿主细胞。

本发明还提供了本文所述的任意发明。

发明描述

本发明提供了分离的、重组的和/或合成的模仿体或特定部分或变体以及组合物和编码核酸分子，后者包含能编码至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体的至少一种多核苷酸。这样的本发明的模仿体或特定部分或变体包含特异性的模仿EPO的铰链核心模仿体序列、其结构域、片段和特定变体，和制备和使用所述核酸和模仿体或特定部分或变体的方法，包括治疗组合物、方法和装置。

本发明还提供了至少一种如本文所述和/或如本领域已知的分离的模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体。模仿EPO的铰链核心模仿体可以任选地包含至少一个CH3区域，后者直接连接到至少一个CH2区域，后者直接连接到至少一个铰链区或其片段(H)，后者直接连接到任选的接头序列(L)，后者直接连接到至少一个治疗肽(P)，后者任选地进一步直接连接到至少一个可变的(V)抗体序列的至少一部分。

在一个优选的实施方案中，模仿EPO的铰链核心模仿体包含式(I)：

((V(m)-P(n)-L(o)-H(p)-CH2(q)-CH3(r))(s)

其中V是免疫球蛋白可变区N-末端的至少一部分，P是至少一种生物活性肽，L是多肽，其能通过使模仿体具有交替的方向和结合性质而提供结构柔性，H是免疫球蛋白的可变铰链区的至少一部分，CH2是免疫球蛋白CH2恒定区的至少一部分，CH3是免疫球蛋白CH3恒定区的至少一部分，m、n、o、p、q、r和s可以独立地是0、1或2至10之间的整数，从而模仿不同类型的免疫球蛋白分子，例如，但不限于IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgD、IgE等，或其组合。通过缔合或共价连接，例如，但不限于，Cys-Cys二硫键或其它免疫球蛋白序列，可以将m＝1时的单体连接到其它单体上。本发明的模仿EPO的铰链核心模仿体能模仿具有它的固有性质和功能的抗体结构，同时提供治疗肽和它的固有的或获得的体外、体内或原位性质或活性。本发明的抗体的各个部分和至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体的治疗肽部分可以与本领域所已知的共同如本文所述变化。

如本文所使用的，“模仿EPO的铰链核心模仿体”、“模仿EPO的铰链核心模仿体部分”或“模仿EPO的铰链核心模仿体片段”和/或“模仿EPO的铰链核心模仿体变体”等模仿物，具有或能刺激至少一种蛋白的至少一种配体结合或至少一种生物活性，例如体外的、原位的和/或优选体内的配体结合或活性，例如但不限于SEQ ID NO：1-30中的至少一种。例如，合适的本发明的模仿EPO的铰链核心模仿体、特定部分或变体可以结合至少一种蛋白配体，且包括至少一种蛋白配体、受体、可溶的受体等。合适的模仿EPO的铰链核心模仿体、特定部分或变体也可以调节、增加、修饰、激活至少一种蛋白受体信号传导或其它的可测量的或可检测的活性。

用于本发明的方法和组合物中的模仿体的特征在于，合适的向蛋白配体或受体的亲和结合，且任选地和优选地具有低毒性。具体地，在本发明中使用模仿EPO的铰链核心模仿体，其中单独的组分，例如可变区、恒定区(没有CH1部分)和构架的一部分，或其任意部分(例如，可变的重链或轻链的J、D或V区的一部分；至少一个铰链区的至少一部分，恒定的重链或轻链，等)单独地和/或共同地、任选地和优选地具有低免疫原性。可以用于本发明的模仿体任选地特征在于，它们的治疗患者较长的时间的能力，其中具有较好至优良的症状减轻和低毒性。低免疫原性和/或高亲和力，以及其它未定义的性质，可以有助于达到的治疗结果。在本文中，将“低免疫原性”定义为，在小于约75％，或优选地小于约50、45、40、35、30、35、20、15、10、9、8、7、6、5、4、3、2和/或1％的治疗的患者中产生显著的HAMA、HACA或HAHA反应，和/或在治疗的患者中产生低效价(用双抗原酶免疫测定法测得，小于约300，优选地小于约100)(见，例如，Elliott等，Lancet 344：1125-1127(1994))。

实用性

本发明的分离的核酸可以用于生产至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体、其片段或特定变体，其可以用于在细胞、组织、器官或动物(包括哺乳动物和人)中起作用，以调节、治疗、减轻、辅助预防至少一种蛋白有关的状况的发作，或减少其症状，所述的状况选自，但不限于下述的至少一种：免疫障碍或疾病、心血管障碍或疾病、传染性的、恶性的和/或神经性的障碍或疾病、贫血；免疫/自身免疫；和/或癌症/传染病，以及其它的已知的或特定的蛋白有关的状况。

这种方法可以包括对需要症状、效果或者机制中这种调节、治疗、减轻、预防或者减少的细胞、组织、器官、动物或者患者施用有效量的含有至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体的组合物或者药物组合物。该有效量可以包括约0.0001到500mg/kg每单次或多次施用，或者以实现每单次或多次施用的0.0001-5000μg/ml的血清浓度，或者其中的任意有效范围或者值，该有效量可以通过文中描述或者相关领域中公知的公知方法进行和测定。

引用

将文中引用的所有出版物或专利都完整并入本文作为参考，因为它们显示了本发明当前的技术状况和/或提供了对本发明的描述和实现。出版物指任意科学或者专利出版物，或者以任意介质形式，包括所有录音的、电子或者印刷形式得到的任意其他信息。将下面的参考文献完整并入本文作为参考：Ausubel，等人，编著，Current Protocolsin Molecular Biology，John Wiley & Sons，Inc.，NY，NY(1987-2003)；Sambrook，等人，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，2ndEdition，Cold Spring Harbor，NY(1989)；Harlow和Lane，Antibodies，a Laboratory Manual，Cold Spring Harbor，NY(1989)；Colligan，等人，编著，Current Protocols in Immunology，John Wiley&Sons，Inc.，NY(1994-2003)；Colligan等人，Current Protocolsin Protein Science，John Wiley & Sons，NY，NY，(1997-2003)。

本发明的模仿体

模仿EPO的铰链核心模仿体可以任选地包含至少一个CH3区域，后者直接连接到至少一个CH2区域，后者直接连接到至少一个铰链区片段的至少一部分(H)，例如包含至少一个核心铰链区，后者直接连接到任选的接头序列(L)，后者直接连接到至少一个治疗肽(P)，后者任选地进一步直接连接到至少一个可变的抗体序列的至少一部分(V)。在一个优选的实施方案中，一对CH3-CH2-H-L-V，即通过缔合或共价连接连接的对。因而，本发明的模仿EPO的铰链核心模仿体能模仿具有它的固有性质和功能的抗体结构，同时提供了治疗肽和它的固有的或获得的体外、体内或原位性质或活性。本发明的抗体的各个部分和至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体的治疗肽部分，可以与本领域所已知的共同如本文所述变化。

与已知的蛋白相比，本发明的模仿体因而提供了至少一种合适的性质，例如，但不限于，下述的至少一种：提高的半衰期、提高的活性、更高的比活、提高的抗体亲抗原性、提高的或降低的解离速度(offrate)、选定的或更合适的活性亚型、更低的免疫原性、提高的至少一种需要的治疗作用的质量或持续时间、更低的副作用，等。

通过如本领域已知的和/或如本文所述的酶切割、合成或重组技术，可以生产根据式(I)的模仿体片段。使用抗体基因，其中已经将一个或多个终止密码子导入自然的终止位点的上游，也可以以多种截短的形式生产模仿体。通过常规技术，可以化学地将模仿体的各个部分连接到一起，或者可以使用基因工程技术，制备成邻接蛋白。例如，可以表达能编码至少一种人抗体链恒定区的核酸，以生产用于本发明的模仿体中的邻接蛋白。关于单链抗体，见，例如，Ladner等，美国专利号4,946,778和Bird，R.E.等，Science，242：423-426(1988)。

如本文所使用的，术语“人模仿体”指抗体，其中预期仅具有微小的序列变化或改变的基本上蛋白的每个部分(例如，模仿EPO的肽、构架、C_L、C_H结构域(例如，C_H2、C_H3)、铰链、(V_L、V_H))在人类中基本上是非免疫原性的。与未修饰的人抗体或本发明的模仿体相比，这样的变化或改变能任选地且优选地保留或减少在人类中的免疫原性。因而，本发明的人抗体和对应模仿EPO的铰链核心模仿体与嵌合的或人源化的抗体不同。应当指出，能表达人免疫球蛋白(例如，重链和/或轻链)基因的非人的动物或细胞，可以生产人抗体和模仿EPO的铰链核心模仿体。

针对合适的配体，例如分离的和/或EPO蛋白受体或配体，或其一部分(包括合成的分子，例如合成的肽)，可以设计对至少一种蛋白配体或其受体特异性的人模仿体。使用已知的技术，可以制备这样的模仿体，以鉴别和表征至少一种蛋白或其部分的配体结合区或序列。

在优选的实施方案中，由至少一种细胞系、混合的细胞系、无限增殖化的细胞或无限增殖化的和/或培养的细胞的克隆群体，生产至少一种本发明的模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体。使用合适的方法，可以生产无限增殖化的蛋白生产性细胞。优选地，通过提供核酸或载体，其包含来源于的至少一种人免疫球蛋白基因座或具有与所述基因座基本上类似的序列的DNA，生成了至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体，所述的基因座是功能上重排的，或可以经历功能重排，且其还包含如本文所述的模仿体结构，例如，但不限于式(I)，其中C-和N-末端可变区的部分可以用作V，铰链区用作H，CH2用作CH2且CH3用作CH3，如本领域已知的。

如本文所使用的，术语“功能上重排的”是指来自免疫球蛋白基因座的核酸片段，该基因座已经经历了V(D)J重组，从而生产能编码免疫球蛋白链(例如，重链)或其任意部分的免疫球蛋白基因。使用合适的方法，例如，核苷酸测序、使用可以退火至基因片段之间的编码连接的探针的杂交(例如，DNA印迹、RNA印迹)或使用可以退火至基因片段之间的编码连接的引物的免疫球蛋白基因的酶促扩增(例如，聚合酶链反应)，可以直接或间接地鉴别出功能上重排的免疫球蛋白基因。使用合适的方法，也可以确定细胞是否生产了模仿EPO的铰链核心模仿体或部分或变体，其包含特定的可变区或包含特定序列(例如，至少一个P序列)的可变区。

使用至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的编码核酸，以提供转基因的动物或哺乳动物，例如山羊、母牛、马、绵羊等，也可以制备本发明的模仿体、特定部分和变体，所述转基因动物能在它们的乳中生产这样的模仿体或特定部分或变体。使用已知的适用于抗体编码序列的方法，可以提供这样的动物。见，例如，但不限于，美国专利号5,827,690；5,849,992；4,873,316；5,849,992；5,994,616；5,565,362；5,304,489等，其中的每一篇都在本文中整体引作参考。

另外，使用至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的编码核酸，以提供转基因植物和培养的植物细胞(例如，但不限于烟草和玉米)，可以制备本发明的模仿体、特定部分和变体，所述转基因植物和培养的植物细胞可以在植物部分或从它们培养的细胞中生产这样的模仿体、特定部分或变体。作为非限制性的实例，能表达重组蛋白的转基因的烟草叶子已经成功地用于提供大量的重组蛋白，例如，使用诱导型启动子。见，例如，Cramer等人，Curr.Top.Microbol.Immunol.240：95-118(1999)和其中引用的参考文献。转基因玉米也可用于在商业生产水平上表达哺乳动物蛋白，其生物学活性等同于在其他重组系统中产生或者从天然来源纯化的那些蛋白的生物学活性。见，例如，Hood等人，Adv.Exp.Med.Biol.464：127-147(1999)和其中引用的参考文献。已经从转基因植物种子(包括烟草种子和马铃薯块茎)中大量产生了抗体，包括抗体片段，如单链抗体(scFv)。见，例如，Conrad等人，Plant Mol.Biol.38：101-109(1998)和其中引用的参考文献。从而，根据公知的方法使用转基因植物也可以产生本发明的模仿体、特定部分和变体。也见，例如，Fischer等人，Biotechnol.Appl.Biochem.30：99-108(Oct.，1999)，Ma等人，Trends Biotechnol.13：522-7(1995)；Ma等人，Plant Physiol.109：341-6(1995)；Whitelam等人，Biochem.Soc.Trans.22：940-944(1994)；和其中引用的参考文献。将上面的参考文献的每一个都完整并入本文作为参考。

本发明的模仿体可以以宽范围的亲和力(K_D)结合人蛋白配体。在优选实施方案中，至少一种本发明的模仿人EPO的铰链核心模仿体可以任选以高亲和力结合至少一种蛋白配体。例如，至少一种本发明的模仿EPO的铰链核心模仿体可以以等于或者小于约10^-7M的K_D，或者更优选以等于或小于约0.1-9.9(或者其中的任意范围或者值)×10^-7、10^-8、10^-9、10^-10、10^-11、10^-12或10^-13或者其中的任意范围或者值的K_D结合至少一种蛋白配体。

使用任意适宜的方法可以通过实验测定模仿EPO的铰链核心模仿体对至少一种蛋白配体的亲和力或抗体亲抗原性，例如用于确定抗体-抗原的结合亲和力或者抗体亲抗原性。(见，例如，Berzofsky，等人，“Antibody-Antigen Interactions，”In FundamentalImmunology，Paul，W.E.，编著，Raven Press：New York，NY(1984)；Kuby，Janis Immunology，W.H.Freeman and Company：New York，NY(1992)；和其中描述的方法)。如果在不同条件下(例如，盐浓度、pH)测量，那么所测量的具体模仿EPO的铰链核心模仿体-配体相互作用的亲和力可以不同。从而，优选用模仿EPO的铰链核心模仿体和配体的标准溶液，和标准缓冲液，如文中描述的缓冲液进行亲和力和其他配体-结合参数(例如，K_D、K_a、K_d)的测量。

核酸分子

使用本文提供的信息，例如能编码SEQ ID NO：1-30中的至少一种的邻接氨基酸的至少90-100％以及抗体的至少一部分的核苷酸序列，其中插入上面的序列作为式(I)的P序列，以提供本发明的模仿EPO的铰链核心模仿体，还包含特定片段、其变体或共有序列，或保藏的包含这些序列中的至少一种的载体，使用本文所述的或如本领域已知的方法，可以得到本发明的能编码至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的核酸分子。

本发明的核酸分子可以是RNA的形式，如mRNA、hnRNA、tRNA或者任意其他形式，或者为DNA的形式，包括但不限于，通过克隆或合成产生的cDNA和基因组DNA，或它们的任意组合。DNA可以是三链的、双链的或者单链的，或者其任意组合。DNA或者RNA的至少一条链的任意部分可以是编码链，也称作有义链，或者其可以是非编码链，也称作反义链。

本发明的分离的核酸分子可以包括包含可读框(ORF)，任选地具有1个或多个内含子的核酸分子，包含模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的编码序列的核酸分子；和核酸分子，其包含基本上不同于上述的那些的核苷酸序列，但是由于遗传密码的简并性，其仍然能编码如本文所述和/或如本领域已知的至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体。当然，遗传密码是本领域众所周知的。因而，本领域的技术人员能常规地生产这样的简并的核酸变体，其能编码本发明的特异性的模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体。见，例如，Ausubel，等，同上，且这样的核酸变体包含在本发明中。

如文中所指出的，含有编码模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的核酸的本发明的核酸分子可以包括，但不限于，自身编码模仿EPO的铰链核心模仿体片段的氨基酸序列的那些；完整模仿EPO的铰链核心模仿体或者其部分的编码序列；模仿EPO的铰链核心模仿体、片段或部分的编码序列，以及额外序列，如至少一个信号前导序列或者融合肽的编码序列，有或者没有前述额外的编码序列，如至少一个内含子，以及额外的非编码序列，包括但不限于，非编码的5’和3’序列，如在转录、mRNA加工，包括剪接和多腺苷酸化信号(例如，核糖体结合和mRNA的稳定)中起作用的转录的非翻译序列；编码额外的氨基酸，如提供额外功能的氨基酸的额外的编码序列。从而，编码模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的序列可以融合至标记序列，如编码促进含有模仿EPO的铰链核心模仿体片段或部分的融合模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的纯化的肽的序列。

能选择性地杂交如本文所述的多核苷酸的多核苷酸

本发明提供了分离的核酸，其能在选择性杂交条件下与本文公开的多核苷酸或本文公开的其它序列(包括其特定变体或部分)杂交。因而，该实施方案的多核苷酸可以用于分离、检测和/或定量包含这样的多核苷酸的核酸。

对于具有与互补序列相比减少的序列同一性的序列，一般地，但是非排它地采用低或中等严格性杂交条件。对于更大同一性的序列，任选地采用中等和高严格性条件。低严格性条件允许具有约40-99％序列同一性的序列的选择性杂交，且可以用于鉴别直向同源或平行进化同源序列。

任选地，本发明的多核苷酸能编码由本文所述的多核苷酸编码的模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的至少一部分。本发明的多核苷酸包括核酸序列，其可以用于选择性地杂交能编码本发明的模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的多核苷酸。见，例如，Ausubel，同上；Colligan，同上，每篇都在本文中整体引作参考。

核酸的构建

使用本领域众所周知的(a)重组方法，(b)合成技术，(c)纯化技术或者它们的组合可以制备本发明的分离的核酸。

所述核酸可以方便地含有除了本发明的多核苷酸之外的序列。例如，含有一个或多个内切核酸酶限制位点的多克隆位点可以插入核酸以帮助所述多核苷酸的分离。此外，可以插入可翻译的序列以帮助分离本发明的经翻译的多核苷酸。例如，六-组氨酸标记序列可以提供纯化本发明蛋白的方便的途径。本发明的核酸(编码序列除外)任选为用于克隆和/或表达本发明的多核苷酸的载体、连接物或者接头。

可以将额外序列加入这些克隆和/或表达序列以最优化它们在克隆和/或表达中的功能，以帮助分离所述多核苷酸，或者改善该多核苷酸向细胞的导入。克隆载体、表达载体、连接物和接头的使用是本领域中众所周知的。见，例如，Ausubel，如前；或Sambrook，如前。

构建核酸的重组方法

使用本领域中技术人员公知的许多克隆方法可以从生物来源得到本发明的分离的核酸组合物，如RNA、cDNA、基因组DNA或者它们的任意组合。在一些实施方案中，将在适当的严格条件下选择性杂交本发明的多核苷酸的寡核苷酸探针用于鉴定cDNA或者基因组DNA文库中的所需序列。RNA的分离、cDNA和基因组文库的构建是本领域技术人员众所周知的(见，例如，Ausubel，如前；或Sambrook，如前)。

构建核酸的合成方法

本发明的分离的核酸也可以通过公知的方法通过直接化学合成制备(见，例如，Ausubel等人，如前)。化学合成通常产生单链寡核苷酸，其可以通过与互补序列杂交，或者使用单链作为模板通过用DNA聚合酶聚合转化成双链DNA。本领域技术人员将认识到尽管DNA的化学合成限于约100或更多个碱基的序列，但是通过较短序列的连接可以得到更长的序列。

重组表达盒

本发明还提供了含有本发明核酸的重组表达盒。本发明的核酸序列，例如，编码本发明模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的cDNA或者基因组序列可用于构建可以导入至少一种所需宿主细胞中的重组表达盒。重组表达盒将通常含有本发明的多核苷酸，其与转录起始调节序列可操作地连接，所述转录起始调节序列将指导所述多核苷酸在预期的宿主细胞中的转录。异源和非异源(即内源)启动子均可用于指导本发明核酸的表达。

在一些实施方案中，可以将用作启动子、增强子或其它元件的分离的核酸导入本发明的多核苷酸的非异源形式的合适的位置(上游、下游或内含子中)，以上调或下调本发明的多核苷酸的表达。例如，通过本领域已知的突变、缺失和/或替代，可以体内或体外地改变内源的启动子。根据需要，可以以有义或反义方向表达本发明的多核苷酸。应当明白，以有义或反义方向控制基因表达，可以对可观察到的特征产生直接影响。另一种抑制方法是有义抑制。已经显示以有义方向构建的核酸的导入，是阻断靶基因转录的有效措施。

载体和宿主细胞

本发明还涉及包括本发明的分离的核酸分子的载体、用所述重组载体遗传工程化的宿主细胞，和通过本领域众所周知的重组技术产生至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体。见，例如，Sambrook，等人，如前；Ausubel等人，如前，将它们每个都完整并入本文作为参考。

所述多核苷酸可以任选与含有在宿主中增殖的选择标记的载体连接。通常，使用合适的已知方法，例如电穿孔等，将质粒载体导入细胞中，其他已知方法包括以沉淀，如磷酸钙沉淀，或者以与带电脂质的复合物形式使用载体。如果载体是病毒，则其可以使用适宜的包装细胞系在体外包装，然后转导到宿主细胞中。

DNA插入片段应当可操作地连接到合适的启动子。表达构建体还含有任选地用于至少一种转录起始、终止的位点和转录区中的用于翻译的核糖体结合位点。构建体表达的成熟转录物的编码部分将优选包括所要翻译的mRNA开始处的翻译起始密码子和所述mRNA末尾的适宜位置的终止密码子(例如，UAA、UGA或UAG)，对于哺乳动物或真核细胞表达优选UAA和UAG。

表达载体将优选但是任选包括至少一种选择标记。此类标记包括，例如，但不限于，对于真核细胞培养的氨甲蝶呤(MTX)、二氢叶酸还原酶(DHFR，美国专利号4,399,216；4,634,665；4,656,134；4,956,288；5,149,636；5,179,017)、氨苄青霉素、新霉素(G418)、霉酚酸或者谷氨酰胺合成酶(GS，美国专利号5,122,464；5,770,359；5,827,739)抗性，对于大肠杆菌(E.coli)和其他细菌或者原核生物中的培养的四环素或者氨苄青霉素抗性基因(将上面的专利完整并入本文作为参考)。上述宿主细胞的适宜的培养基和条件是本领域众所周知的。适宜的载体将对于技术人员是显而易见的。载体构建体向宿主细胞的导入可以通过磷酸钙转染、DEAE-葡聚糖介导的转染、阳离子脂质介导的转染、电穿孔、转导、感染或者其他公知方法实现。这些方法在本领域中描述，如Sambrook，如前，1-4和16-18章；Ausubel，如前，1、9、13、15、16章。

本发明的至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体可以以修饰形式，如融合蛋白表达，并且可以不仅包括分泌信号，而且还包括额外的异源功能区。例如，额外的氨基酸，尤其带电氨基酸区域可以加入模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的N-末端以提高纯化期间或者随后处理和保藏期间在宿主细胞中的稳定性和持久性。同样，可以将肽部分加入本发明的模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体以促进纯化。这些区域可以在模仿EPO的铰链核心模仿体或者至少其一种片段的最终制备前除去。这些方法在许多标准实验室手册中描述，如Sambrook，如前，17.29-17.42和18.1-18.74章；Ausubel，如前，16、17和18章。

本领域技术人员公知可以用于表达编码本发明蛋白的核酸的多种表达系统。

用于产生模仿体、其特定部分或者变体的细胞培养物的实例为哺乳动物细胞。哺乳动物细胞系统通常为细胞单层形式，尽管也可以使用哺乳动物细胞悬浮液或者生物反应器。本领域中已经开发了能够表达完整糖基化蛋白的许多适宜的宿主细胞系，且包括COS-1(例如，ATCC CRL 1650)、COS-7(例如，ATCC CRL-1651)、HEK293、BHK21(例如，ATCC CRL-10)、CHO(例如，ATCC CRL 1610，DG-44)和BSC-1(例如，ATCC CRL-26)细胞系、hepG2细胞、P3X63Ag8.653、SP2/0-Ag14、293细胞、HeLa细胞，等等，它们可以容易地从例如，美国典型培养物保藏中心，Manassas，Va得到。优选的宿主细胞包括淋巴样来源的细胞，如骨髓瘤和淋巴瘤细胞。尤其优选的宿主细胞为P3X63Ag8.653细胞(ATCC保藏号CRL-1580)和SP2/0-Ag14细胞(ATCC保藏号CRL-1851)。

这些细胞的表达载体可以包括一种或多种下面的表达控制序列，如，但不限于复制起点；启动子(例如，晚期或者早期SV40启动子、CMV启动子(例如，美国专利号5,168,062；5,385,839)、HSVtk启动子、pgk(磷酸甘油酸激酶)启动子、EF-1α启动子(例如，美国专利号5,266,491)、至少一种人免疫球蛋白启动子；增强子和/或加工信息位点，如核糖体结合位点、RNA剪接位点、多腺苷酸化位点(例如，SV40大T Ag polyA添加位点)和转录终止序列。见，例如，Ausubel等人，如前；Sambrook，等人，如前。用于产生本发明的核酸或者蛋白的其他细胞是公知的和/或可以从例如，美国典型培养物保藏中心细胞系和杂交瘤目录(www.atcc.org)或其他公知的或者商业来源得到。

当使用真核宿主细胞时，通常将多腺苷酸化或者转录终止序列整合入载体。终止子序列的一个实例是来自牛生长激素基因的多腺苷酸化序列。还包括用于准确剪接转录物的序列。剪接序列的一个实例是来自SV40的VP1内含子(Sprague，等人，J.Virol.45：773-781(1983))。此外，如本领域公知的，控制宿主细胞中复制的基因序列可以整合入载体中。

模仿EPO的铰链核心模仿体或其特定部分或变体的纯化

通过众所周知的方法可以从重组细胞培养物回收和纯化模仿EPO的铰链核心模仿体或其特定部分或变体，所述方法包括，但不限于，A蛋白纯化、硫酸铵或乙醇沉淀、酸提取、阴离子或阳离子交换层析、磷酸纤维素层析、疏水相互作用层析、亲和层析、羟基磷灰石层析和凝集素层析。高效液相层析(“HPLC”)也可用于纯化。见，例如，Colligan，Current Protocols in Immunology，或CurrentProtocols in Protein Science，John Wiley & Sons，NY，NY，(1997-2003)，例如，1、4、6、8、9、10章，将它们每个都完整并入本文作为参考。

本发明的模仿体或其特定部分或变体包括天然纯化的产物、化学合成方法的产物，和通过重组技术从真核宿主产生的产物，所述真核宿主包括，例如，酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞。取决于重组产生方法中所用的宿主，本发明的模仿EPO的铰链核心模仿体或其特定部分或变体可以为糖基化的或者非糖基化的，优选糖基化的。这些方法在许多标准实验室手册中描述，如Sambrook，如前，17.37-17.42节；Ausubel，如前，10、12、13、16、18和20章，Colligan，Protein Science，如前，12-14章，将它们都完整并入本文作为参考。

模仿体、特定片段和/或变体

本发明的分离的模仿体包含由本文更充分地讨论的本发明的多核苷酸中的任一种编码的模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体，或任意的分离的或制备的模仿EPO的铰链核心模仿体或其特定部分或变体。

优选地，模仿EPO的铰链核心模仿体或配体-结合部分或变体能结合至少一种EPO蛋白配体或受体，且由此提供对应的蛋白或其片段的至少一种EPO生物活性。不同的治疗上或诊断上有意义的蛋白是本领域众所周知的，且这样的蛋白的合适的测定或生物活性也是本领域众所周知的。

下面的表1显示了用于本发明的合适的模仿EPO的肽的非限制性实例。通过本领域公开的和/或已知的方法，可以制备出这些肽。在大多数情况下，使用单字母氨基酸缩写。这些序列(和贯穿在本说明书中，除非在特定情况下，另有说明)中的X指，可能存在20种天然存在的或已知的氨基酸残基或其已知衍生物中的任一种，或其任意的已知的修饰的氨基酸。可以串连(即，顺序地)连接这些肽中的任一种，其中用或不用接头，且在表中提供了少数串连连接的实例。接头列为“Δ”，且可以是本文所述的接头中的任一种。为了清楚，用破折号分隔串连重复序列和接头。含有半胱氨酰基残基的任意肽可以任选地与另一个含有Cys的肽交联，其中的任一个或两个可以连接到载体上。在表中提供了少数交联的实例。含有超过一个Cys残基的任意肽也可以形成肽内二硫键；见，例如，表1中的模仿EPO的肽。在表中指出了肽内二硫键-结合的肽的少数实例。可以如本文所述衍生这些肽中的任一种，且在表中提供了少数衍生的实例。对于其中羧基末端可能用氨基加帽的衍生物，加帽氨基显示为-NH₂。对于其中氨基酸残基被氨基酸残基以外的部分替代的衍生物，用δ表示替代，它表示本领域已知的任一种部分，例如，如Bhatnagar等(1996)，J.Med.Chem.39：3814-9和Cuthbertson等(1997)，J.Med.Chem.40：2876-82所述，其整体引作参考。J取代基和Z取代基(Z₅、Z₆、…Z₄₀)如美国专利号5,608,035、5,786,331和5,880,096中所定义，其在本文中整体引作参考。对于模仿EPO的序列(表1)，取代基X₂至X₁₁和整数“n”如WO 96/40772中所定义，其整体引作参考。以粗体出现的残基是D-氨基酸，但是可以任选地为L-氨基酸。除非另有说明，所有肽都通过肽键连接。在本说明书的末尾，列出了缩写。在“SEQID NO.”列中，“NR”指，对于给定的序列，不需要任何序列表。

表1-模仿EPO的肽序列

EPO生物活性是本领域众所周知的。见，例如，Anagnostou A等Erythropoietin has a mitogenic and positive chemotactic effect onendothelial cells.Proceedings of the National Academy of Science(USA)87：5978-82(1990)；Fandrey J和Jelkman WE Interleukin 1and tumor necrosis factor-alpha inhibit erythropoietin production invitro.Annals of the New York Academy of Science 628：250-5(1991)；Geissler K等Recombinant human erythropoietin：A multipotentialhemopoietic growth factor in vivo and in vitro.Contrib.Nephrol.87：1-10(1990)；Gregory CJ Erythropoietin sensitivity as adifferentiation marker in the hemopoietic system.Studies of threeerythropoietic colony responses in culture.Journal of CellularPhysiology 89：289-301(1976)；Jelkman W等Monokines inhibitingerythropoietin production in human hepatoma cultures and inisolated perfused rat kidneys.Life Sci.50：301-8(1992)；Kimata H等Human recombinant erythropoietin directly stimulates B cellimmunoglobulin production and proliferation in serum-free medium.Clinical and Experimental Immunology 85：151-6(1991)；Kimata H等Erythropoietin enhances immunoglobulin production andproliferation by human plasma cells in a serum-free medium.Clin.Immunology Immunopathol.59：495-501(1991)；Kimata H等Effectof recombinant human erythropoietin on human IgE production invitro Clinical and Experimental Immunology 83：483-7(1991)；KouryMJ和Bondurant MC Erythropoietin retards DNA breakdown andprevents programmed cell death in erythroid progenitor cells.Science248：378-81(1990)；Lim VS等Effect of recombinant humanerythropoietin on renal function in humans.Kidney International 37：131-6(1990)；Mitjavila MT 等Autocrine stimulation byerythropoietin and autonomous growth of human erythroid leukemiccells in vitro.Journal of Clinical Investigation 88：789-97(1991)；Andre M 等Performance of an immunoradiometric assay oferythropoietin and results for specimens from anemic andpolycythemic patients.Clinical Chemistry 38：758-63(1992)；HankinsWD等Erythropoietin-dependent and erythropoietin-producing celllines.Implications for research and for leukemia therapy.Annals ofthe New York Academy of Science 554：21-8(1989)；Kendall RGT等Storage and preparation of samples for erythropoietinradioimmunoassay.Clin.Lab.Haematology 13：189-96(1991)；Krumvieh D等Comparison of relevant biological assays for thedetermination of biological active erythropoietin.Dev.Biol.Stand.69：15-22(1988)；Ma DD等Assessment of an EIA for measuring humanserum erythropoietin as compared with RIA and an in-vitro bioassay.British Journal of Haematology 80：431-6(1992)；Noe G等Asensitive sandwich ELISA for measuring erythropoietin in humanserum British Journal of Haematology 80：285-92(1992)；Pauly JU等Highly specific and highly sensitive enzyme immunoassays forantibodies to human interleukin 3(IL3)and human erythropoietin(EPO)in serum.Behring Institut Mitteilungen 90：112-25(1991)；Sakata S和Enoki Y Improved microbioassay for plasmaerythropoietin based on CFU-E colony formation.Ann.Hematology64：224-30(1992)；Sanengen T等Immunoreactive erythropoietin anderythropoiesis stimulating factor(s)in plasma from hypertransfusedneonatal and adult mice.Studies with a radioimmunoassay and a cellculture assay for erythropoietin.Acta Physiol.Scand.135：11-6(1989)；Widness JA等A sensitive and specific erythropoietinimmunoprecipitation assay：application to pharmacokinetic studies.Journal of Lab.Clin.Med.119：285-94(1992)；关于其它信息，也参见在单独的生物测定中使用的单独的细胞系。上述文献中的每一篇在本文中都整体引作参考。通过使用能对因子起反应的细胞系，例如HCD57、NFS-60、TF-1和UT-7，可以测定EPO。也可以在集落形成测定中，通过测定来自骨髓细胞的CFU-E的数目，评价EPO活性。替代性的且完全不同的检测方法，是细胞因子的RT-PCR定量。

模仿EPO的铰链核心模仿体或其特定部分或变体，其能部分地或优选地基本上提供至少一种蛋白或片段的至少一种生物活性，可以结合蛋白或片段配体，并从而提供至少一种活性，该活性否则是由蛋白与至少一种蛋白配体或受体的结合介导的，或由其它的蛋白-依赖性的或介导的机制介导的。如本文所使用的，术语“模仿EPO的铰链核心模仿体活性”指，依赖于测定，可以调节或造成约20-10,000％，优选地至少约60、70、80、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、250、300、350、400、450、500、550、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000％或更多的至少一种蛋白-依赖性的活性的模仿EPO的铰链核心模仿体。

优选地，通过如本文所述和/或如本领域已知的至少一种合适的蛋白生物测定，评价模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的提供至少一种蛋白-依赖性的活性的能力。本发明的模仿人EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体可以与任意的种类(IgG、IgA、IgM等)或同种型类似，且可以包含κ或λ轻链的至少一部分。在一个实施方案中，模仿人EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体包含IgG重链可变的片段、铰链区、CH2和CH3，例如，同种型IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的至少一种。

本发明的至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体能结合对至少一种蛋白、亚基、片段、部分或其任何组合特异性的至少一种特定配体。至少一种本发明的模仿EPO的铰链核心模仿体、特定部分或变体的至少一种模仿EPO的肽，可以任选地结合配体的至少一种特定的配体表位。结合表位可以包含选自蛋白配体(例如EPO受体或其部分)的序列的至少1-3氨基酸至整个特定部分的邻接氨基酸的至少一种氨基酸序列的任意组合。

通过使用已知的技术，将式(I)的模仿EPO的铰链核心模仿体的各个部分连接到一起，通过使用已知的重组DNA技术，制备和表达能编码模仿EPO的铰链核心模仿体的至少一种(即，一种或多种)核酸分子，或通过使用任何其它的合适的方法，例如化学合成，可以制备出这样的模仿体。

使用合适的方法，例如噬菌体显示(Katsube，Y.，等，Int J Mol.Med，1(5)：863-868(1998))，或如本领域已知的和/或如本文所述的使用转基因动物的方法，可以制备出能结合人EPO配体或受体，且包含至少一部分定义的重链或轻链可变区的模仿体。使用编码核酸或其部分，可以在合适的宿主细胞中表达模仿EPO的铰链核心模仿体、特定部分或变体。

优选地，这样的模仿体或其配体-结合片段可以以高亲和力(例如，小于或等于约10^-7M的K_D)结合人EPO配体或受体。与文中描述的序列基本上相同的氨基酸序列包括含有保守氨基酸替代，以及氨基酸缺失和/或插入的序列。保守氨基酸替代指将第一个氨基酸用具有与第一个氨基酸类似的化学和/或物理性质(例如，电荷、结构、极性、疏水性/亲水性)的第二个氨基酸替代。保守替代包括下面组中的一个氨基酸用另一个氨基酸替代：赖氨酸(K)、精氨酸(R)和组氨酸(H)；天冬氨酸(D)和谷氨酸(E)；天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、酪氨酸(Y)、K、R、H、D和E；丙氨酸(A)、缬氨酸(V)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)、脯氨酸(P)、苯丙氨酸(F)、色氨酸(W)、甲硫氨酸(M)、半胱氨酸(C)和甘氨酸(G)；F、W和Y；C、S和T。

氨基酸代码

组成本发明的模仿体或特定部分或变体的氨基酸通常缩写。如本领域众所周知的，可以通过氨基酸的单字母代码、三字母代码、名称或者三核苷酸密码子表示氨基酸来指示氨基酸名称(见，Alberts，B.，等人，Molecular Biology of The Cell，第三版，Garland Publishing，Inc.，New York，1994)，如下表所示。

表2

本发明的模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体可以包括一个或多个氨基酸替代、缺失或添加，其来自天然突变或人工操作，如本文所述。可以在本发明中使用的这样的或其它的序列包括，但不限于，在表3中所示的下面的序列，如进一步在2003年9月30日提交的美国临时申请60/507,349的图1-42中进一步所述的，所述申请在此全文引入作为参考，其对应于2004年6月17日提交的PCT申请号US04/19783中的图1-41，所述申请在此全文引入作为参考，其具有对应的SEQ ID NO：31-72。这些参考的图1-42(SEQ IDNO：31-72)或PCT US04/19783中的图1-41显示了重链/轻链可变/恒定区序列、构架/亚结构域和替代的实例，如本文所教导的，其部分可以用于本发明的Ig衍生的蛋白中。

表3：

当然，熟练的技术人员要进行的氨基酸替代的数目取决于许多因素，包括上述的那些。一般说来，对于至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体，氨基酸替代、插入或者缺失数将不超过40、30、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1，如1-30个或者其中的任意范围或者值，如文中说明的。

下面的关于本发明的EPO铰链核心模仿体的组分的描述，是基于本发明的式I的用途的，

((V(m)-P(n)-L(o)-H(p)-CH2(q)-CH3(r))(s)

其中V是免疫球蛋白可变区N-末端的至少一部分，P是至少一种生物活性肽，L是至少一种接头多肽，H是至少一种免疫球蛋白铰链区的至少一部分，CH2是免疫球蛋白CH2恒定区的至少一部分，CH3是免疫球蛋白CH3恒定区的至少一部分，m、n、o、p、q、r和s独立地是0、1或2至10之间的整数，从而模仿不同类型的免疫球蛋白分子，例如，但不限于IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgD、IgE等，或其任何亚类，或其任何组合。

在本发明的铰链核心模仿体中，任选的N-末端V部分可以包含至少一种重链可变的构架1(FR1)区的1-20氨基酸，例如，如2003年9月30日提交的美国临时申请60/507,349的图1-9(SEQ IDNO：31-39)所述，或至少一种LC可变区，例如，如上述申请的图10-31(SEQ ID NO：40-61)所述，所述申请在此全文引入作为参考，其对应于2004年6月17日提交的PCT申请号US04/19783中的图1-41，所述申请在此全文引入作为参考，其包括替代、缺失或插入，如在这些图中所示的，其中图5、6和8是优选的。还优选包含序列Q-X-Q的可变序列。

P部分可以包含至少一种如本领域已知的或如本文所述的任意的治疗肽，例如，但不限于表1所示的那些，SEQ ID NO：1-30，或如本领域已知的，或其任意组合或共有序列，或其任何融合蛋白。

任选的接头序列可以是本领域已知的任意的合适的肽接头。优选的序列包括G和S的任意组合，例如，X1-X2-X3-X4-Xn，其中X可以是G或S，且n可以是5-30。非限制性的实例包括，GS、GGGS、GSGGGS、GSGGGSGG等。

在本发明中，未使用CH1部分，且从铰链区的N-末端删除了各种数目的氨基酸，例如，参考2003年9月30日提交的美国临时申请60/507,349的图1-42，所述申请在此全文引入作为参考，其对应于2004年6月17日提交的PCT申请号US04/19783中的图1-41，所述申请在此全文引入作为参考，和参考表3。用于本发明的模仿体的铰链核心部分的各种数目的氨基酸包括，但不限于，至少一个铰链区的1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57或1-3、2-5、2-7、2-8、3-9、4-10、5-9、5-10、5-15、10-20、2-30、20-40、10-50个N-末端氨基酸的缺失或其中的任意范围或值，例如，如2003年9月30日提交的美国临时申请60/507,349的图32-40所示，所述申请在此全文引入作为参考，其对应于2004年6月17日提交的PCT申请号US04/19783中的图1-41，所述申请在此全文引入作为参考，或如上面的表3所示，例如，但不限于，2003年9月30日提交的美国临时申请60/507,349的图32-40的氨基酸99-105、99-108、99-111、99-112、99-113、99-114、99-115、99-119、99-125、99-128、99-134、99-140、99-143、99-149、99-155和99-158中的氨基酸99-101至105-157的任意的至全部的缺失，所述申请在此全文引入作为参考，其对应于2004年6月17日提交的PCT申请号US04/19783中的图1-41，所述申请在此全文引入作为参考，其与SEQ ID NO：62-70对应，包括2003年9月30日提交的美国临时申请60/507,349的图32-40所述的替代、插入或缺失，所述申请在此全文引入作为参考，其对应于2004年6月17日提交的PCT申请号US04/19783中的图1-41，所述申请在此全文引入作为参考。在优选的实施方案中，本发明的铰链核心区包括铰链区的N-末端缺失，以提供包括最高达但不包括Cys残基或最高达但不包括序列Cys-Pro-Xaa-Cys的缺失的铰链核心区。在其它优选的实施方案中，在本发明的铰链核心模仿体中使用的这样的铰链核心序列包括图36(SEQ ID NO：66)(IgG1)的氨基酸109-113或112-113；图37(SEQ ID NO：67)(IgG2)的105-110或109-110；图38(SEQ IDNO：68)(IgG3)的111-160、114-160、120-160、126-160、129-160、135-160、141-160、144-160、150-160、156-160和159-160；或图39(SEQID NO：69)(IgG4)的106-110或109-110。

CH2、CH3和任选的CH4序列可以是任意的合适的人或人相容的序列，例如，如2003年9月30日提交的美国临时申请60/507,349的图1-42所示，所述申请在此全文引入作为参考，其对应于2004年6月17日提交的PCT申请号US04/19783中的图1-41，所述申请在此全文引入作为参考，和如表3所示，或如本领域已知的，或其任意组合或共有序列，或其任意的融合蛋白。

通过本领域中公知的方法，如定点诱变或者丙氨酸扫描诱变(例如，Ausubel，如前，8，15章；Cunningham和Wells，Science244：1081-1085(1989))，可以鉴定本发明模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体中对功能必需的氨基酸。丙氨酸扫描诱变在分子的每个残基导入单个丙氨酸突变。然后测试所得突变分子的生物学活性，诸如，但不限于至少一种蛋白有关的活性，如本文所述或如本领域已知的。对于模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体结合关键的位点也可通过结构分析，如结晶、核磁共振或者光亲和标记鉴定(Smith，等人，J.Mol.Biol.224：899-904(1992)和de Vos，等人，Science 255：306-312(1992))。

本发明的模仿体或特定部分或变体可以包含，但不限于，作为式(I)的P部分的选自SEQ ID NO：1-30中的至少一个的3至全部的至少一部分、序列或组合。可以增强或维持至少一种上述活性的非限制性的变体包括，但不限于，任一种上述的多肽，还包含与不会显著影响所述模仿EPO的铰链核心模仿体的合适的生物活性或功能的至少一种替代、插入或缺失相对应的至少一种突变。

模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体还可以任选地包含至少一种多肽的至少一个功能部分作为式(I)的P部分，90-100％的SEQ ID NO：1-30中的至少一个。模仿EPO的铰链核心模仿体还可以任选地包含式(I)P部分的氨基酸序列，其选自SEQ ID NO：1-30中的一个或多个。

在一个实施方案中，P氨基酸序列或其部分与SEQ ID NO：1-30中的至少一个的对应部分的对应氨基酸序列具有约90-100％同一性(即，90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100或其中的任意范围或值)。优选地，如本领域已知的，使用合适的计算机算法，确定了90-100％氨基酸同一性(即，90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100或其中的任意范围或值)。

本发明的模仿体或特定部分或变体可以包含任意数目的来自本发明的模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的邻接氨基酸残基，其中该数目选自由10-100％的模仿EPO的铰链核心模仿体中的邻接残基的数目组成的整数组。任选地，邻接氨基酸的该子序列的长度是至少约2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250或更多个氨基酸，或其中的任意范围或值。另外，这样的子序列的数目可以是选自1-20的任意整数，例如至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多。

如技术人员能明白的，本发明包括至少一种本发明的生物活性的模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体。生物活性的模仿体或特定部分或变体具有天然的(非合成的)、内源的或有关的和已知的插入的或融合的蛋白或特定部分或变体的至少20％、30％或40％，和优选至少50％、60％或70％，和最优选至少80％、90％或95％-1000％的比活。酶活性和底物特异性的测定和定量测量方法，是本领域的技术人员众所周知的。

在另一方面，本发明涉及文中公开的人模仿体和配体结合片段，其通过共价附着有机部分而受到修饰。这种修饰可以产生具有改善的药物代谢动力学性质(例如，增加的体内血清半衰期)的模仿EPO的铰链核心模仿体或者配体结合片段。有机部分可以是线性或者分支的亲水聚合基团、脂肪酸基团或者脂肪酸酯基团。在具体实施方案中，亲水聚合基团可以具有约800到约120,000道尔顿的分子量，并且可以为聚链烷二醇(例如，聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇(PPG))、糖聚合物、氨基酸聚合物或者聚乙烯吡咯烷酮，并且脂肪酸或脂肪酸酯基团可以包含约8到约40个碳原子。

本发明的修饰的模仿体和配体结合片段可以含有直接或间接共价结合到模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的一个或多个有机部分。结合本发明模仿EPO的铰链核心模仿体或者配体结合片段的每个有机部分可以独立地为亲水聚合基团、脂肪酸基团或者脂肪酸酯基团。文中所用术语“脂肪酸”包括单羧酸和二羧酸。文中所用术语“亲水聚合基团”指在水中比在辛烷中更易溶的有机聚合物。例如，聚赖氨酸在水中比在辛烷中更易溶。从而，本发明包括通过共价附着聚赖氨酸修饰的模仿EPO的铰链核心模仿体。适于修饰本发明模仿体的亲水聚合物可以是线性或分支的并且包括，例如，聚链烷二醇(例如，PEG、单甲氧基-聚乙二醇(mPEG)、PPG等等)、糖(例如，葡聚糖、纤维素、寡糖、多糖等等)、亲水氨基酸的聚合物(例如，聚赖氨酸、聚精氨酸、聚天冬氨酸等等)、聚环氧链烷(polyalkane oxide)(例如，聚环氧乙烷、聚环氧丙烷等等)和聚乙烯吡咯烷酮。优选地，修饰本发明模仿EPO的铰链核心模仿体的亲水聚合物作为单独的分子实体具有约800到约150,000道尔顿的分子量。例如，可以使用PEG₂₅₀₀、PEG₅₀₀₀、PEG₇₅₀₀、PEG₉₀₀₀、PEG₁₀₀₀₀、PEG₁₂₅₀₀、PEG₁₅₀₀₀和PEG_20,000，其中下标是聚合物的以道尔顿表示的平均分子量。

亲水聚合基团可以用1个到约6个烷基、脂肪酸或脂肪酸酯基团取代。通过使用适宜的方法可以制备用脂肪酸或脂肪酸酯基团取代的亲水聚合物。例如，含有胺基团的聚合物可以偶联到脂肪酸或脂肪酸酯基团的羧基，且脂肪酸或脂肪酸酯上的活化羧基(例如，用N，N-羰基二咪唑活化的)可以偶联到聚合物上的羟基。

适于修饰本发明模仿体的脂肪酸和脂肪酸酯可以是饱和的或者可以含有一个或多个不饱和单位。适于修饰本发明模仿体的脂肪酸包括，例如，正十二烷酸(C₁₂，月桂酸)、正十四烷酸(C₁₄，肉豆蔻酸)、正十八烷酸(C₁₈，硬脂酸)、正二十烷酸(C₂₀，花生酸)、正二十二烷酸(C₂₂，山嵛酸)、正三十烷酸(C₃₀)、正四十烷酸(C₄₀)、顺式-Δ9-十八烷酸(C₁₈，油酸)、全顺式-Δ5，8，11，14-二十烷四烯酸(eicosatetraenoate)(C₂₀，花生四烯酸)、辛二酸、十四烷二酸、十八烷二酸、二十二烷二酸、等等。适宜的脂肪酸酯包括含有线性或分支低级烷基的二羧酸的单酯。低级烷基可以含有1到约12、优选1到约6个碳原子。

使用适宜的方法，如通过与一种或多种修饰试剂反应可以制备经修饰的人模仿体和配体结合片段。文中所用“修饰试剂”指含有活化基团的适宜的有机基团(例如，亲水聚合物、脂肪酸、脂肪酸酯)。“活化基团”是化学部分或者官能团，其在适宜的条件下可以与第二种化学基团反应，从而在修饰试剂和该第二种化学基团之间形成共价键。例如，胺反应性活化基团包括亲电基团，如甲苯磺酸酯、甲磺酸酯、卤(氯、溴、氟、碘)、N-羟基琥珀酰亚胺基酯(NHS)，等等。与硫醇反应的活化基团包括，例如，马来酰亚胺、碘代乙酰基、丙烯酰(acrylolyl)、吡啶基二硫化物、5-硫醇-2-硝基苯甲酸硫醇(TNB-硫醇)、等等。醛官能团可以偶联至含有胺-或者酰肼-的分子，且叠氮基可以与三价磷基团反应形成氨基磷酸酯或者phosphorimide连接。向分子中导入适宜的活化基团的适宜方法是本领域公知的(见，例如，Hermanson，G.T.，Bioconjugate Techiniques，Academic Press：San Diego，CA(1996))。活化基团可以直接结合有机基团(例如，亲水聚合物、脂肪酸、脂肪酸酯)或者通过接头部分，例如，二价C₁-C₁₂基团结合有机基团，在所述二价C₁-C₁₂基团中，一个或多个碳原子可以被杂原子，如氧、氮或者硫代替。适宜的接头部分包括，例如，四甘醇、-(CH₂)₃-、-NH-(CH₂)₆-NH-、-(CH₂)₂-NH-和-CH₂-O-CH₂-CH₂-O-CH₂-CH₂-O-CH-NH-。含有接头部分的修饰试剂可以通过如下方法制备，例如，在1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)存在下将单-Boc-烷基二胺(例如，单-Boc-乙二胺，单-Boc-二氨基己烷)与脂肪酸反应，从而在游离胺和脂肪酸羧基之间形成酰胺键。Boc保护基可以从产物除去，这可以通过用三氟乙酸(TFA)处理实现，以暴露可以偶联如所述的另一羧基的伯胺，或者可以与马来酐反应并环化所得产物以产生脂肪酸的活化的马来酰亚胺基(maleimido)衍生物(见，例如，Thompson，等人，WO92/16221，将其完整教导并入本文作为参考)。

通过将人模仿EPO的铰链核心模仿体或者配体结合片段与修饰试剂反应可以产生本发明的修饰的模仿体。例如，通过使用胺-反应性修饰试剂，例如PEG的NHS酯，可以以非位点特异的方式将有机部分连接到模仿EPO的铰链核心模仿体。修饰的人模仿体或者配体结合片段还可以通过还原模仿EPO的铰链核心模仿体或者配体结合片段的二硫键(例如，链内二硫键)来制备。然后所还原的模仿EPO的铰链核心模仿体或者配体结合片段可以与硫醇反应性修饰试剂反应以产生本发明的修饰的模仿EPO的铰链核心模仿体。使用适宜的方法，如反向蛋白水解(Fisch等人，Bioconjugate Chem.，3：147-153(1992)；Werlen等人，Bioconjugate Chem.，5：411-417(1994)；Kumaran等人，Protein Sci.6(10)：2233-2241(1997)；Itoh等人，Bioorg.Chem.，24(1)：59-68(1996)；Capellas等人，Biotechnol.Bioeng.，56(4)：456-463(1997))，和Hermanson，G.T.，BioconjugateTechniques，Academic Press：San Diego，CA(1996)中描述的方法可以制备含有结合本发明模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的特定位点的有机部分的修饰的人模仿体和配体结合片段。

模仿EPO的铰链核心模仿体组合物

本发明还提供了至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体组合物，其包含如本文所述和/或如本领域已知的至少1种、至少2种、至少3种、至少4种、至少5种、至少6种或更多种模仿体或其特定部分或变体，其以非-天然存在的组合物、混合物或形式提供。这样的组合物百分比基于重量，体积，浓度，摩尔浓度，或作为液体或无水溶液、混合物、悬浮液、乳状液或胶体的摩尔浓度，如本领域已知的或如本文所述的。

按照重量，体积，浓度，摩尔浓度，或作为液体、气体或无水溶液、混合物、悬浮液、乳状液或胶体的摩尔浓度，如本领域已知的或如本文所述的，这样的组合物可以占0.00001-99.9999％，其中的任意范围或值，例如但不限于0.00001、0.00003、0.00005、0.00009、0.0001、0.0003、0.0005、0.0009、0.001、0.003、0.005、0.009、0.01、0.02、0.03、0.05、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4.、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.3、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、99.1、99.2、99.3、99.4、99.5、99.6、99.7、99.8、99.9％。这样的本发明的组合物因而包括但不限于0.00001-100mg/ml和/或0.00001-100mg/g。

所述组合物可以任选还含有有效量的至少一种化合物或者蛋白，所述化合物或者蛋白选自至少一种抗感染药物、心血管(CV)系统药物、中枢神经系统(CNS)药、自主神经系统(ANS)药、呼吸道药物、胃肠(GI)道药物、激素药物、用于流体或者电解质平衡的药物、血液药物、抗癌药、免疫调制药物、眼、耳或鼻药物、局部药物、营养药物，等等。这些药物是本领域众所周知的，包括文中给出的每种药物的制剂、适应症、给药和施用(见，例如，Nursing 2001Handbook of Drugs，第21版，Springhouse Corp.，Springhouse，PA，2001；Health Professional’s Drug Guide 2001，编著，Shannon，Wilson，Stang，Prentice-Hall，Inc，Upper Saddle River，NJ；Pharmcotherapy Handbook，Wells等人，编著，Appleton & Lange，Stamford，CT，每一篇都完整并入本文作为参考)。

抗感染药可以是选自杀阿米巴药的至少一种或者至少一种抗原生动物药、驱肠虫药、抗真菌剂、抗疟药、抗结核药或至少一种抗麻风药、氨基糖苷类、青霉素、头孢菌素、四环素、磺胺药物、氟喹诺酮、抗病毒药物、大环内酯类抗感染药物、混杂的抗感染药物。CV药物可以是选自变力性药物、抗节律不齐药、抗心绞痛药物、抗高血压药、抗脂血药、混杂的心血管药的至少一种。CNS药物可以是选自非麻醉性镇痛剂的至少一种或者选自解热药、非类固醇消炎药、麻醉药的至少一种或至少一种阿片样镇痛剂、镇静催眠药、抗惊厥药、抗抑郁药、抗焦虑药、抗精神病药、中枢神经系统兴奋剂、抗帕金森病药物、混杂的中枢神经系统药物。ANS药物可以是选自胆碱能药物(拟副交感神经功能药物)、抗胆碱能药、肾上腺素能药物(拟交感神经药)、肾上腺素能药物阻滞剂(抗交感神经药)、骨骼肌松弛药、神经肌肉阻滞剂的至少一种。呼吸道药物可以是选自抗组胺剂、支气管扩张药、祛痰药的至少一种或至少一种止咳药、混杂的呼吸相关药物。胃肠道药物可以是选自抗酸剂的至少一种或至少一种吸附剂或至少一种抗肠胃气胀药、消化酶或至少一种胆结石增溶剂、止泻药、缓泻药、止吐剂、抗溃疡药。激素药物可以是选自皮质类固醇、雄激素的至少一种或至少一种促蛋白合成类固醇、雌激素或至少一种孕酮、促性腺激素、抗糖尿病药物或至少一种胰高血糖素、甲状腺激素、甲状腺激素拮抗剂、垂体激素、甲状旁腺-样药物。流体和电解质平衡的药物可以是选自利尿剂、电解质的至少一种或至少一种替代溶液、酸化剂或至少一种碱化剂。血液药物可以是选自补血药、抗凝剂、血液衍生物、溶解血栓的酶的至少一种。抗癌药可以是选自烷化药物、抗代谢物、抗生素类抗癌药、改变激素平衡的抗癌药、混杂的抗癌药的至少一种。免疫调制药物可以是选自免疫抑制剂、疫苗的至少一种或者至少一种类毒素、抗毒素或者至少一种抗蛇毒素、免疫血清、生物应答修饰剂。眼、耳和鼻药物可以是选自眼科抗感染药、眼科消炎药、缩瞳药、放瞳剂、眼科血管收缩剂、混杂的眼科、耳科、鼻科药的至少一种。局部药物可以是选自局部抗感染药、杀疥螨剂的至少一种或至少一种杀虱剂、局部的皮质类固醇。营养药物可以是选自维生素、矿物质或者热量的至少一种。见，例如，Nursing 2001 DrugHandbook，如前的内容。

至少一种杀阿米巴药或者抗原生动物药可以是选自阿托夸酮、盐酸氯喹、磷酸氯喹、甲硝唑、盐酸甲硝唑、羟乙磺酸戊烷脒的至少一种。至少一种驱肠虫药可以是选自甲苯咪唑、双羟萘酸噻嘧啶、噻苯咪唑的至少一种。至少一种抗真菌剂可以是选自两性霉素B、两性霉素B胆甾烯基硫酸酯复合物、两性霉素B脂质复合物、两性霉素B脂质体、氟康唑、氟胞嘧啶、微尺寸(microsize)灰黄霉素、超微尺寸灰黄霉素、伊曲康唑、酮康唑、制霉菌素、盐酸特比萘芬的至少一种。至少一种抗疟药可以是选自盐酸氯喹、磷酸氯喹、强力霉素、硫酸羟氯喹、盐酸甲氟喹、磷酸伯氨喹、乙胺嘧啶、乙胺嘧啶与磺胺多辛的至少一种。至少一种抗结核药或者抗麻风药可以是选自氯苯吩嗪、环丝氨酸、氨苯砜、盐酸乙胺丁醇、异烟肼、吡嗪酰胺、利福布丁、利福平、利福喷丁、硫酸链霉素的至少一种。至少一种氨基糖苷类可以是选自硫酸阿米卡星、硫酸庆大霉素、硫酸新霉素、硫酸链霉素、硫酸妥布霉素的至少一种。至少一种青霉素可以是选自阿莫西林/克拉维酸钾、阿莫西林三水合物、氨苄青霉素、氨苄青霉素钠、三水苄青霉素、氨苄青霉素钠/青霉烷砜钠、氯苯青霉素钠、双氯青霉素钠、美洛西林钠、乙氧萘青霉素钠、苯唑西林钠、苄星青霉素G、青霉素G钾、普鲁卡因青霉素G、青霉素G钠、青霉素V钾、哌拉西林钠、哌拉西林钠/三唑巴坦钠、羧噻酚青霉素钠、羧噻酚青霉素钠/可拉维酸钾的至少一种。至少一种头孢菌素可以是选自头孢克洛、头孢羟氨苄、头孢唑啉钠、头孢地尼、盐酸头孢平、头孢克肟、头孢美唑钠、头孢尼西钠、头孢哌酮钠、头孢氨噻肟钠、头孢替坦二钠、头孢西丁钠、头孢泊肟酯、头孢罗齐、头孢他啶、头孢布坦、头孢唑肟钠、头孢曲松钠、头孢呋辛酯、头孢呋辛钠钠、盐酸头孢氨苄、头孢氨苄一水合物、cephradine、氯拉卡比的至少一种。至少一种四环素可以是选自盐酸去甲金霉素、强力霉素钙、盐酸多西环素、盐酸强力霉素、一水强力霉素、盐酸米诺环素、盐酸四环素的至少一种。至少一种磺胺药物可以是选自复方新诺明、磺胺嘧啶、新诺明、磺胺异_唑、磺胺乙酰异_唑的至少一种。至少一种氟喹诺酮可以是选自alatrofloxacin甲磺酸盐、环丙沙星、依诺沙星、左氟沙星、盐酸洛美沙星、萘啶酸、诺氟沙星、氧氟沙星、司帕沙星、甲磺酸曲伐沙星的至少一种。至少一种氟喹诺酮可以是选自alatrofloxacin甲磺酸盐、环丙沙星、依诺沙星、左氟沙星、盐酸洛美沙星、萘啶酸、诺氟沙星、氧氟沙星、司帕沙星、甲磺酸曲伐沙星的至少一种。至少一种抗病毒剂可以是选自阿波卡韦硫酸、无环鸟苷钠、盐酸金刚胺、安泼那韦、西多福韦、地拉韦定甲磺酸盐、地达诺新、依非韦伦、法昔洛韦、福米韦生钠、膦甲酸钠、更昔洛韦、吲哚那韦硫酸、拉米夫定、拉米夫定/叠氮胸苷、奈非那韦甲磺酸盐、奈韦拉平、奥赛他米韦磷酸盐、病毒唑、盐酸金刚乙胺、利托那韦、沙喹那韦、甲磺酸沙喹那韦、司他夫定、法昔洛韦盐酸、扎西胞苷、扎那米韦、叠氮胸苷的至少一种。至少一种大环内酯类抗感染剂可以是选自阿奇霉素、克拉霉素、地红霉素、红霉素碱、依托红霉素、琥乙红霉素、乳糖酸红霉素、硬脂酸红霉素的至少一种。至少一种混杂抗感染剂可以是选自氨曲南、杆菌肽、琥珀酸钠氯霉素、盐酸克林霉素、盐酸氯林可霉素棕榈酸酯、磷酸氯林可霉素、泰宁和西拉司丁钠、美罗培南、呋喃妥因大晶体、呋喃妥因微晶、喹奴普丁/达福普汀、盐酸大观霉素、甲氧苄啶、盐酸万古霉素的至少一种(见，例如，Nursing 2001 DrugHandbook的24-214页)。

至少一种变力性剂可以是选自乳酸氨利酮、地高辛、乳酸米力农的至少一种。至少一种抗心律不齐药可以是选自腺苷、盐酸胺碘酮、硫酸阿托品、溴苯乙胺、盐酸地尔硫_、丙吡胺、磷酸丙吡胺、盐酸艾司洛尔、醋酸氟卡胺、伊布利特富马酸盐、盐酸利多卡因、盐酸美西律、盐酸莫雷西嗪、苯妥英、苯妥英钠、盐酸普鲁卡因胺、盐酸普罗帕酮、盐酸普萘洛尔、奎尼丁重硫酸盐、葡糖酸奎尼丁、奎尼丁聚半乳糖醛酸盐、硫酸奎尼丁、索他洛尔、盐酸妥卡胺、盐酸维拉帕米的至少一种。至少一种抗心绞痛药可以是选自阿罗地平磺酸盐、亚硝戊酯、盐酸苄普地尔、盐酸地尔硫_、硝酸异山梨酯、单硝酸异山梨酯、萘羟心安、盐酸硝吡胺甲酯、硝苯地平、硝酸甘油、盐酸普萘洛尔、维拉帕米、盐酸维拉帕米的至少一种。至少一种抗高血压药可以是选自盐酸醋丁洛尔、阿罗地平磺酸盐、阿替洛尔、盐酸贝那普利、盐酸倍他索洛尔、富马酸比索洛尔、坎得沙坦cilexetil、卡托普利、盐酸喹酮心安、卡维地洛、可乐定、盐酸可乐定、二氮嗪、盐酸地尔硫_、甲磺酸多沙唑嗪、伊那普利拉、马来酸伊那普利、甲磺酸伊普沙坦、非洛地平、甲磺酸芬洛多潘、福辛普利钠、醋酸胍那苄、硫酸胍那决尔、盐酸胍法辛、盐酸肼苯哒嗪、依贝沙坦、伊拉地平、盐酸拉贝洛尔、赖诺普利、氯沙坦钾、甲基多巴、盐酸甲基多巴、琥珀酸美托洛尔、酒石酸美托洛尔、米诺地尔、盐酸莫西普利、萘羟心安、盐酸硝吡胺甲酯、硝苯地平、尼索的平、硝普钠、硫酸环戊丁心安、哌林多普利erbumine、甲磺酸酚妥拉明、心得静、盐酸哌唑嗪、盐酸普萘洛尔、盐酸喹那普利、雷米普利、替米沙坦、盐酸特拉唑嗪、马来酸噻马洛尔、群多普利、缬沙坦、盐酸维拉帕米的至少一种。至少一种抗脂血药可以是选自阿托伐他汀钙、西伐他丁钠、消胆胺、盐酸降胆宁、非诺贝特(微粒化)、氟伐他丁钠、吉非贝齐、洛伐他汀、烟酸、普伐他丁钠、辛伐他汀的至少一种。至少一种混杂CV药物可以是选自阿昔单抗、前列地尔、盐酸阿布他明、西洛他唑、氯吡格雷重硫酸盐、双嘧达莫、表非替得、盐酸甲氧胺福林、己酮可可碱、盐酸噻氯匹定、盐酸替罗非班的至少一种(见，例如，Nursing 2001 DrugHandbook的215-336页)。

至少一种非麻醉性镇痛剂或者解热药可以为选自醋氨酚、乙酰水杨酸、胆碱三水杨酸镁、二氟苯水杨酸、水杨酸镁的至少一种。至少一种非类固醇消炎药可以为选自塞来昔布、双氯酚酸钾、双氯酚酸钠、依托度酸、苯氧苯丙酸钙、氟比洛芬、布洛芬、吲哚美辛、吲哚美辛钠三水合物、酮基布洛芬、酮咯酸、萘丁美酮、萘普生、甲氧萘丙酸钠、奥沙普嗪、吡罗昔康、罗非克西、舒林酸的至少一种。至少一种麻醉性或者阿片样镇痛剂可以为选自盐酸阿芬他尼、盐酸丁丙诺啡、酒石酸环丁甲二羟吗喃、磷酸可待因、硫酸可待因、枸橼酸芬太尼、芬太尼经皮体系、跨粘膜芬太尼、盐酸二氢吗啡酮、盐酸哌替啶、盐酸美沙酮、盐酸吗啡、硫酸吗啡、酒石酸吗啡、盐酸纳布啡、盐酸羟氢可待酮、果胶酸羟可待酮、盐酸氢羟吗啡酮、盐酸镇痛新、盐酸镇痛新和盐酸纳洛酮、乳酸镇痛新、盐酸丙氧芬、萘磺酸丙氧芬、盐酸雷米芬太尼、枸橼酸舒芬太尼、盐酸反胺苯环醇的至少一种。至少一种镇静催眠药可以是选自水合氯醛、艾司唑仑、盐酸氟胺安定、戊巴比妥、戊巴比妥钠、苯巴比妥钠、司可巴比妥钠、甲羟安定、三唑苯二氮、扎来普隆、酒石酸唑吡坦的至少一种。至少一种抗惊厥药可以是选自乙酰唑胺、卡马西平、氯硝安定、二钾氯氮_、安定、双丙戊酸钠、乙琥胺、磷苯妥英钠、加巴喷丁、拉莫三嗪、硫酸镁、苯巴比妥、苯巴比妥钠、苯妥英、苯妥英钠、苯妥英钠(持久的)、扑癫酮、盐酸硫加宾、托吡酯、丙戊酸钠、丙戊酸的至少一种。至少一种抗抑郁药可以是选自盐酸阿米替林、羟嗪阿米替林、阿莫沙平、盐酸丁氨苯丙酮、氢溴酸西酞普兰、盐酸氯米帕明、盐酸去甲丙咪嗪、盐酸多塞平、盐酸氟西汀、盐酸丙咪嗪、羟嗪丙咪嗪、米氮平、盐酸奈法唑酮、盐酸去甲替林、盐酸帕罗克赛、硫酸苯乙肼、盐酸珊特拉林、硫酸反苯环丙胺、马来酸三甲丙咪嗪、盐酸万拉法新的至少一种。至少一种抗焦虑药可以是选自阿普唑仑、盐酸丁螺旋酮、氯氮_、盐酸氯氮_、二钾氯氮_、安定、盐酸多塞平、双羟萘酸羟嗪、盐酸羟嗪、双羟萘酸羟嗪、氯羟安定、mephrobamate、盐酸咪哒唑仑、去甲羟安定的至少一种。至少一种抗精神病药可以是选自盐酸氯丙嗪、氯氮平、氟奋乃静癸酸酯、fluephenazine enanthate、盐酸氟奋乃静、氟哌啶醇、癸酸氟哌啶醇、乳酸氟哌啶醇、盐酸克噻平、琥珀酸克塞平、苯磺酸甲砜达嗪、盐酸吗茚酮、奥兰扎平、奋乃静、哌迷清、甲哌氯丙嗪、富马酸喹迪平、维思通、盐酸硫利哒嗪、氨砜噻吨、盐酸氨砜噻吨、盐酸三氟拉嗪的至少一种。至少一种中枢神经系统兴奋剂可以选自硫酸苯丙胺、咖啡因、硫酸右旋苯丙胺、盐酸多沙普仑、盐酸脱氧麻黄碱、盐酸哌醛甲酯、莫达非尼、匹莫林、盐酸苯丁胺的至少一种。至少一种抗帕金森病药可以是选自盐酸金刚胺、甲磺酸苯甲托品、盐酸比哌立登、乳酸比哌立登、甲磺酸溴隐亭、卡比多巴-左旋多巴、恩他卡朋、左旋多巴、甲磺酸硫丙麦角林、二盐酸派拉米苏、盐酸累匹利洛、盐酸司来吉兰、托卡朋、盐酸苯海索的至少一种。至少一种混杂的中枢神经系统药物可以是选自盐酸丁氨苯丙酮、盐酸多奈哌齐、氟哌啶、马来酸氟戊肟胺、碳酸锂、枸橼酸锂、盐酸那拉曲坦、烟碱polacrilex、烟碱经皮体系、异丙酚、安息香酸雷扎曲坦、盐酸西布茶明一水合物、琥珀酸磺马曲坦、盐酸单满吖啶氨、佐米曲坦的至少一种(见，例如，Nursing 2001 Drug Handbook的337-530)。

至少一种胆碱能药物(例如，拟副交感神经功能药物)可以是选自氯化氨甲酰甲胆碱、氯化滕喜龙、溴新斯的明、甲基硫酸新斯的明、水杨酸毒扁豆碱、溴化吡啶斯的明的至少一种。至少一种抗胆碱能药物可以是选自硫酸阿托品、盐酸双环胺、胃长宁、莨菪碱、硫酸莨菪碱、溴化丙胺太林、东莨菪碱、丁溴东莨菪碱、氢溴酸东莨菪碱的至少一种。至少一种肾上腺素能药物(拟交感神经药)可以是选自盐酸多巴酚丁胺、盐酸多巴胺、酒石酸间羟胺、重酒石酸氢去甲肾上腺素、盐酸新福林、盐酸伪麻黄碱、硫酸伪麻黄碱的至少一种。至少一种肾上腺素能阻滞剂(抗交感神经药)可以是选自甲磺酸二氢麦角胺、酒石酸麦角胺、马来酸二甲麦角新碱、盐酸普萘洛尔的至少一种。至少一种骨骼肌松弛剂可以是选自巴氯芬、卡立普多、氯唑沙宗、盐酸环苯扎林、达者仑钠、美需巴莫、盐酸替扎尼定的至少一种。至少一种神经肌肉阻滞剂可以是选自安托肌松、苯碳酸顺阿曲库胺、多沙氯铵、氯化米库氯铵、泮库溴铵、哌库溴铵、rapacuronium溴化物、罗库溴铵、氯化琥珀胆碱、氯化筒箭毒碱、维库溴铵的至少一种(见，例如Nursing 2001 Drug Handbook的531-84页)。

至少一种抗组胺药可以是选自马来酸溴苯吡胺、盐酸西替利嗪、马来酸氯苯吡胺、富马酸氯苯苄咯、盐酸赛庚啶、盐酸苯海拉明、盐酸甲美芳铵、氯雷他定、盐酸异丙嗪、茶异丙嗪、盐酸曲普立定的至少一种。至少一种支气管扩张药可以是选自沙丁胺醇、硫酸沙丁胺醇、氨茶碱、硫酸阿托品、硫酸麻黄碱、肾上腺素、重酒石酸肾上腺素、盐酸肾上腺素、异丙托溴铵、异丙肾上腺素、盐酸异丙肾上腺素、硫酸异丙上腺素、盐酸levalbuterol、硫酸奥西那林、胆茶碱、醋酸吡布特罗、沙美特罗xinafoate、硫酸特布他林、茶碱的至少一种。至少一种祛痰药或者止咳药可以是选自苯佐那酯、磷酸可待因、硫酸可待因、dextramethorphan hydrobromide、盐酸苯海拉明、愈创木酚甘油醚、盐酸氢吗啡酮的至少一种。至少一种混杂呼吸药物可以是选自乙酰半胱氨酸、倍氯美松双丙酸酯、贝雷克坦、布地缩松、calfactant、色甘酸钠、阿法脱氧核糖核酸酶、环前列烯醇钠、氟尼缩松、丙酸氟地松、孟鲁司特钠、来多克罗米钠、palivizumab、曲安奈德、扎鲁司特、弃白通的至少一种(见，例如，Nursing 2001 DrugHandbook的585-642页)。

至少一种抗酸剂、吸附剂或者抗肠胃气胀药可以是选自碳酸铝、氢氧化铝、碳酸钙、氢氧化镁铝、氢氧化镁、氧化镁、simethicone、碳酸氢钠的至少一种。至少一种消化酶或者胆结石增溶剂可以是选自胰酶、胰脂肪酶、ursodiol的至少一种。至少一种止泻药可以是选自attapulgite、碱式水杨酸铋、钙聚丙烯酸树脂、盐酸地芬诺酯或硫酸阿托品、洛哌丁胺、善得定甲地孕酮、阿片酊、阿片酊(含樟脑的)的至少一种。至少一种缓泻药可以是选自bisocodyl、钙聚丙烯酸树脂、鼠李(cascara sagrada)、鼠李芳香的流体提取物、鼠李流体提取物、蓖麻油、琥珀辛酯磺酸钙、琥珀辛酯磺酸钠、甘油、乳果糖、柠檬酸镁、氢氧化镁、硫酸镁、甲基纤维素、矿物油、聚乙二醇或电解质溶液、欧车前、senna、磷酸钠的至少一种。至少一种止吐剂可以是选自盐酸氯丙嗪、茶苯海明、多拉司琼甲磺酸盐、屈大麻酚、盐酸格雷西隆、盐酸氯苯苄嗪、甲氧氯普胺盐酸、盐酸奥丹西隆、奋乃静、甲哌氯丙嗪、乙二磺酸甲哌氯丙嗪、马来酸甲哌氯丙嗪、盐酸异丙嗪、东莨菪碱、马来酸硫乙哌丙嗪、盐酸曲美苄胺的至少一种。至少一种抗溃疡药可以是选自甲腈咪胍、盐酸甲腈咪胍、法莫替丁、达克普隆、迷索前列醇、尼扎替丁、奥美拉唑、雷贝拉唑钠、雷尼替丁枸橼酸铋、盐酸雷尼替丁、硫糖铝的至少一种(见，例如，Nursing 2001Drug Handbook的643-95页)。至少一种皮质类固醇可以是选自倍他米松、醋酸倍他米松或倍他米松磷酸钠、倍他米松磷酸钠、醋酸可的松、地塞米松、醋酸氟美松、地塞米松磷酸钠、醋酸氟氢可的松、氢化可的松、醋酸氢化可的松、氢化可的松环戊丙酸酯、氢可松磷酯钠、氢化可的松琥珀酸钠、甲基强的松龙、醋酸甲基强的松龙、甲氢泼尼松龙琥珀酸钠、氢化泼尼松、醋酸氢化泼尼松、氢化泼尼松磷酸钠、强的松龙叔丁乙酯、强的松、氟羟泊尼松龙、曲安奈德、双醋酸去炎松的至少一种。至少一种雄激素或者促蛋白合成类固醇可以是选自达那唑、氟羟甲睾酮、甲睾酮、癸酸诺龙、苯丙酸诺龙、睾酮、环戊丙酸睾酮、庚酸睾酮、丙酸睾酮、睾酮经皮体系的至少一种。至少一种雌激素或者孕酮可以是选自酯化雌激素、雌二醇、环戊丙酸雌二醇、雌二醇/醋炔诺酮经皮体系、戊酸雌二醇、雌激素(缀合物)、哌嗪雌酮、乙炔雌二醇、乙炔雌二醇和炔雌醇、乙炔雌二醇和双醋炔诺醇、乙炔雌二醇和炔雌醇、乙炔雌二醇和双醋炔诺醇、乙炔雌二醇和左旋甲炔诺酮、乙炔雌二醇和炔诺酮、乙炔雌二醇和醋炔诺酮、乙炔雌二醇和炔诺肟酯、乙炔雌二醇和甲基炔诺酮、乙炔雌二醇和炔诺酮和醋酸盐和富马酸铁、左旋甲炔诺酮、醋酸甲羟孕酮、甲氢龙和诺炔酮、炔诺酮、醋酸炔诺酮、甲基炔诺酮、黄体酮的至少一种。至少一种促性腺激素可以是选自乙酸加尼瑞克、醋酸高纳瑞林、乙酸希司曲林、绝经促性素的至少一种。至少一种抗糖尿病药或者glucaon可以是选自阿卡波糖、氯磺丙脲、格列美脲、格列甲嗪、胰高血糖素、优降糖、胰岛素、盐酸二甲双胍、米格列醇、盐酸吡格列酮、瑞格列奈、马来酸罗格列酮、曲格列酮的至少一种。至少一种甲状腺激素可以是选自左旋甲状腺素钠、碘甲腺氨酸钠、liotrix、甲状腺的至少一种。至少一种甲状腺激素拮抗剂可以是选自甲巯咪唑、碘化钾、碘化钾(饱和溶液)、丙硫氧嘧啶、放射性碘(碘化钠¹³¹I)、浓碘溶液的至少一种。至少一种垂体激素可以是选自促皮质素、二十四肽促皮质素、醋酸去氨加压素、醋酸亮丙瑞林、长效的促皮质素、人蛋氨生长素、促生长激素、加压素的至少一种。至少一种甲状旁腺样药物可以是选自骨化二醇、降钙素(人)、降钙素(鲑鱼)、钙三醇、双氢速变固醇、依替磷酸二钠的至少一种(见，例如，Nursing 2001 DrugHandbook的696-796页)。

至少一种利尿剂可以是选自乙酰唑胺、乙酰唑胺钠、盐酸阿米洛利、布美他尼、氯噻酮、依他尼酸钠、利尿酸、呋塞米、双氢克尿塞、吲达帕胺、甘露醇、美托拉宗、螺内酯、torsemide、氨苯喋啶、脲的至少一种。至少一种电解质或者替代溶液可以是选自乙酸钙、碳酸钙、氯化钙、柠檬酸钙、葡乳醛酸钙、葡庚糖酸钙、葡萄糖酸钙、乳酸钙、磷酸钙(二碱价的)、磷酸钙(三碱价的)、葡聚糖(高分子量)、葡聚糖(低分子量)、羟乙基淀粉、氯化镁、硫酸镁、乙酸钾、碳酸氢钾、氯化钾、葡萄糖酸钾、林格注射液、林格注射液(乳酸盐)、氯化钠的至少一种。至少一种酸化剂或者碱化剂可以是选自碳酸氢钠、乳酸钠、三羟甲基氨基甲烷的至少一种。(见，例如，Nursing 2001Drug Handbook的797-833页)。

至少一种补血药可以是选自富马酸亚铁、葡萄糖酸亚铁、硫酸亚铁、硫酸亚铁(无水的)、右旋糖酐铁、山梨醇铁、多糖-铁络合物、葡糖酸铁钠络合物的至少一种。至少一种抗凝剂可以是选自阿地肝素钠、达肝素钠、danaparoid钠、依诺肝素钠、肝素钙、肝素钠、华法林钠的至少一种。至少一种血液衍生物可以是选自清蛋白5％、清蛋白25％、抗甲种血友病因子、抗抑制剂凝血剂复合物、抗凝血酶III(人)、因子IX(人)、因子IX复合物、血浆蛋白级分的至少一种。至少一种溶血栓酶可以是选自阿替普酶、艾尼斯屈酶、瑞替普酶(重组的)、链激酶、尿激酶的至少一种。(见，例如，Nursing 2001 DrugHandbook的834-66页)。

至少一种烷化药物可以是选自白消安、卡铂、卡氮芥、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、异环磷酰胺、环己亚硝脲、盐酸氮芥、苯丙氨酸氮芥、盐酸苯丙氨酸氮芥、链脲霉素、泰莫佐罗、噻替哌的至少一种。至少一种抗代谢物可以是选自卡培他滨、克拉利平、阿糖胞苷、氟尿苷、磷酸氟达拉滨、氟尿嘧啶、羟基脲、巯基嘌呤、氨甲蝶呤、氨甲蝶呤钠、硫鸟嘌呤的至少一种。至少一种抗生素抗癌瘤药可以是选自硫酸博来霉素、放线菌素D、柠檬酸柔红霉素脂质体、盐酸柔红霉素、盐酸阿霉素、盐酸阿霉素脂质体、盐酸表阿霉素、盐酸去甲柔毛霉素、丝裂霉素、喷托他丁、普卡霉素、戊柔比星的至少一种。改变激素平衡的至少一种抗癌剂可以是选自阿那曲唑、比卡鲁胺、磷雌氮芥、依西美坦、氟利坦、醋酸性瑞林、来曲唑、醋酸亮丙瑞林、甲地孕酮、尼鲁米特、枸橼酸他莫昔芬、睾内酯、柠檬酸涛瑞米芬的至少一种。至少一种混杂抗癌剂可以是选自天冬酰胺酶、卡介苗(BCG)(活的膀胱内的)、达卡巴嗪、多西他赛、依托泊苷、磷酸依托泊苷、盐酸吉西他滨、盐酸依立替康、米托坦、盐酸米托蒽醌、紫杉醇、天门冬酰胺酶、卟吩姆钠、盐酸甲基苄肼、利妥希玛、替尼泊苷、盐酸拓扑替康、司徒曼布、维甲酸、硫酸长春碱、硫酸长春新碱、长春瑞宾的至少一种(见，例如，Nursing 2001 DrugHandbook的867-963页)。

至少一种免疫抑制剂可以是选自硫唑嘌呤、basiliximab、环孢菌素、daclizumab、淋巴细胞免疫球蛋白、鼠单克隆抗体-CD3、霉酚酸酯、盐酸霉酚酸酯、西罗莫司、他克莫司的至少一种。至少一种疫苗或者类毒素可以是选自BCG疫苗、霍乱疫苗、白喉和破伤风类毒素(吸附的)、吸附的白喉和破伤风类毒素和无细胞百日咳疫苗、白喉和破伤风类毒素和完整细胞百日咳疫苗、b型嗜血菌(Haemophiliusb)缀合物疫苗、甲型肝炎疫苗(灭活的)、乙型肝炎疫苗(重组的)、流感病毒疫苗1999-2000三价类型A&B(纯化的表面抗原)、流感病毒疫苗1999-2000三价类型A&B(亚病毒体或纯化的亚病毒体)、流感病毒疫苗1999-2000三价类型A&B(完整病毒体)、日本脑炎病毒疫苗(灭活的)、Lyme病疫苗(重组的OspA)、麻疹和腮腺炎和风疹病毒疫苗(活的)、麻疹和腮腺炎和风疹病毒疫苗(活的减毒的)、麻疹病毒疫苗(活的减毒的)、脑膜炎球菌多糖疫苗、腮腺炎病毒疫苗(活的)、鼠疫疫苗、肺炎球菌疫苗(多价的)、脊髓灰质炎病毒疫苗(灭活的)、脊髓灰质炎病毒疫苗(活的、经口的、三价的)、狂犬病疫苗(吸附的)、狂犬病疫苗(人二倍体细胞)、风疹和腮腺炎病毒疫苗(活的)、风疹病毒疫苗(活的、减毒的)、破伤风类毒素(吸附的)、破伤风类毒素(流体)、伤寒疫苗(经口的)、伤寒疫苗(肠胃外的)、伤寒Vi多糖疫苗、水痘病毒疫苗、黄热病疫苗的至少一种。至少一种抗毒素或抗蛇毒素可以是选自黑寡妇蜘蛛抗蛇毒素、蝮科(Crotalidae)抗蛇毒素(多价的)、白喉抗毒素(马)、黄金珊瑚蛇(Micrurus·fulvius)抗蛇毒素的至少一种。至少一种免疫血清可以是选自巨细胞病毒免疫球蛋白(静脉内的)、乙型肝炎免疫球蛋白(人)、肌内免疫球蛋白、静脉内免疫球蛋白、狂犬病免疫球蛋白(人)、静脉内的呼吸道合胞病毒免疫球蛋白(人)、Rh₀(D)免疫球蛋白(人)、静脉内的Rh₀(D)免疫球蛋白(人)、破伤风免疫球蛋白(人)、水痘-带状疱疹免疫球蛋白的至少一种。至少一种生物应答修饰剂可以是选自阿地流津、重组人类红细胞生成素α、非格司亭、注射用乙酸格拉太咪尔、干扰素alfacon-1、干扰素α-2a(重组的)、干扰素α-2b(重组的)、干扰素β-1a、干扰素β-1b(重组的)、干扰素γ-1b、盐酸左旋咪唑、oprelvekin、沙格司亭的至少一种。(见，例如，Nursing 2001 Drug Handbook的964-1040页)。

至少一种眼科抗感染剂可以是选自杆菌肽、氯霉素、盐酸环丙沙星、红霉素、硫酸庆大霉素、氧氟沙星0.3％、硫酸多粘菌素B、乙酰磺胺钠10％、乙酰磺胺钠15％、乙酰磺胺钠30％、妥布霉素、阿糖腺苷的至少一种。至少一种眼科消炎药可以是选自地塞米松、地塞米松磷酸钠、双氯酚酸钠0.1％、氟氢缩松、氟比洛芬钠、酮咯酸、醋酸氢化泼尼松(悬浮液)氢化泼尼松磷酸钠(溶液)的至少一种。至少一种缩瞳药可以是选自氯乙酰胆碱、卡巴胆碱(眼内的)、卡巴胆碱(局部的)、碘乙膦硫胆碱、毛果芸香碱、盐酸毛果芸香碱、硝酸毛果芸香碱的至少一种。至少一种放瞳剂可以是选自硫酸阿托品、盐酸环喷托酯、盐酸肾上腺素、环硼肾上腺素、氢溴酸后马托品、盐酸新福林、氢溴酸东莨菪碱、托吡卡胺的至少一种。至少一种眼科血管收缩剂可以是选自盐酸萘甲唑啉、盐酸氧甲唑啉、盐酸四氢唑啉的至少一种。至少一种混杂眼药可以是选自盐酸阿拉可乐定、盐酸倍他索洛尔、酒石酸溴莫尼定、盐酸卡替洛尔、盐酸地匹福林、盐酸多佐胺、依美司汀酯、荧光素钠、富马酸酮替芬、拉坦前列素、盐酸左布诺洛尔、盐酸美替洛尔、氯化钠(高渗的)、马来酸噻马洛尔的至少一种。至少一种耳药可以是选自硼酸、过氧化氢脲、氯霉素、三乙醇胺多肽油酸盐-缩合物的至少一种。至少一种鼻药可以是选自倍氯米松双丙酸酯、布地缩松、硫酸麻黄碱、盐酸肾上腺素、氟尼缩松、丙酸氟地松、盐酸萘甲唑啉、盐酸氧甲唑啉、盐酸新福林、盐酸四氢唑啉、曲安奈德、盐酸赛洛唑啉的至少一种(Nursing 2001 DrugHandbook的1041-97页)。

至少一种局部抗感染剂可以是选自无环鸟苷、两性霉素B、壬二酸乳膏、杆菌肽、硝酸布康唑、磷酸克林霉素、克霉唑、硝酸益康唑、红霉素、硫酸庆大霉素、酮康唑、醋酸磺胺米隆、甲硝唑(局部的)、硝酸咪康唑、莫匹罗星、盐酸萘夫替芬、硫酸新霉素、呋喃西林、制霉素、磺胺嘧啶银、盐酸特比萘芬、曲康唑、盐酸四环素、噻康唑、托萘酯的至少一种。至少一种杀疥螨剂或者杀虱剂可以是选自克罗米通、林丹、氯菊酯、除虫菊酯的至少一种。至少一种局部皮质类固醇可以是选自二丙酸倍他米松、戊酸倍他米松、丙酸氯倍他索、丙缩羟强龙、去羟米松、地塞米松、地塞米松磷酸钠、双醋二氟松、醋酸氟轻松、氟轻松、氟氢缩松、丙酸氟地松、halcionide、氢化可的松、醋酸氢化可的松、丁酸氢化可的松、戊酸氢化可的松、糠酸毛他松、曲安奈德的至少一种(见，例如，Nursing 2001 Drug Handbook的1098-1136页)。

至少一种维生素或者矿物质可以是选自维生素A、复合维生素B、氰钴胺素、叶酸、羟钴胺素、甲酰四氢叶酸钙、烟酸、烟酰胺、盐酸吡哆醇、核黄素、盐酸硫胺素、维生素C、维生素D、胆钙化醇、麦角钙化醇、维生素D类似物、1-α-羟基维生素D₂、paricalcitol、维生素E、维生素K类似物、维生素K₁、氟化钠、氟化钠(局部的)、痕量元素、铬、铜、碘、锰、硒、锌的至少一种。至少一种热量可以是选自氨基酸输注液(结晶的)、溶于葡萄糖中的氨基酸输注液、氨基酸输注液与电解质、溶于葡萄糖中的氨基酸输注液与电解质、用于肝衰竭的氨基酸输注液、用于高代谢压力的氨基酸输注液、葡萄糖、脂肪乳剂、中等链甘油三酯(见，例如，Nursing 2001 Drug Handbook的1137-63页)。

本发明的模仿EPO的铰链核心模仿体抗体或多肽组合物可以还含有至少一种任意适宜的和/或有效量的组合物或者药物组合物，其含有至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体蛋白或抗体，所述组合物用于需要这种调节、处理或者治疗的细胞、组织、器官、动物或者患者，所述组合物可以任选还含有选自至少一种TNF拮抗剂(例如，但不限于，TNF化学或者蛋白拮抗剂、TNF单克隆或者多克隆抗体或者片段、可溶性的TNF受体(例如，p55、p70或者p85)或者其片段、融合多肽、或者小分子TNF拮抗剂，例如，TNF结合蛋白I或II(TBP-I或者TBP-II)、nerelimonmab、英夫单抗、enteracept、CDP-571、CDP-870、afelimomab、lenercept，等等)、抗风湿药(例如，氨甲蝶呤、醋硫葡金、葡糖硫金、硫唑嘌呤、etanercept、硫代苹果酸金钠、硫酸羟氯喹、来氟洛米、柳氮磺吡啶)、肌肉松弛药、麻醉药、非类固醇炎症药(NSAID)、镇痛药、麻醉剂、镇静剂、局部麻醉剂、神经肌肉阻滞剂、抗微生物剂(例如，氨基糖苷类、抗真菌剂、抗寄生物剂、抗病毒剂、碳青霉烯、头孢菌素、氟喹诺酮、大环内酯、青霉素、磺胺药物、四环素、另一种抗微生物剂)、抗牛皮癣剂、皮质类固醇、促蛋白合成类固醇、糖尿病相关剂、矿物质、营养物、甲状腺剂、维生素、钙相关激素、止泻剂、止咳药、止吐剂、抗溃疡药、缓泻药、抗凝剂、促红细胞生成素(例如，重组人类红细胞生成素α)、非格司亭(例如，G-CSF、重组人粒细胞集落刺激因子)、沙格司亭(GM-CSF、白细胞素)、免疫剂、免疫球蛋白、免疫抑制剂(例如，basiliximab、环孢菌素、daclizumab)、生长激素、激素替代药物、雌激素受体调节剂、散瞳剂、睫状肌麻痹药、烷化剂、抗代谢物、有丝分裂抑制剂、防辐射药物、抗抑郁药、抗躁狂剂、抗精神病药、抗焦虑药、催眠药、拟交感神经药、兴奋剂、多奈哌齐、单满吖啶氨、哮喘药、β激动剂、吸入类固醇、白细胞三烯抑制剂、甲基黄嘌呤、色甘酸、肾上腺素或类似物、阿法脱氧核糖核酸酶(Pulmozyme)、细胞因子或细胞因子拮抗剂的至少一种。这些细胞因子的非限制性实例包括，但不限于，IL-1到IL-23的任意一种。适宜的剂量是本领域众所周知的。见，例如，Wells等人，编著，Pharmacotherapy Handbook，第二版，Appleton and Lange，Stamford，CT(2000)；PDR Pharmacopoeia，Tarascon PocketPharmacopoeia 2000，Deluxe Edition，Tarascon Publishing，LomaLinda，CA(2000)，将它们每个都完整并入本文作为参考。

此类组合物还可以包括络合、结合本发明的至少一种抗体或多肽、与其共同配制或者与其共同施用的毒素分子。所述毒素可以任选作用以选择性杀死病理性细胞或者组织。病理性细胞可以是癌或者其他细胞。这些毒素可以是，但不限于，纯化的或者重组毒素或者含有毒素的至少一个功能细胞毒性结构域的毒素片段，例如，选自至少一种蓖麻毒蛋白、白喉毒素、蛇毒毒素或者细菌毒素。术语毒素还可以包括任意天然存在的、突变的或者重组细菌或者病毒产生的内毒素和外毒素，所述细菌和病毒可以在人和其他哺乳动物中产生导致死亡的任意病理状况，包括毒素休克。这些毒素可以包括，但不限于，产肠毒素的大肠杆菌热不稳定内毒素(LT)、热稳定肠毒素(ST)、志贺氏菌属(Shigella)细胞毒素、气单胞菌属(Aeromonas)肠毒素、中毒性休克综合征毒素-1(TSST-1)、葡萄球菌(Staphylococcal)肠毒素A(SEA)、B(SEB)或C(SEC)、链球菌(Streptococcal)肠毒素，等等。此类细菌包括，但不限于，产肠毒素大肠杆菌(ETEC)、肠出血性大肠杆菌(例如，血清型0157：H7菌株)、葡萄球菌属物种(例如，金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、Staphylococcus pyogenes)、志贺氏菌属物种(例如，痢疾志贺氏菌(Shigella dysenteriae)，弗氏志贺氏菌(Shigella flexneri)，鲍氏志贺氏菌(Shigella boydii)，和宋内氏志贺氏菌(Shigella sonnei))，沙门氏菌属(Salmonella)物种(例如，伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)，猪霍乱沙门氏菌(Salmonella cholera-suis)，肠炎沙门氏菌(Salmonellaenteritidis))，梭菌属(Clostridium)物种(例如，产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)，艰难梭菌(Clostridium dificile)，肉毒梭菌(Clostridiumbotulinum))，Camphlobacter物种(例如，Camphlobacter jejuni，Camphlobacter fetus)，Heliobacter物种(例如，Heliobacter pylori)，气单胞菌属物种(例如，温和气单胞菌(Aeromonas sobria)，嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)，豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae))，Pleisomonas shigelloides，小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinaenterocolitica)，弧菌属(Vibrios)物种(例如，霍乱弧菌(Vibrios cholera)，副溶血弧菌(Vibrios parahemolyticus))，克雷伯氏菌属(Klebsiella)物种、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)，和链球菌(Streptococci)的物种的菌株。见，例如，Stein，编著，INTERNAL MEDICINE，第三版，1-13页，Little，Brown and Co.，Boston，(1990)；Evans等人，编著，Bacterial Infections of Humans：Epidemiology and Control，第二版，239-254页，Plenum Medical Book Co.，New York(1991)；Mandell等人，Principles and Practice of Infectious Diseases，第三版，ChurchillLivingstone，New York(1990)；Berkow等人，编著，The Merck Manual，第16版，Merck and Co.，Rahway，N.J.，1992；Wood等人，FEMSMicrobiology Immunology，76：121-134(1991)；Marrack等人，Science，248：705-711(1990)，将它们的内容完整并入本文作为参考。

本发明的模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体组合物可以还含有至少一种适宜的辅助剂，如但不限于，稀释剂、粘合剂、稳定剂、缓冲剂、盐、亲脂性溶剂、防腐剂、佐剂等等。优选药学上可接受的辅助剂。制备这些无菌溶液的非限制性实例和方法是本领域众所周知的，如，但不限于，Gennaro，编者，Remington’sPharmaceutical Sciences，第18版，Mack Publishing Co，(Easton，PA)1990。可以常规地选择药学上可接受的载体，它们适用于模仿EPO的铰链核心模仿体组合物的施用方式、溶解性和/或稳定性，如本领域众所周知的或如本文所述的。

可用于本发明的药物赋形剂和添加剂可以包括，但不限于蛋白、肽、氨基酸、脂质和糖(例如，糖，包括单糖、二糖、三糖、四糖和寡糖；衍生糖，如糖醇、醛糖酸、酯化糖等等；和多糖或者糖聚合物)，它们可以单独或者联合存在，单独或者联合按重量计或者体积计构成1-99.99％。示例性蛋白赋形剂包括血清清蛋白，如人血清清蛋白(HSA)、重组人清蛋白(rHA)、明胶、酪蛋白，等等。也可以在缓冲能力中起作用的代表性氨基酸/模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体成分包括丙氨酸、甘氨酸、精氨酸、甜菜碱、组氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、赖氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、阿斯巴甜等等。一种优选的氨基酸是甘氨酸。

适宜用于本发明的糖赋形剂包括，例如，单糖，如果糖、麦芽糖、半乳糖、葡萄糖、D-甘露糖、山梨糖、等等；二糖，诸如乳糖、蔗糖、海藻糖、纤维二糖、等等；多糖，诸如棉子糖、松三糖、麦芽糖糊精、葡聚糖、淀粉、等等；和糖醇，诸如甘露醇、木糖醇、麦芽糖醇(maltitol)、乳糖醇(lactitol)、木糖醇山梨糖醇(葡糖醇(glucitol))、肌醇等等。用于本发明的优选的糖赋形剂为甘露醇、海藻糖，和棉子糖。

模仿EPO的铰链核心模仿体组合物还可以包括缓冲剂或者pH调节剂；通常，缓冲剂为从有机酸或者碱制备的盐。代表性缓冲剂包括有机酸盐，如柠檬酸、抗坏血酸、葡糖酸、碳酸、酒石酸、琥珀酸、乙酸，或邻苯二甲酸的盐；Tris、盐酸三羟甲基氨基甲烷，或磷酸盐缓冲剂。用于本组合物的优选缓冲剂为有机酸盐，如柠檬酸盐。

此外，本发明的模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体组合物可以包括聚合赋形剂/添加剂，如聚乙烯吡咯烷酮、ficolls(聚合糖)、葡聚糖结合剂(例如，环糊精，如2-羟基丙基-β-环糊精)、聚乙二醇、调味剂、抗微生物剂、增甜剂、抗氧化剂、抗静电剂、表面活性剂(例如，聚山梨醇酯，如“TWEEN 20”和“TWEEN 80”)、脂质(例如，磷脂、脂肪酸)、类固醇(例如，胆固醇)、和螯合剂(例如，EDTA)。

适用于根据本发明的模仿EPO的铰链核心模仿体组合物的这些和其他额外的公知药物赋形剂和/或添加剂是本领域公知的，例如，如“Remington：The Science & Practice of Pharmacy”，第19版，Williams& Williams，(1995)，和“Physician’s Desk Reference”，第52版，MedicalEconomics，Montvale，NJ(1998)所列举的那些，它们的公开内容并入本文作为参考。优选的载体或者赋形剂材料是糖(例如，糖类和糖醇)和缓冲剂(例如，柠檬酸盐)或者聚合剂。

制剂

如上面指出的，本发明提供了适于药物或者兽医用途的稳定制剂，其优选包括具有盐水或所选择盐的合适缓冲液，以及任选的含有防腐剂的防腐溶液和制剂，以及多用途防腐制剂，所述制剂含有药学上可接受的制剂中的至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体。防腐制剂含有至少一种公知的防腐剂或者其任选选自苯酚、间-甲酚、对-甲酚、邻-甲酚、氯甲酚、苯甲醇、亚硝酸苯汞、苯氧基乙醇、甲醛、氯代丁醇、氯化镁(例如，六水合物)、对羟基苯甲酸烷基酯(甲基酯、乙基酯、丙基酯、丁基酯等等)、苯扎氯铵、氯化苄乙氧铵、脱氢醋酸钠和硫柳汞的防腐剂，或者它们在水性稀释剂中的混合物。任意适宜的浓度或者混合物都可以使用，如本领域所公知的，如，0.001-5％，或者其中任意范围或者值，如，但不限于，0.001、0.003、0.005、0.009、0.01、0.02、0.03、0.05、0.09、0.1、0.2、0.3、0.4.、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.3、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9，或者其中任意范围或者值。非限制性实例包括，但不限于，0.1-2％间甲酚(例如，0.2、0.3、0.4、0.5、0.9、1.0％)，0.1-3％苯甲醇(例如，0.5、0.9、1.1、1.5、1.9、2.0、2.5％)、0.001-0.5％硫柳汞(例如，0.005、0.01)、0.001-2.0％苯酚(例如，0.05、0.25、0.28、0.5、0.9、1.0％)、0.0005-1.0％对羟基苯甲酸烷基酯(例如，0.00075、0.0009、0.001、0.002、0.005、0.0075、0.009、0.01、0.02、0.05、0.075、0.09、0.1、0.2、0.3、0.5、0.75、0.9、1.0％)、等等。

如上面指出的，本发明提供了制品，其含有包装材料和至少一个瓶子，其含有任选在水性稀释剂中的至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体与规定的缓冲剂和/或防腐剂的溶液，其中所述包装材料包含标签，其指出这种溶液可以保存1、2、3、4、5、6、9、12、18、20、24、30、36、40、48、54、60、66、72小时或更长时间。本发明还包括制品，其包含包装材料、含有冻干的至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的第一个瓶子，和含有规定的缓冲剂或防腐剂的水性稀释剂的第二个瓶子，其中所述包装材料包含标签，其指导患者将所述至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体用水性稀释剂重构以形成可以保存24小时或更长时间的溶液。

根据本发明使用的至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体可以通过重组方法产生，包括从哺乳动物细胞或者转基因制剂产生，或者可以从如本文中描述或者本领域公知的其他生物来源纯化。

本发明产品中至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的量的范围包括重构后(如果为湿润/干燥体系)产生约1.0μg/ml到约1000mg/ml浓度的量，然而更低和更高的浓度是可行的并且取决于计划的递送载体，例如，溶液制剂将与经皮贴剂、肺、跨粘膜或者渗透或微量泵方法不同。

优选地，水性稀释剂任选还含有药学上可接受的防腐剂。优选的防腐剂包括选自苯酚、间-甲酚、对-甲酚、邻-甲酚、氯甲酚、苯甲醇、对羟基苯甲酸烷基酯(甲基酯、乙基酯、丙基酯、丁基酯等等)、苯扎氯铵、氯化苄乙氧铵、脱氢醋酸钠和硫柳汞，或它们的混合物的防腐剂。用于制剂中的防腐剂的浓度为足够产生抗微生物效果的浓度。该浓度取决于所选的防腐剂并且可以由技术人员容易地确定。

其他赋形剂，例如，等渗剂、缓冲剂、抗氧化剂、防腐剂增强剂可以任选和优选地加入到稀释剂中。等渗剂，如甘油，通常以已知浓度使用。优选将生理耐受的缓冲剂加入以提供改善的pH控制。所述制剂可以覆盖宽范围的pH，如从约pH 4到约pH 10，优选的范围为约pH 5到约pH 9，最优选的范围为约6.0到约8.0。优选地，本发明的制剂具有约6.8到约7.8的pH。优选的缓冲剂包括磷酸缓冲液，最优选磷酸钠，尤其磷酸缓冲盐溶液(PBS)。

其他添加剂，如药学上可接受的增溶剂，如Tween 20(聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐单月桂酸酯)、Tween 40(聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐单棕榈酸酯)、Tween 80(聚氧乙烯(20)山梨糖醇酐单油酸酯)、Pluronic F68(聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段共聚物)、和PEG(聚乙二醇)或者非离子表面活性剂，如聚山梨醇酯20或80或泊洛沙姆184或188、Pluronic_polyls，其他嵌段共聚物，和螯合剂，如EDTA和EGTA可任选加入所述制剂或组合物以减小聚集。如果使用泵或者塑料容器施用所述制剂，那么这些添加剂尤其有用。药学上可接受的表面活性剂的存在可以减轻蛋白聚集的倾向。

通过如下方法可以制备本发明的制剂，该方法包括将至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体与防腐剂在水性稀释剂中混合，该防腐剂选自苯酚、间-甲酚、对-甲酚、邻-甲酚、氯甲酚、苯甲醇、对羟基苯甲酸烷基酯(甲基酯、乙基酯、丙基酯、丁基酯等等)、苯扎氯铵、氯化苄乙氧铵、脱氢醋酸钠和硫柳汞，或它们的混合物。用常规溶解和混合方法将所述至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体与防腐剂在水性稀释剂中混合。为了制备适宜的制剂，例如，将缓冲液中的至少一种测量的量的模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体与所希望的防腐剂在缓冲液中以一定量组合，所述量足够提供所需浓度的蛋白和防腐剂。本领域技术人员将认识该方法的变形。例如，所加入的组分的顺序、是否使用额外的添加剂、制备制剂的温度和pH是可以关于浓度和所用施用方式进行最优化的所有因素。

所要求保护的制剂可以以澄清溶液或者两只瓶子提供给患者，其含有一瓶冻干的至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体，其用含有水、防腐剂和/或赋形剂，优选溶于水性稀释剂的磷酸缓冲液和/或盐水和所选盐的第二个瓶子中重构。单个溶液瓶或者需要重构的两只瓶子可以重复使用多次，并且可以满足患者治疗的一个或多个周期，从而可以提供比当前可利用的治疗方案更方便的治疗方案。

要求保护的产品可以用于在立即到24小时或更长时间时间段内施用。因此，本要求保护的制品为患者提供显著的优点。本发明的制剂可以任选在约2℃到约40℃的温度下安全保存并且长时间保持所述蛋白的生物活性，从而允许包装标签指出该溶液可以在6、12、18、24、36、48、72或96小时或更长的时间段内保存和/或使用。如果使用防腐的稀释剂，此类标签可以包括使用最长达1-12月、半年、一年半和/或两年中的至少一种。

通过包括将至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体在水性稀释剂中混合的方法可以制备本发明的至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的溶液。用常规溶解和混合方法实施混合。为了制备稳定的稀释剂，例如，将水或者缓冲液中的至少一种经测量的量的模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体以一定量组合，所述量足够提供所需浓度的蛋白和任选地防腐剂或者缓冲剂。本领域技术人员将认识到该方法的变形。例如，所加入的组分的顺序、是否使用额外的添加剂、制备制剂的温度和pH是可以关于浓度和所用施用方式进行最优化的所有因素。

所要求保护的产品可以以澄清溶液或者两只瓶子提供给患者，其含有一瓶冻干的至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体，其用含有水性稀释剂的第二个瓶子重构。单个溶液瓶或者需要重构的两只瓶子可以重复使用多次，并且可以满足患者治疗的一个或多个周期，从而可以提供比当前可利用的治疗方案更方便的治疗方案。

所要求保护的产品可以间接提供给患者，这可以通过为药房、门诊部或者其他此类机构和设施提供澄清溶液或者两只瓶子，其含有一瓶冻干的至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体，其用含有水性稀释剂的第二个瓶子重构。在该情况中澄清溶液的大小可以最多达1升或更大，从而提供较大的储库(reservoir)，可以一次或多次从该储库取回更小部分的至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体溶液以转移到更小的瓶子中和由药房或者门诊部提供给它们的顾客和/或患者。

包含这些单一瓶子系统的公知的装置包括用于递送溶液的那些笔形注射器装置，如Humaject^_、NovoPen^_、B-D^_Pen，AutoPen^_和OptiPen^_。含有双瓶系统的公知装置包括用于在递送重构溶液的药筒中重构冻干药物的那些笔形注射器系统，如HumatroPen^_。

当前要求保护的产品包括包装材料。包装材料除了提供管理机构要求的信息外，还提供了该产品可以使用的条件。本发明的包装材料提供了患者使用说明，其指导患者将所述至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体在水性稀释剂中重构，以形成溶液和在2-24小时或更长的时间段内使用该双瓶、湿润/干燥产品的溶液。对于单瓶溶液产品，标签指出此类溶液可以在2-24小时或更长时间段内使用。当前要求保护的产品可用于人药品用途。

通过如下方法可以制备本发明的制剂，所述方法包括将至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体和所选缓冲剂，优选含有盐水或者所选盐的磷酸缓冲液混合。用常规溶解和混合方法实施至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体和缓冲剂在水性稀释剂中的混合。为了制备稳定的制剂，例如，将水或者缓冲液中的至少一种经测量的量的模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体以一定量与所需缓冲剂在水中混合，所述量足够提供所需浓度的所述蛋白和缓冲剂。本领域技术人员将认识到该方法的变形。例如，所加入的组分的顺序、是否使用额外的添加剂、制备制剂的温度和pH是可以关于浓度和所用施用方式进行最优化的所有因素。

可以将要求保护的稳定或者防腐制剂以澄清溶液或者两只瓶子提供给患者，其含有一瓶冻干的至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体，其用含有溶于水性稀释剂中的防腐剂或缓冲剂和赋形剂的第二个瓶子重构。单个溶液瓶或者需要重构的两只瓶子可以重复使用多次，并且可以满足患者治疗的一个或多个周期，从而可以提供比当前可利用的治疗方案更方便的治疗方案。

如本领域公知的，文中描述的稳定或者防腐制剂或溶液中的至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体可以根据本发明通过多种递送方法施用于患者，所述递送方法包括皮下(SC)或者肌内(IM)注射；经皮、肺、跨粘膜、植入、渗透泵、药筒、微型泵或者技术人员理解的其他方法。

治疗应用

关于模仿体的本发明还提供了调节或治疗细胞、组织、器官、动物或患者中的贫血的方法，包括但不限于，至少一种任意的贫血、癌症治疗有关的贫血、放疗或化疗有关的贫血、病毒或细菌感染治疗有关的贫血、肾贫血、早熟的贫血、儿科和/或成人癌症-有关的贫血、与淋巴瘤、骨髓瘤、多发性骨髓瘤有关的贫血、AIDS-有关的贫血、有或没有等待择期手术、手术的术前和术后的自体供血的伴随治疗、自体供血或输血、手术期间的管理、周期性中性粒细胞减少症或Kostmann综合症(先天性粒细胞缺乏症)、晚期肾病、与透析有关的贫血、慢性肾机能不全、原发性造血疾病，例如先天性再生不良性贫血、重型地中海贫血或镰刀形红细胞贫血病、镰刀形红细胞贫血病的血管闭塞并发症。Furman等，Pediatrics 1992；90：716-728，GoldbergScience.1988；242：1412-1415；Paul等，Exp Hematol.1984；12：825-830；Erslev等，Arch Intern Med.1968；122：230-235；Ersley等，Ann ClinLab Sci.1980；10：250-257；Jacobs等，Nature.1985；313：806-810；Lin等，Proc Natl Acad Sci USA.1985；82：7580-7584；Law等，Proc NatlAcad Sci USA.1986；83：6920-6924；Goldwasser等，J Biol Chem.1974；249：4202-4206；Eaves et a.，Blood.1978；52：1196-1210；Sawyer等，Blood.1989；74：103-109；Winearls等，Lancet.1986；2：1175-1178；Eschbach等，N Engl J Med.1987；316：73-78；Eschbach等，Ann InternMed.1989；111：992-1000，每篇文献在本文中全文引作参考。

本发明的模仿体也可以用于非肾形式的贫血，其由例如慢性感染、炎性过程、放射治疗和抑制细胞的药物治疗诱发，且已经报道了患有非肾贫血的患者的令人鼓舞的结果。见，例如，Abels RI和Rudnick SA Erythropoietin：evolving clinical applications.Experimental Hematology 19：842-50(1991)；Graber SE和Krantz SBErythropoietin：biology and clinical use.Hematology/Oncol.Clin.North Amer.3：369-400(1989)；Jelkman W和Gross AJ(eds)Erythropoietin.Springer，Berlin 1989；Koury MJ和Bondurant MCThe molecular mechanism of erythropoietin action.European Journalof Biochemistry 210：649-63(1992)；Krantz SB Erythropoietin.Blood77：419-34(1991)；Tabbara IA Erythropoietin.Biology and clinicalapplications.Archives of Internal Medicine 153：298-304(1993)，每篇都在本文中全文引作参考。

本发明还提供了调节或治疗细胞、组织、器官、动物或患者中的贫血或血细胞有关的状况的方法，其中所述的贫血或血细胞有关的状况与下述的至少一种有关，包括但不限于，至少一种免疫有关的疾病、心血管疾病、传染性的、恶性的和/或神经的疾病。这样的方法可以任选地包含给需要这样的调节、处理或治疗的细胞、组织、器官、动物或患者施用有效量的至少一种组合物或药物组合物，其包含至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体。

本发明还提供了调节或治疗细胞、组织、器官、动物或患者中的癌症/传染病的方法，包括但不限于，至少一种急性或慢性细胞感染，急性和慢性寄生性或感染性过程，包括细菌、病毒和真菌感染、HIV感染/HIV神经病、脑膜炎、肝炎、脓毒性关节炎、腹膜炎、肺炎、会厌炎、大肠杆菌0157：h7、溶血性尿毒性综合征/溶解血栓性血小板减少性紫癜、疟疾、登革出血热、利什曼病、麻风病、中毒性休克综合征、链球菌性肌炎、气性坏疽、结核分枝杆菌、细胞内鸟分枝杆菌、卡氏肺囊虫性肺炎、盆腔炎症性疾病、睾丸炎/附睾炎、军团菌、Lyme病、a型流行性感冒、EB病毒、vital-associated hemaphagocyticsyndrome、重要脑炎/无菌性脑膜炎等；(ii)白血病、急性白血病、急性成淋巴细胞性白血病(ALL)、B细胞、T细胞或FAB ALL、急性髓细胞样白血病(AML)、慢性粒细胞性白血病(CML)、慢性淋巴细胞性白血病(CLL)、毛细胞性白血病、骨髓异常增生综合征(MDS)、淋巴瘤、何杰金病、恶性淋巴瘤、非何杰金淋巴瘤、Burkitt氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤、卡波西肉瘤、结肠直肠癌、胰腺癌、鼻咽癌、恶性组织细胞增多病、恶性肿瘤的肿瘤相关综合征/高血钙综合征、实体瘤、腺癌、肉瘤、恶性黑色素瘤等；或(iii)神经变性疾病、多发性硬化、偏头痛、AIDS痴呆综合征、脱髓鞘疾病，如多发性硬化和急性横贯性脊髓炎；锥体束外和小脑病症，诸如脊髓皮质系统的病变；基底神经节的病症或小脑的病症；运动机能亢进性运动障碍，如亨廷顿舞蹈病和老年性舞蹈病；药物-诱发的运动失调，如阻断CNS多巴胺受体的药物诱导的运动失调；运动机能减退性运动失调，如帕金森病；进行性核上麻痹；小脑的结构病变；脊髓小脑变性，如脊椎性共济失调、弗里德赖希共济失调、小脑皮质变性、多系统变性(multiple systems degeneration)(Mencel、Dejerine-Thomas、Shi-Drager和Machado-Joseph)；全身性失调(Refsum氏病、血β脂蛋白缺乏症、共济失调、毛细血管扩张，和线粒体多系统失调)；脱髓鞘核心失调，如多发性硬化、急性横贯性脊髓炎；和运动单位的失调，如神经原性肌萎缩(前角细胞变性，如肌萎缩性侧索硬化症、婴儿脊髓性肌萎缩和青少年脊髓性肌萎缩)；阿尔茨海默氏病；中年唐氏综合征；弥散性Lewy体病；Lewy体型老年性痴呆；Wernicke-Korsakoff综合征；慢性酒精中毒；Creutzfeldt-Jakob病；亚急性硬化性全脑炎、Hallerrorden-Spatz病；和拳击员痴呆(Dementia pugilistica)、等等。这种方法可以任选包括对需要这种调节、处理或者治疗的细胞、组织、器官、动物或者患者施用有效量的含有至少一种TNF抗体或者特定部分或者变体的组合物或者药物组合物。见，例如，Merck Manual，第16版，Merck & Company，Rahway，NJ(1992)。

这种方法可以任选地包含给需要这样的调节、处理或治疗的细胞、组织、器官、动物或患者施用有效量的至少一种组合物或药物组合物，其包含至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体。

本发明还提供了调节或治疗细胞、组织、器官、动物或者患者中至少一种心血管疾病的方法，所述疾病包括但不限于下述的至少一种：心脏震昏综合征、心肌梗死、充血性心力衰竭、中风、缺血性中风、出血、动脉硬化症、动脉粥样硬化、糖尿病性动脉硬化病、高血压、动脉高压、肾血管性高血压、昏厥、休克、心血管系统梅毒、心力衰竭、肺源性心脏病、原发性肺动脉高压、心律失常、心房异位搏动、心房扑动、心房颤动(持续或阵发的)、紊乱性或多源性房性心动过速、规则狭窄性QRS心动过速、特殊心律失常、心室颤动、希氏束心律失常、房室传导阻滞、束支传导阻滞、心肌局部缺血失调、冠状动脉病、心绞痛pectoris、心肌梗死、心肌病、扩张性充血性心肌病、限制性心肌病、瓣膜心脏病、心内膜炎、心包病、心脏肿瘤、主动脉和周围性动脉瘤、主动脉壁夹层形成、主动脉炎症、腹主动脉及其分支阻塞、外周血管紊乱、阻塞性动脉紊乱、外周动脉粥样硬化病、血栓闭塞性血管炎、功能性外周动脉紊乱、Raynaud氏现象和疾病、手足发绀、红斑性肢痛病、静脉病、静脉血栓形成、曲张静脉、动静脉瘘、lymphederma、脂肪水肿、不稳定心绞痛、再灌注损伤、泵后综合征(post pump syndrome)、局部缺血-再灌注损伤、等等。此种方法可以任选包括对需要这种调节、处理或治疗的细胞、组织、器官、动物或者患者施用有效量的含有至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的组合物或药物组合物。

本发明的任一种方法可以包含给需要这样的调节、处理或治疗的细胞、组织、器官、动物或患者施用有效量的组合物或药物组合物，其包含至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体。这样的方法还可以任选地包含用于治疗这样的免疫疾病的共同施用或组合治疗，其中所述的至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体、其特定部分或变体的施用，还包括在其施用之前、同时和/或之后施用选自如下的至少一种：至少一种TNF拮抗剂(例如，但不限于，TNF抗体或者片段、可溶性的TNF受体或者其片段、融合多肽、或者小分子TNF拮抗剂)、抗风湿药、肌肉松弛药、麻醉药、非类固醇消炎药(NSAID)、镇痛药、麻醉剂、镇静剂、局部麻醉剂、神经肌肉阻滞剂、抗微生物剂(例如，氨基糖苷类、抗真菌剂、抗寄生物剂、抗病毒剂、碳青霉烯、头孢菌素、氟喹诺酮、大环内酯、青霉素、磺胺药物、四环素、另一种抗微生物剂)、抗牛皮癣剂、皮质类固醇、促蛋白合成类固醇、糖尿病相关剂、矿物质、营养物、甲状腺剂、维生素、钙相关激素、止泻剂、止咳药、止吐剂、抗溃疡药、缓泻药、抗凝剂、促红细胞生成素(例如，重组人类红细胞生成素α)、非格司亭(例如，G-CSF、重组人粒细胞集落刺激因子)、沙格司亭(GM-CSF、白细胞素)、免疫剂、免疫球蛋白、免疫抑制剂(例如，basiliximab、环孢菌素、daclizumab)、生长激素、激素替代药物、雌激素受体调节剂、散瞳剂、睫状肌麻痹药、烷化剂、抗代谢物、有丝分裂抑制剂、防辐射药物、抗抑郁药、抗躁狂剂、抗精神病药、抗焦虑药、催眠药、拟交感神经药、兴奋剂、多奈哌齐、单满吖啶氨、哮喘药、β激动剂、吸入类固醇、白细胞三烯抑制剂、甲基黄嘌呤、色甘酸、肾上腺素或类似物、阿法脱氧核糖核酸酶(Pulmozyme)、细胞因子或细胞因子拮抗剂。适宜的剂量是本领域众所周知的。见，例如，Wells等人，编著，Pharmacotherapy Handbook，第二版，Appleton and Lange，Stamford，CT(2000)；PDR Pharmacopoeia，Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000，Deluxe Edition，TarasconPublishing，Loma Linda，CA(2000)，将它们每个都完整并入本文作为参考。

也可以离体(ex vivo)使用模仿体，例如在自体骨髓培养物中。简而言之，从患者取出骨髓，然后进行化疗和用TPO和/或EPO处理，任选地与模仿体组合，任选地与一种或多种其它细胞因子组合。然后在化疗后，将处理过的骨髓返回患者，以加速骨髓的恢复。另外，单独的或者与EPO模仿体和/或EPO相组合的TPO，也可以用于骨髓或外周血祖细胞(PBPC)的离体扩展。在化疗处理之前，可以用干细胞因子(SCF)或G-CSF刺激骨髓，以将早期祖细胞释放进外周循环。任选地从外周血中收集并浓缩这些祖细胞，然后在含有TPO和模仿体的培养物中处理，任选地与一种或多种其它的细胞因子组合，所述细胞因子包括但不限于SCF、G-CSF、IL-3、GM-CSF、IL-6或IL-11，以分化和繁殖成高密度的巨核细胞培养物，然后任选地在高剂量化疗后将其返回至患者。用于离体处理骨髓的TPO的剂量范围是100pg/ml至10ng/ml，优选地500pg/ml至3ng/ml。模仿体的剂量在活性上与可以以0.1单位/ml至20单位/ml，优选地0.5单位/ml至2单位/ml或其中的任意范围或值使用的EPO相当。

适于本发明的组合物、组合疗法、共同施用、装置和/或方法的TNF拮抗剂(还包括本发明的至少一种抗体、其特定部分和变体)包括，但不限于，抗TNF抗体、其配体结合片段、和特异结合TNF的受体分子；防止和/或抑制TNF合成、TNF释放或者其对靶细胞的作用的化合物，如沙力度胺、替尼达普、磷酸二酯酶抑制剂(例如、己酮可可碱和环戊苯吡酮)、A2b腺苷受体激动剂和A2b腺苷受体增强剂；防止和/或抑制TNF受体信号转导的化合物，如促分裂原活化蛋白(MAP)激酶抑制剂；阻断和/或抑制膜TNF切割的化合物，如金属蛋白酶抑制剂；阻断和/或抑制TNF活性的化合物，如血管紧张肽转化酶(ACE)抑制剂(例如，卡托普利)；和阻断和/或抑制TNF产生和/或合成的化合物，如MAP激酶抑制剂。

文中所用的“肿瘤坏死因子抗体”、“TNF抗体”、“TNFα抗体”或者片段等减小、阻断、抑制、消除或者干扰体外、原位和/或优选体内的TNFα活性。例如，本发明的适宜的TNF人抗体可以结合TNFα并且包括抗-TNF抗体、其抗原结合片段，和特异结合TNFα的特定突变体或其结构域。适宜的TNF抗体或者片段也可以减小、阻断、消除、干扰、防止和/或抑制TNF RNA、DNA或者蛋白合成、TNF释放、TNF受体信号转导、膜TNF切割、TNF活性、TNF产生和/或合成。

嵌合抗体cA2由高亲和性中和小鼠抗人TNFα IgG1抗体的抗原结合可变区(称作A2)和人IgG1的恒定区κ免疫球蛋白组成。人IgG1Fc区域提高同种异体抗体效应子功能，增加循环血清半衰期和减小抗体的免疫原性。嵌合抗体cA2的抗体亲抗原性和表位特异性来源于鼠抗体A2的可变区。在具体实施方案中，编码鼠抗体A2的可变区的核酸的优选来源是A2杂交瘤细胞系。

嵌合A2(cA2)以依赖剂量的方式中和天然和重组人TNFα的细胞毒性效应。根据嵌合抗体cA2和重组人TNFα的结合测定，计算出嵌合抗体cA2的亲和力常数为1.04×10¹⁰M^-1。通过竞争性抑制测定单克隆抗体特异性和亲和力的优选方法可以在Harlow，等人，Antibodies：A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor LaboratoryPress，Cold Spring Harbor，New York，1988；Colligan等人，编著，Current Protocols in Immunology，Greene Publishing Assoc.andWiley Interscience，New York，(1992-2003)；Kozbor等人，Immunol.Today，4：72-79(1983)；Ausubel等人，编著Current Protocols inMolecular Biology，Wiley Interscience，New York(1987-2003)；和Muller，Meth.Enzymol，92：589-601(1983)中发现，将它们完整并入本文作为参考。

在具体实施方案中，通过称作c134A的细胞系产生鼠单克隆抗体A2。由称作c168A的细胞系产生嵌合抗体cA2。

可用于本发明的单克隆抗-TNF抗体的额外实例在本领域中描述(见，例如，美国专利号5,231,024；M_ller，A.等人，Cytokine 2(3)：162-169(1990)；美国专利号07/943,852(1992年9月11日提交)；Rathjen等人，国际公开号WO 91/02078(1991年2月21日公开)；Rubin等人，EPO专利公开号0 218 868(1987年4月22日公开)；Yone等人，EPO专利申请号0 288 088(1988年10月26日)；Liang，等人，Biochem.Biophys.Res.Comm.137：847-854(1986)；Meager，等人，Hybridoma 6：305-311(1987)；Fendly等人，Hybridoma 6：359-369(1987)；Bringman，等人，Hybridoma6：489-507(1987)；和Hirai，等人，J.Immunol.Meth.96：57-62(1987)，将它们完整并入本文作为参考。

TNF受体分子

用于本发明的优选TNF受体分子为以高亲和力结合TNFα的那些分子(见，例如，Feldmann等人，国际公开号WO 92/07076(1992年4月30日公开)；Schall等人，Cell 61：361-370(1990)；和Loetscher等人，Cell 61：351-359(1990)，将它们完整并入本文作为参考)，并且任选具有低免疫原性。具体地，55kDa(p55 TNF-R)和75kDa(p75 TNF-R)TNF细胞表面受体用于本发明。含有受体的细胞外结构域(ECD)或者其功能部分的这些受体的截短形式(见，例如，Corcoran等人，Eur.J.Biochem.223：831-840(1994))也可用于本发明。TNF受体的含有ECD的截短形式已经在尿和血清中检测为30kDa和40kDa的TNFα抑制性结合蛋白(Engelmann，H.等人，J.Biol.Chem.265：1531-1536(1990))。TNF受体多聚体分子和TNF免疫受体融合分子和其衍生物和片段或部分是用于本发明的方法和组合物中的TNF受体分子的额外实例。可用于本发明的TNF受体分子的特征在于它们能够长时间治疗患者并且良好到极大地减轻症状和具有低毒性。低免疫原性和/或高亲和力，以及其他未定义的性质可以有助于所实现的治疗结果。

用于本发明的TNF受体多聚体分子含有通过一种或多种多肽接头或者其他非肽接头，如聚乙二醇(PEG)连接的两个或多个TNF受体的ECD的所有或功能部分。该多聚体分子可以还含有分泌蛋白的信号肽以指导该多聚体分子的表达。这些多聚体分子和它们的产生方法已经在美国申请号08/437,533(1995年5月9日提交)中描述，将其内容完整并入本文作为参考。

用于本发明方法和组合物的TNF免疫受体融合分子包括一种或多种免疫球蛋白分子的至少一部分和一种或多种TNF受体的所有或功能部分。这些免疫受体融合分子可以装配为单体、或者异型-或者同型多聚体。免疫受体融合分子也可以是单价或多价的。这种TNF免疫受体融合分子的实例是TNF受体/IgG融合蛋白。TNF免疫受体融合分子和它们的产生方法已经在本领域描述(Lesslauer等人，Eur.J.Immunol.21：2883-2886(1991)；Ashkenazi等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88：10535-10539(1991)；Peppel等人，J.Exp.Med.174：1483-1489(1991)；Kolls等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA91：215-219(1994)；Butler等人，Cytokine 6(6)：616-623(1994)；Baker等人，Eur.J.Immunol.24：2040-2048(1994)；Beutler等人，美国专利号5,447,851；和美国申请号08/442,133(1995年5月16日提交)，将它们每一个的内容都完整并入本文作为参考)。产生免疫受体融合分子的方法也可以在Capon等人，美国专利号5,116,964；Capon等人，美国专利号5,225,538；和Capon等人，Nature337：525-531(1989)中发现，将其内容完整并入本文作为参考。

TNF受体分子的功能等价物、衍生物、片段或者区域指TNF受体分子的部分、或者编码TNF受体分子的TNF受体分子序列的部分，其具有足够大小和序列以在功能上类似可以用于本发明的TNF受体分子(例如，以高亲和力结合TNFα并且具有低免疫原性)。TNF受体分子的功能等价物还可以包括经修饰的TNF受体分子，其在功能上类似用于本发明的TNF受体分子(例如，以高亲和力结合TNFα并且具有低免疫原性)。例如，TNF受体分子的功能等价物可以含有“沉默(SILENT)”密码子或者一个或多个氨基酸替代、缺失或者添加(例如，用一个酸性氨基酸替代另一个酸性氨基酸；或者用编码相同或不同疏水氨基酸的一个密码子替代编码疏水氨基酸的另一密码子)。见，Ausubel等人，CurrentProtocols in Molecular Biology，Greene Publishing Assoc.and Wiley-Interscience，New York(1987-2003)。

细胞因子包括，但不限于所有公知的细胞因子，见，例如，CopewithCytokines.com。细胞因子拮抗剂包括，但不限于，任意抗体、片段或者模拟物、任意可溶受体、片段或模拟物、任意小分子拮抗剂，或者它们的任意组合。

本发明的任一种方法可以包括治疗蛋白介导的疾病的方法，其包括对需要这种调节、处理或者治疗的细胞、组织、器官、动物或者患者施用有效量的含有至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的组合物或者药物组合物。这种方法可以任选还包括共同施用或者联合疗法以治疗此类免疫疾病，其中所述至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体、其特定部分或变体的施用还包括在其施用之前、同时和/或之后施用至少一种选自下面的药物：至少一种其他细胞因子，如IL-3、-6和-11；干细胞因子；G-CSF和GM-CSF。

通常，通过施用至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体组合物的有效量或剂量实现病理状况的治疗，所述组合物总共平均范围为至少约0.01到500毫克的至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体/千克患者/剂，优选至少约0.1到100毫克模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体/千克患者/单次或多次施用，这取决于组合物中所含的比活。备选地，有效血清浓度可以包括0.1-5000μg/ml血清浓度/单次或多次施用。适宜的剂量是医学从业人员公知的，并且将当然取决于具体疾病状态、所施用的组合物的比活和经历治疗的具体患者。在一些情况中，为了实现所需的治疗量，必须提供重复施用，即重复单次施用具体监控或者计量的剂量，其中重复单次施用直到实现所需的日剂量或者效果。

优选剂量可以任选包括0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、009、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29和/或30mg/kg/施用，或者其任意范围、值或者分数，或者用于实现0.1、0.5、0.9、1.0、1.1、1.2、1.5、1.9、2.0、2.5、2.9、3.0、3.5、3.9、4.0、4.5、4.9、5.0、5.5、5.9、6.0、6.5、6.9、7.0、7.5、7.9、8.0、8.5、8.9、9.0、9.5、9.9、10、10.5、10.9、11、11.5、11.9、20、12.5、12.9、13.0、13.5、13.9、14.0、14.5、4.9、5.0、5.5.、5.9、6.0、6.5、6.9、7.0、7.5、7.9、8.0、8.5、8.9、9.0、9.5、9.9、10、10.5、10.9、11、11.5、11.9、12、12.5、12.9、13.0、13.5、13.9、14、14.5、15、15.5、15.9、16、16.5、16.9、17、17.5、17.9、18、18.5、18.9、19、19.5、19.9、20、20.5、20.9、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、96、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500和/或5000μg/ml血清浓度/单次或多次施用，或者其任意范围、值或者分数。

备选地，所施用的剂量可以取决于公知的因素而变，所述因素为诸如具体试剂的药物动力学特征，和其施用方式和途径；受体的年龄、健康和体重；症状的性质和程度、当前治疗的种类、治疗频率，和所需的效果。通常，活性成分的剂量可以为约0.1到100毫克/千克体重。通常，0.1到50，且优选0.1到10毫克/千克体重/施用或者持续释放形式可以有效得到所需的结果。

作为非限制性实例，人或动物的治疗可以提供为本发明的至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的一次性或者定期剂量，所述剂量为0.01到100mg/kg，如0.5、0.9、1.0、1.1、1.5、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、40、45、50、60、70、80、90或100mg/kg/天，在第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40天的至少一天，或者备选地，在第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20周的至少一周，或者它们的任意组合，使用单次、输注或者重复剂次。

适于内部施用的剂型(组合物)通常含有约0.0001毫克到约500毫克活性成分/单位或容器。在这些药物组合物中，活性成分将通常以按组合物的总重量计约0.5-95％的量存在。

对于肠胃外施用，可以将模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体制备成溶液、悬浮液、乳剂或者冻干粉末，它们结合药学上可接受的肠胃外载体或者与所述载体分别提供。此类载体的实例为水、盐水、林格溶液、葡萄糖溶液和5％人血清清蛋白。也可以使用脂质体和非水性载体，如固定化油。载体或者冻干粉末可以含有添加剂，其保持等渗性(例如，氯化钠、甘露醇)和化学稳定性(例如，缓冲剂和防腐剂)。通过公知的或适宜的技术将制剂灭菌。

适宜的药物载体在本领域的标准参考书Remington’sPharmaceutical Sciences，A.Osol中的最近版本中描述。

治疗性施用

根据本发明可以使用许多公知的和开发的方式以用于施用药学有效量的至少一种根据本发明的模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体。尽管在下面的描述中采用经肺施用，但根据本发明可以使用其他施用方式以得到适宜的结果。

本发明的模仿EPO的铰链核心模仿体可以在载体中递送，作为溶液、乳剂、胶体或者悬浮液，或者作为粉末，所述递送使用适于通过吸入施用的多种装置和方法或本文中描述或者本领域公知的其他方式的任意一种。

肠胃外制剂和施用

用于肠胃外施用的制剂可以含有作为普通赋形剂的无菌水或者盐水，聚亚烷基二醇，如聚乙二醇、植物来源的油、氢化萘等等。用于注射的水性或者油性悬浮液可以通过使用适宜的乳化剂或者湿润剂和悬浮剂，根据公知的方法制备。注射用试剂可以是无毒、非经口施用的稀释剂，如溶剂中的水性溶液或者无菌注射液或者悬浮液。作为可用的载体或者溶剂，可以使用水、林格溶液、等渗盐水等等；作为普通溶剂，或者悬浮溶剂，可以使用无菌不挥发性油。为此，可以使用任意类型的不挥发油和脂肪酸，包括天然或合成的或半合成的脂肪油或者脂肪酸；天然或合成的或半合成的甘油单酯、甘油二酯或甘油三酯。肠胃外施用是本领域公知的，并且包括，但不限于，常规注射方式，如美国专利号5,851,198中描述的气压无针头注射装置，和如美国专利号5,839,446中描述的激光穿孔装置，将它们完整并入本文作为参考。

备选递送

本发明还提供了至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的施用，所述施用通过肠胃外的、皮下的、肌内的、静脉内的、快速灌注、阴道的、直肠的、口腔的、舌下的、鼻内的或经皮的方式施用。蛋白模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体抗体组合物可以制备用于在肠胃外(皮下、肌内或静脉内)施用，具体为液体溶液或者悬浮液形式；用于阴道或者直肠施用，特别是以半固体形式，如乳膏和栓剂；用于口腔或者舌下施用，具体为片剂或者胶囊形式；或者鼻内施用，具体为粉末、鼻滴剂或者气溶胶或者某些试剂的形式；或者经皮施用，具体为凝胶、软膏、洗剂、悬浮液或者贴剂递送系统，其具有化学增强剂，如二甲基亚砜，以用以修饰皮肤结构或者增加经皮贴剂中的药物浓度(Junginger，等人，“Drug Permeation Enhancement”；Hsieh，D.S.，编著，59-90页(Marcel Dekker，Inc.New York 1994，将其完整并入本文作为参考)，或者含有氧化剂，其使得能够将含有蛋白和肽的制剂应用于皮肤(WO 98/53847)，或者应用电场以产生瞬时转运途径，如电穿孔，或者增加带电药物通过皮肤的运动性，如离子电渗疗法，或者应用超声，如超声波导入术(sonophoresis)(美国专利号4,309,989和4,767,402)(将上面的公开和专利完整并入本文作为参考)。

肺/鼻施用

对于经肺施用，优选至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体组合物以有效达到肺或者窦的下部气道的颗粒大小递送。根据本发明，至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体可以通过本领域公知的多种吸入或者鼻装置的任一种递送，以通过吸入施用治疗剂。能够将气溶胶化的制剂沉积在患者的窦腔或者肺泡中的这些装置包括计量的剂量吸入器、雾化器、干粉产生器、喷雾器等等。适于将指导模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体经肺或者鼻施用的其他装置也是本领域众所周知的。所有此类装置都可以使用适于以气溶胶分配模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的施用的制剂。此类气溶胶可以由溶液(水性和非水性)或者固体颗粒组成。计量的剂量吸入器，像Ventolin^_计量的剂量吸入器，通常使用推进气体并且需要在吸气期间的启动(见，例如，WO 94/16970，WO 98/35888)。干粉吸入器，像Inhale Therapeutics上市的Turbuhaler^TM(Astra)，Rotahaler^_(Glaxo)，Diskus^_(Glaxo)，Spiros^TM吸入器(Dura)装置和Spinhaler^_粉末吸入器(Fisons)使用混合粉末的呼吸启动(US 4668218 Astra，EP237507 Astra，WO 97/25086 Glaxo，WO 94/08552 Dura，US 5458135Inhale，WO 94/06498 Fisons，将它们完整并入本文作为参考)。雾化器像AERx^TM Aradigm、Ultravent^_雾化器(Mallinckrodt)和Acorn II^_雾化器(Marquest Medical Products)(US 5404871 Aradigm，WO97/22376)(将上面参考文献完整并入本文作为参考)从溶液产生气溶胶，而计量的剂量吸入器、干粉吸入器等等产生小颗粒气溶胶。通过商业途径可获得的吸入装置的这些特定实例意在代表适于本发明实践的特定装置，并且不意在限制本发明的范围。优选地，含有至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的组合物通过干粉吸入器或者喷雾器施用。施用本发明的至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的吸入装置存在几种所需的特征。例如，通过吸入装置递送有利地为可靠的、可再现的和准确的。吸入装置可以任选递送小的干燥颗粒，例如，小于约10μm，优选约1-5μm，以得到良好的可呼吸性。

作为喷雾施用模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体组合物

通过将至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的悬浮液或者溶液加压通过喷嘴可以产生包含模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体组合物蛋白的喷雾。可以选择喷嘴大小和构造、所应用的的压力和液体加料速率以实现所需的输出和颗粒大小。例如，通过电场与毛细管或喷嘴加料相结合可以产生电喷雾。有利地，通过喷雾器递送的至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体组合物蛋白的颗粒的颗粒大小小于约10μm，优选约1μm到约5μm，最优选约2μm到约3μm。

适宜使用喷雾器的至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体组合物蛋白的制剂通常包括在水性溶液中浓度约1mg到约20mg至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体组合物蛋白/ml溶液的模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体组合物蛋白。该制剂可以包括如下试剂，诸如赋形剂、缓冲剂、等渗剂、防腐剂、表面活性剂，且优选地，锌。该制剂还可以包括用于稳定模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体组合物蛋白的赋形剂或者试剂，如缓冲剂、还原剂、总蛋白或者糖。用于制备模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体组合物蛋白的总蛋白包括清蛋白、鱼精蛋白等等。用于配制模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体组合物蛋白的一般的糖包括蔗糖、甘露醇、乳糖、海藻糖、葡萄糖，等等。所述模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体组合物蛋白制剂还可以包括表面活性剂，其可以减小或者防止在形成气溶胶中通过溶液的喷雾导致的模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体组合物蛋白的表面诱导的聚集。可以使用多种常规表面活性剂，如聚氧乙烯脂肪酸酯和醇，和聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯。用量将通常为按制剂的重量计0.001到14％。用于本发明的特别优选的表面活性剂为聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20等等。用于蛋白，如模仿体，或者特定部分或者变体的制备的本领域中公知的其他试剂也可以包括在所述制剂中。

通过雾化器施用模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体组合物

通过雾化器，如喷射雾化器或者超声雾化器施用模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体组合物蛋白。通常，在喷射雾化器中，用受压的空气来源通过孔产生高速气体喷射。在气体通过喷嘴膨胀时，产生低压区，其通过连接液体储库的毛细管吸取模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体组合物蛋白溶液。来自毛细管的液体流当离开管时剪切成不稳定的细丝或者小滴，从而产生气溶胶。可以用一系列结构、流速和挡板类型从给定的喷射雾化器产生所需的性能特征。在超声雾化器中，用高频率电能产生振动的机械能量，通常使用压电转换器。该能量直接地或通过耦合流体传递到模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体组合物蛋白的制剂，从而产生含有模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体组合物蛋白的气溶胶。有利地，通过雾化器递送的模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体组合物蛋白的颗粒的颗粒大小小于约10μm，优选约1μm到约5μm，最优选约2μm到约3μm。

适于使用喷射或者超声雾化器的至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的制剂通常在水溶液长包括约1mg到约20mg至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体蛋白/ml溶液的浓度的模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体组合物蛋白。该制剂可以包括如下试剂，诸如赋形剂、缓冲剂、等渗剂、防腐剂、表面活性剂，和优选地，锌。该制剂还可以包括用于稳定至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体组合物蛋白的赋形剂或者试剂，如缓冲剂、还原剂、总蛋白或者糖。用于制备至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体组合物蛋白的总蛋白包括清蛋白、鱼精蛋白等等。用于制备至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的一般的糖包括蔗糖、甘露醇、乳糖、海藻糖、葡萄糖，等等。所述至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体制剂还可以包括表面活性剂，其可以减小或者防止在形成气溶胶中通过溶液的喷雾导致的至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的表面诱导的聚集。可以使用多种常规表面活性剂，如聚氧乙烯脂肪酸酯和醇，和聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯。用量将通常为按制剂的重量计0.001到4％。用于本发明的特别优选的表面活性剂为聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯、聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20等等。用于蛋白，如至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体蛋白的制备的本领域中公知的其他试剂也可以包括在所述制剂中。

通过计量的剂量吸入器施用模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体组合物

在计量的剂量吸入器(MDI)中，在罐中包括推进剂、至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体，和任意赋形剂或者其他添加剂作为包括液化受压气体的混合物。计量阀的启动释放作为气溶胶的混合物，其优选含有小于约10μm，优选约1μm到约5μm，最优选约2μm到约3μm的大小范围的颗粒。通过使用由本领域技术人员公知的多种方法产生的模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体组合物蛋白的制剂可以获得所需的气溶胶颗粒大小，所述方法包括喷射碾磨、喷雾干燥、临界点冷凝，等等。优选的计量的剂量吸入器包括3M或者Glaxo生产和使用氢氟碳化合物推进剂的那些计量的剂量吸入器。

用计量的剂量吸入器装置使用的至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的制剂将通常包括作为非水性介质中的悬浮液的，例如，通过表面活性剂的帮助在推进剂中悬浮的含有至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的细分的粉末。推进剂可以是用于该目的的任意常规材料，如含氨氟烃、氢氯氟碳化合物、氢氟碳化合物、或者碳氢化合物，包括三氟氯甲烷、二氯二氟甲烷、二氯四氟乙醇，和1，1，1，2-四氟乙烷、HFA-134a(氢氟烷-134a)、HFA-227(氢氟烷-227)，等等。优选地，推进剂为氢氟碳化合物。可以选择表面活性剂以稳定作为推进剂中悬浮液的至少一种抗模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体、保护活性剂免受化学降解，等等。适宜的表面活性剂包括山梨聚糖三油酸酯、大豆卵磷脂、油酸，等等。在一些情况中，优选使用溶剂如乙醇的溶液气溶胶。用于蛋白如蛋白的制备的本领域公知的额外试剂也可以包括在所述制剂中。

本领域技术人员将认识到通过用本文中未描述的装置通过至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体组合物的经肺施用可以实现本发明的方法。

粘膜制剂和施用

为了通过粘膜表面吸收，施用至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的组合物和方法包括乳剂，其含有多种亚微米颗粒、粘膜粘附性大分子、生物活性肽和水性连续相，其通过实现乳剂颗粒的粘膜粘附促进通过粘膜表面的吸收(美国专利号5,514,670)。适宜应用本发明的乳剂的粘膜表面可以包括角膜、结膜、口腔、舌下、鼻、阴道、肺、胃、肠和直肠施用途径。用于阴道或直肠施用的制剂，例如，栓剂，可以含有作为赋形剂的例如，聚亚烷基二醇、凡士林、可可脂，等等。鼻内施用的制剂可以是固体并且含有作为赋形剂的，例如，乳糖，或者可以是鼻滴剂的水性或者油性溶液。对于口腔施用，赋形剂可以包括糖、硬脂酸钙、硬脂酸镁、预胶化淀粉等等(美国专利号5,849,695)。

经口制剂和施用

经口制剂依赖于共同施用佐剂(例如，间苯二酚和非离子表面活性剂，如聚氧乙烯油烯基醚和正十六烷基聚乙烯醚)以人工增加肠壁的渗透性，以及共同施用酶抑制剂(例如，胰腺胰蛋白酶抑制剂、二异丙基氟磷酸(DFF)和抑胰肽酶)以抑制酶降解。用于经口施用的固体型剂型的活性成分化合物可以与至少一种添加剂混合，所述添加剂包括蔗糖、乳糖、纤维素、甘露醇、海藻糖、棉子糖、麦芽糖醇、葡聚糖、淀粉、琼脂、arginates、壳多糖、脱乙酰壳多糖、果胶、黄蓍树胶、阿拉伯树胶、明胶、胶原、酪蛋白、清蛋白、合成的或半合成的聚合物和甘油酯。这些剂型还可以含有其他类型添加剂，例如，无活性稀释剂、润滑剂比如硬脂酸镁、对羟基苯甲酸酯、防腐剂比如山梨酸、抗坏血酸、α-生育酚、抗氧化剂比如半胱氨酸、崩解剂、粘合剂、增稠剂、缓冲剂、增甜剂、调味剂、增香剂等等。

片剂和九剂可以进一步加工成肠溶衣包衣制剂。用于经口施用的液体制剂包括允许用于医学用途的乳剂、糖浆、酏剂、悬浮液和溶液制剂。这些制剂可以含有常用于所述领域的无活性稀释剂，例如水。脂质体已经描述为胰岛素和肝素的药物递送系统(美国专利号4,239,754)。最近，混合氨基酸的人工聚合物(类蛋白)的微球体已经用于递送药物(美国专利号4,925,673)。此外，美国专利号5,879,681和美国专利号5,5,871,753中描述的载体化合物用于经口递送生物活性剂是本领域公知的。

经皮制剂和施用

对于经皮施用，将至少一种模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体被囊化在递送装置，如脂质体或者聚合的纳米粒(nanoparticle)、微粒、微胶囊或者微球体(除非特别指出，统称为微粒)中。许多适宜的装置是公知的，包括由合成聚合物和天然聚合物制造的微粒，所述合成聚合物为诸如聚乳酸、聚乙醇酸和其共聚物的多羟基酸、聚原酸酯、聚酐和聚磷腈，所述天然聚合物为诸如胶原、聚氨基酸、清蛋白和其他蛋白、藻酸盐和其他多糖，和它们的组合(美国专利号5,814,599)。

延长的施用和制剂

有时需要通过一次施用将本发明化合物在延长的时间段内，例如，一周到一年内递送于受试者。可以利用多种缓释、积存(depot)或者植入物剂型。例如，剂型可以含有在体液中具有低溶解程度的化合物的药学上可接受的无毒盐，例如(a)使用多碱价酸的酸加成盐，所述多碱价酸为诸如磷酸、硫酸、柠檬酸、酒石酸、单宁酸、pamoicacid、藻酸、聚谷氨酸、萘单磺酸或萘二磺酸、聚半乳糖醛酸，等等；(b)与多价金属阳离子形成的盐，所述阳离子为诸如锌、钙、铋、钡、镁、铝、铜、钴、镍、镉，等等，或者与从例如N，N’-二苄基-乙二胺或者乙二胺形成的有机阳离子形成的盐；或者(c)(a)和(b)的组合，例如，单宁酸锌盐。此外，本发明的化合物或者，优选地，如刚才描述的那些相对不溶的盐可以在适宜注射的凝胶中配制，例如，在一硬脂酸铝凝胶与例如，芝麻油中。尤其优选的盐为锌盐、单宁酸锌盐、双羟萘酸盐，等等。用于注射的另一种类型的缓释积存制剂将含有经分散以在缓慢降解、无毒、非抗原性聚合物中被囊化的化合物或盐，所述聚合物为诸如在美国专利号3,773,919中描述的聚乳酸/聚乙醇酸聚合物。化合物或者优选地，如上文描述的相对不溶的盐还可以配制成胆固醇基质硅橡胶丸，其尤其用于动物。其他缓释、积存或者植入物制剂，例如，气体或者液体脂质体，是本领域公知的(美国专利号5,770,222和“Sustained and Controlled Release DrugDelivery Systems”，J.R.Robinson ed.，Marcel Dekker，Inc.，N.Y.，1978)。

已经总体地描述了本发明，通过参考下面的实施例将更容易理解本发明，所述实施例仅为了阐明而提供并且不意在作为限制。

实施例1：哺乳动物细胞中模仿EPO的铰链核心模仿体的克隆和表达

一般的哺乳动物表达载体含有至少一种启动子元件(其介导mRNA的转录起始)、模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的编码序列和转录物的转录终止和多腺苷酸化所需的信号。额外的元件包括增强子、Kozak序列和干扰序列，其侧翼为RNA剪接的供体和受体位点。高效转录可以用来自SV40的早期和晚期启动子、来自逆转录病毒，例如，RSV、HTLVI、HIVI的长末端重复序列(LTRS)和巨细胞病毒(CMV)的早期启动子实现。然而，也可以使用细胞元件(例如，人肌动蛋白启动子)。用于实施本发明的适宜的表达载体包括，例如，诸如pIRES1neo、pRetro-Off、pRetro-On、PLXSN或pLNCX(Clonetech Labs、Palo Alto、CA)、pcDNA3.1(+/-)、pcDNA/Zeo(+/-)或pcDNA3.1/Hygro(+/-)(Invitrogen)、PSVL和PMSG(Pharmacia、Uppsala、瑞典)、pRSVcat(ATCC 37152)、pSV2dhfr(ATCC 37146)和pBC12MI(ATCC 67109)的载体。可以使用的哺乳动物宿主细胞包括人Hela 293、H9和Jurkat细胞、小鼠NIH3T3和C127细胞、Cos 1、Cos 7和CV 1、鹌鹑QC1-3细胞、小鼠L细胞和中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。

备选地，基因可以在含有整合到染色体中的该基因的稳定细胞系中表达。用选择标记如dhfr、gpt、新霉素或者潮霉素的共转染使得可以鉴定和分离所转染的细胞。

还可以扩增所转染的基因以大量表达所编码的模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体。DHFR(二氢叶酸还原酶)标记可用于开发携带目标基因的数百或甚至数千拷贝的细胞系。另一种有用的选择标记是谷氨酰胺合酶(GS)(Murphy，等人，Biochem.J.227：277-279(1991)；Bebbington，等人，Bio/Technology 10：169-175(1992))。使用这些标记，使哺乳动物细胞在选择性培养基上生长并选择具有最高抗性的细胞。这些细胞系含有整合到染色体的扩增基因。中国仓鼠卵巢(CHO)和NSO细胞通常用于产生模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体。

表达载体pC1和pC4含有劳斯肉瘤病毒(Cullen，等人，Molec.Cell.Biol.5：438-447(1985))的强启动子(LTR)和CMV-增强子的片段(Boshart，等人，Cell 41：521-530(1985))。多克隆位点，例如，具有限制酶切割位点BamHI、XbaI和Asp718的多克隆位点促进克隆目的基因。所述载体还含有大鼠前胰岛素原基因的3’内含子、多腺苷酸化和终止信号。

在CHO细胞中的克隆和表达

载体pC4用于表达模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体。质粒pC4衍生自质粒pSV2-dhfr(ATCC保藏号37146)。该质粒含有处于SV40早启动子控制下的小鼠DHFR基因。用这些质粒转染的缺少二氢叶酸活性的中国仓鼠卵巢细胞或其他细胞可通过在补加化疗剂氨甲蝶呤的选择培养基(例如，alpha minus MEM，LifeTechnologies，Gaithersburg，MD)上生长以进行选择。已经详细记载了抗氨甲蝶呤(MTX)的细胞中DHFR基因的扩增(见，例如，F.W.Alt，等人，J.Biol.Chem.253：1357-1370(1978)；J.L.Hamlin和C.Ma，Biochem.et Biophys.Acta 1097：107-143(1990)；和M.J.Page和M.A.Sydenham，Biotechnology 9：64-68(1991))。在浓度增加的MTX中生长的细胞通过过量产生靶酶-DHFR(这是由于DHFR基因的扩增)发展对所述药物的抗性。如果第二种基因连接到DHFR基因，那么该基因通常被共同扩增和超表达。本领域公知该方法可以用于开发携带所扩增基因的1000个拷贝以上的细胞系。随后，当撤掉氨甲蝶呤时，得到含有整合到宿主细胞的一个和多个染色体中的扩增基因的细胞系。

质粒pC4含有用于表达目的基因的劳斯肉瘤病毒(Cullen，等人，Molec.Cell.Biol.5：438-447(1985))的长末端重复序列(LTR)的强启动子和从人巨细胞病毒(CMV)(Boshart，等人，Cell41：521-530(1985))的立即早期基因的增强子分离的片段。该启动子的下游是BamHI、XbaI和Asp718限制酶切割位点，它们允许基因整合。该质粒在这些克隆位点后含有大鼠前胰岛素原基因的3’内含子和多腺苷酸化位点。其他高效启动子也可用于表达，例如，人b-肌动蛋白启动子、SV40早期和晚期启动子或者来自其他逆转录病毒，例如，HIV和HTLV1的长末端重复序列。Clontech的Tet-Off和Tet-On基因表达系统和类似系统可用于以受调节的方式在哺乳动物细胞中表达EPO(M.Gossen，和H.Bujard，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：5547-5551(1992))。对于mRNA的多腺苷酸化，也可以使用例如，来自人生长激素或者珠蛋白基因的其他信号。携带整合到染色体的目的基因的稳定细胞系也可以在用选择标记如gpt、G418或者潮霉素共转染后进行选择。有利地是在开始使用一种以上的选择标记，例如，G418加上氨甲蝶呤。

将质粒pC4用限制酶消化，然后通过本领域公知的方法使用小牛小肠磷酸酶去磷酸化。然后从1％琼脂糖凝胶分离载体。

根据公知的方法步骤，使用编码完整模仿EPO的铰链核心模仿体或特定部分或变体的DNA序列，其相应于本发明的模仿EPO的铰链核心模仿体的HC和LC可变区。在该构建体中还使用编码适宜的人恒定区(即HC和LC区)的分离的核酸。

然后将分离的可变区和恒定区编码DNA和去磷酸化的载体用T4DNA连接酶连接。然后转化大肠杆菌HB101或者XL-1 Blue细胞，并使用例如，限制酶分析鉴定含有插入质粒pC4中的片段的细菌。

将缺少活性DHFR基因的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞用于转染。将5μg表达质粒pC4与0.5μg质粒pSV2-neo用lipofectin共转染。质粒pSV2neo含有显性选择标记——来自Tn5的neo基因，其编码赋予对包括G418的一组抗生素的抗性的酶。将细胞接种在补加了1μg/ml G418的alpha minus MEM中。2天后，将细胞用胰蛋白酶消化并接种在杂交瘤克隆板(Greiner，德国)中补加了10、25或50ng/ml氨甲蝶呤与1μg/ml G418的alpha minus MEM中。约10-14天后，将单一克隆用胰蛋白酶消化并接种在6孔培养皿或者10ml瓶中，其中使用不同浓度的氨甲蝾呤(50nM、100nM、200nM、400nM、800nM)。然后将生长在最高浓度氨甲蝶呤的克隆转移到含有甚至更高浓度氨甲蝶呤(1mM、2mM、5mM、10mM、20mM)的新的6孔板中。重复相同的步骤直到得到生长在100-200mM浓度的克隆。例如，通过SDS-PAGE和蛋白印迹或者通过反相HPLC分析可以分析所需基因产物的表达。

实施例2：本发明的模仿EPO的铰链核心模仿体的非限制性的实施例

背景：EMP-1(模仿EPO的肽-1)是20氨基酸肽，其与人促红细胞生成素(HuEPO)没有序列同源性，但是具有激活EPO受体的能力(作为二聚体)(Wrighton等，1996，Science，vol.273，458-463)。但是，它的相对较低的活性(为HuEPO的1/100,000至1/10,000)和较短的半衰期(在50％血清中的离体半衰期为8小时，体内半衰期未知)，损害了它作为治疗剂的应用。因此，需要能赋予该肽更长的半衰期，而不妨碍且可能提高它的效力的方法。为此，通过稳定化肽的二聚化作用，或通过将肽整合进更大的结构中，以提高半衰期，已经进行了几种尝试，来提高EMP-1的活性。Wrighten等(1997，NatureBiotechnology，vol.15，1261-65)将生物素标记的EMP-1和链霉抗生物素蛋白结合，以稳定化二聚化作用。他们在体外细胞增殖测定中，观察到了活性的100倍增加。他们还使用抗-生物素抗体来稳定化肽二聚体，但是仅仅观察到了活性的10倍增加。相同的作者制备了化学上确定的二聚体形式的EMP-1。在该情况下，在体内观察到了活性的100倍增加。另一组试图通过共价连接到聚乙二醇(PEG)上，来提高EMP-1的活性(Johnson等，1997，Chem.& Bio.，vol.4(12)，939-50)。他们报道了最高达1000倍的效力提高，但是发现构建体在小鼠中是免疫原性的(抗体针对该肽)(Dana Johnson，个人通讯)。Kuai等(2000，J.Peptide Res.，vol.56，59-62)将EMP-1肽插入了纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)的序列。认为EMP-1向该构架中的插入，能稳定化二聚化作用，并提高半衰期。在体内测定中，观察到该构建体的效力明显更高，例如为单独的EMP-1的2500倍。应当注意到，在这些研究中使用了不同的体外测定和体内模型，且报道的效力不能彼此比较，也不能与本文所述的结果相比较。

本发明的模仿EPO的铰链核心模仿体

本发明的具体的、非限制性的实例是EMP-铰链核心模仿体构建体，其中V是天然存在的HC或LC抗体的前几个N-末端氨基酸，P是单拷贝的生物活性的EMP-1肽，且L是Gly-Ser或Gly-Gly-Gly-Ser柔性接头的串连重复序列，H是铰链核心区，且CH2 & CH3属于IgG1或IgG4同种型亚类。认为该构建体含有EMP-1肽，但是允许足够的柔性，从而使得作为装配的同二聚体的一部分的肽的二聚化作用稳定化。为了支持该观点，在体外细胞增殖测定中的EMP-铰链核心模仿体的活性为EMP-1肽的超过500倍，且仅仅基本上与重组HuEPO(rHuEPO)类似。另外，预期该构建体的半衰期是单独的rHuEPO或EMP-1肽的许多倍，且与IgG的半衰期类似。一致地，当给定相同的活性单位时，与用rHuEPO处理的小鼠相比，用EMP-铰链核心模仿体处理的正常小鼠获得了明显更高的最大血细胞比容，且能维持高水平更长的时间段。该构建体能有效地从细胞中分泌出来，并正确地折叠；从而克服了与第一代模仿体有关的问题。

除了上述的基本结构外，还描述了具有潜在有利的生物学特征的变体。它们包括可能具有降低的自结合倾向、减少的免疫效应子功能或降低的免疫原性的构建体。可以预见其它的修饰，其能赋予需要的特征，例如改善的生物活性肽的构象，且可以预见穿过血-脑屏障的转移。可以以任意的方式结合提出的变体和修饰，以产生具有需要的活性的构建体。

使用重组DNA方法，可以将EMP-1肽插入免疫球蛋白信号肽和人J序列之间的中间载体中。这可以使用互补的合成的寡核苷酸来实现，其具有与存在于载体中的限制位点相容的末端。这些寡核苷酸包含信号肽酶共有位点(QIQ)、EMP-1肽(SEQ ID NO：2)和由GS或GGGS组成的柔性接头的编码序列。然后，将含有上述功能元件的限制片段转移进表达载体中。该载体含有抗-CD4免疫球蛋白启动子和增强子，和人IgG1铰链核心序列的编码序列，和IgG1铰链核心区的一部分，CPPCP(SEQ ID NO：66的109-113，如图36C所示)、HC恒定区2(CH2)和恒定区3(CH3)以及质粒复制和在细菌中选择和选择哺乳动物细胞中的稳定表达子所必需的元件。

将该质粒线性化，并通过电穿孔，导入NSO小鼠骨髓瘤细胞系。选择抗性的细胞，并通过培养物上清液的ELISA测定，鉴别出EMP-铰链核心模仿体的高表达子。通过标准的A蛋白亲和层析，完成从细胞培养物上清液纯化构建体。在变性和还原条件下，使纯化产物通过含有SDS的聚丙烯酰胺凝胶，证实了纯化的产物的预期大小。通过质谱和N-末端测序，进一步证实了纯化的蛋白的同一性。

下面显示了EMP-铰链核心模仿体的氨基酸序列。将功能结构域注解在肽编码序列上面。3氨基酸信号肽共有序列对应着天然存在的免疫球蛋白的前3个氨基酸。认为这些氨基酸有助于内质网中的信号肽酶有效地去除信号肽。该序列后紧挨着EMP-1编码序列。EMP-1序列的2个C-末端氨基酸与后面的6个氨基酸相连，形成特征在于Gly-Gly-Gly-Ser重复的柔性接头。人连接(J)区域序列随后。认为J序列能提供甚至更多的柔性，以允许EMP-1二聚体呈现适当的构象，并允许二聚体从免疫球蛋白的球状结构伸出，并穿入2个EPO受体之间的裂缝。HC铰链区也包含在紧靠在J区域之后的构建体中。在IgG1铰链区存在3个半胱氨酸(高亮显示)。第一个通常与免疫球蛋白轻链(LC)配对，且其它的2个参与2个HC之间的链间键。序列的其它部分由CH2 & CH3区组成，它们构成蛋白的大部分。认为免疫球蛋白具有长血清半衰期的一个原因是，它们的结合FcRn的能力，这能通过使胞饮的免疫球蛋白返回细胞外间隙，延长血清半衰期。FcRn的结合位点与CH2和CH3区的接点重叠(Sheilds等，2001，J.Biol.Chem.，vol.276(9)，6591-6604)。

显示了重要的功能结构域的EMP-铰链核心模仿体的肽序列。

  V    EMP-1  肽          接头  铰链  IgG1 CH2

1 QIQGGTYSCHFGPLTWVCKPQGG GS    CPPCP APELLGGP

  IgG1 CH2------------------------------------------------------

61SVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNS

        ～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～     IgG1 CH3

122TYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL

                                 IgG1 CH3

183TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQ

                IgG1 CH3

241   QGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK            (SEQ ID NO：82)

  V    EMP-1  肽          接头  铰链  IgG1 CH2

1 QIQGGTYSCHFGPLTWVCKPQGG GGGS  CPPCP APELLGGP

  IgG1 CH2------------------------------------------------------

61SVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNS

        ～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～     IgG1 CH3

122TYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL

                                 IgG1 CH3

183TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQ

                IgG1 CH3

241   QGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK            (SEQ ID NO：83)

V    EMP-1  肽            接头  铰链IgG1 CH2

1 QIQGGTYSCHFGPLTWVCKPQGG GSGGGS CPPCP APELLGGP

  IgG1 CH2------------------------------------------------------

61SVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNS

        ～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～     IgG1 CH3

122TYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL

                                 IgG1 CH3

183TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQ

                IgG1 CH3

241   QGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK            (SEQ ID NO：84)

  V    EMP-1  肽          接头  铰链  IgG1 CH2

1 QIQGGTYSCHFGPLTWVCKPQGG GS    CPPCP APEAAGGP

  IgG1 CH2-----------------------------------------------------

61SVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNS

        ～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～     IgG1 CH3

122TYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL

                                 IgG1 CH3

183TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQ

                IgG1 CH3

241   QGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK            (SEQ ID NO：85)

  V   EMP-1  肽          接头        IgG1 CH2

            1 QIQGGTYSCHFGPLTWVCKPQGG GGGS    CPPCP APEAAGGP

              IgG1 CH2------------------------------------------------------

            61SVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNS

                    ～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～     IgG1 CH3

            122TYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDEL

                                             IgG1 CH3

            183TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQ

                            IgG1 CH3

            241   QGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK            (SEQ ID NO：86)

              V    EMP-1  肽          接头  铰链 IgG4 CH2

            1 QIQGGTYSCHFGPLTWVCKPQGG GS    CPPCP APEFLGGP

                         IgG 4 CH2----------------------------------------

            61 SVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNS

                    ～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～     IgG4 CH3

            121 TYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEM

                                              IgG4 CH3

183 TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQ

                              IgG4 CH3

241         EGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK             (SEQ ID NO：87)

              V    EMP-1  肽          接头  铰链  IgG4 CH2

            1 QIQGGTYSCHFGPLTWVCKPQGG GS    CPPCP APEAAGGP

                          IgG4 CH2----------------------------------------

            61 SVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNS

                    ～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～     IgG4 CH3

            121 TYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEM

                                              IgG4 CH3

183 TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQ

                              IgG4 CH3

241         EGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK             (SEQ ID NO：88)

              V    EMP-1  肽          接头    铰链IgG4 CH2

            1 QIQGGTYSCHFGPLTWVCKPQGG GGGS    CPPCP APEAAGGP

                          IgG 4 CH2---------------------------------------

            61 SVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNS

                    ～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～～     IgG4 CH3

            121 TYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEM

                                              IgG4 CH3

183 TKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQ

                              IgG4 CH3

241         EGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK             (SEQ ID NO：89)

众所周知，2个IgG重链在细胞加工过程中通过位于铰链区的半胱氨酸之间的二硫键进行装配，以形成同二聚体。预期这也会发生在修饰的肽之间，以形成装配的EMP-铰链核心模仿体构建体。另外，预期也会形成EMP-1肽中的2个半胱氨酸之间的链间二硫键。预期的EMP-铰链核心模仿体的结构含有2个EMP-1肽。在N-末端的肽的空间排列和邻接序列的柔性一起应当允许肽形成生物活性的二聚体。

首先，在体外生物活性测定中，测试了EMP-铰链核心模仿体的活性。对于该测定，使用了EPO依赖性的UT-7/EPO细胞系，其源自患有急性成巨核细胞白血病的患者(Komatsu等，1993，Blood，vol.82(2)，456-464)。在从补加了rHuEPO的培养基中撤出后48-72小时，这些细胞经历了程序性细胞死亡。如果用rHuEPO或EPO激动剂处理，则在没有rHuEPO的情况下温育了24小时的细胞可以保全。将EMP-铰链核心模仿体加给没有rHuEPO的饥饿的细胞，并在处理后48小时，使用四氮唑化合物MTS(CellTiter 96 Aq_ueous OneSolution，Promega)，检测细胞生存力，该MTS能被活细胞代谢，产生具有可测量的吸光度的产物。一般测定的结果显示以摩尔为基础的EMP-铰链核心模仿体的效力为EMP-1肽的500倍，且为rHuEPO的1/5。此外，用EMP-铰链核心模仿体刺激这些相同的细胞，并通过使细胞裂解物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳来显现酪氨酸磷酸化模式。EMP-铰链核心模仿体表现出的模式与rHuEPO的类似，表明EMP-铰链核心模仿体作用于这些细胞的机理与rHuEPO类似。

在正常的小鼠中进行了体内研究，以对比EMP-铰链核心模仿体的半衰期和rHuEPO的半衰期，并对比它们对红细胞生成的作用。当给小鼠相同地给药时，EMP-铰链核心模仿体产生了更高的最大反应，且该反应比rHuEPO延长。

通过ELISA，测量了rHuEPO和EMP-铰链核心模仿体的血清浓度。EMP铰链核心模仿体的近似半衰期至少是rHuEPO的几倍。

已经显示IgG1下铰链区中的2个赖氨酸(L)残基L234&L235向丙氨酸(A)的突变，会废除免疫球蛋白介导依赖补体的细胞毒性(CDC)和依赖抗体的细胞毒性(ADCC)的能力(Hezereh等，2001，J.Virol.，vol.75(24)，12161-68)。初步的研究已经显示EMP-铰链核心模仿体不能介导能表达EPO受体的细胞的补体裂解。这可能是由于在红细胞类祖细胞中存在少量的受体。此外，如通过血细胞比容的显著增加证实的红细胞类祖细胞的体内扩展，能支持免疫效应子功能的可能的功能无关性。但是，尽管没有观察到效应子功能有关的作用，仍然存在导入这些突变作为预防步骤的益处。

能导致介导免疫效应子功能的降低的另一种修饰是，糖基化附着位点的去除。这可以通过在位置297的天冬酰胺(N297)向谷氨酰胺(Q)的突变来实现。其它的变化可以任选地包括，用可替换的氨基酸替换苏氨酸(T)，以减少或修饰O-糖基化，例如，已知具有IgG1亚类的糖基化形式的T34或T47是免疫效应子功能的较差介质(Jefferis等1998，Immol.Rev.，vol.163，50-76)。

优点：上述的新的构建体、EMP-铰链核心模仿体能提供显示生物活性的肽EMP-1的替代途径。该构建体的活性是在rHuEPO的范围内的，且体内半衰期与IgG的类似。另外，预期提出的修饰，与EMP-铰链核心模仿体的新特征相结合和除了它们以外，能提高EMP-铰链核心模仿体构建体的效用。

将明白本发明可以以不同于前面说明书和实施例中的具体描述进行实施。

考虑到上面的教导，可能得到本发明的多种修饰和改变，它们因此在本发明的范围内。

序列表

<110>HEAVNER，George A.；KNIGHT，David；GHRAYEB，John；SCALLON，Bernard；NESSPOR，

Thomas；HUANG，Chichang

<120>模仿人EPO的铰链核心模仿体、组合物、方法和用途

<130>CEN5039NP

<140>US/10/935,005

<141>2004-09-03

<160>89

<170>PatentIn version 3.3

<210>1

<211>14

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<220>

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<222>(2)..(2)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<220>

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<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<220>

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<222>(5)..(5)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(8)..(8)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(11)..(11)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(13)..(13)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<400>1

Tyr Xaa Cys Xaa Xaa Gly Pro Xaa Thr Trp Xaa Cys Xaa Pro

1               5                   10

<210>2

<211>20

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>2

Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp Val Cys Lys

1               5                   10                  15

Pro Gln Gly Gly

            20

<210>3

<211>20

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>3

Gly Gly Asp Tyr His Cys Arg Met Gly Pro Leu Thr Trp Val Cys Lys

1               5                   10                  15

Pro Leu Gly Gly

            20

<210>4

<211>20

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>4

Gly Gly Val Tyr Ala Cys Arg Met Gly Pro Ile Thr Trp Val Cys Ser

1               5                   10                  15

Pro Leu Gly Gly

            20

<210>5

<211>20

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>5

Val Gly Asn Tyr Met Cys His Phe Gly Pro Ile Thr Trp Val Cys Arg

1               5                   10                  15

Pro Gly Gly Gly

            20

<210>6

<211>20

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>6

Gly Gly Leu Tyr Leu Cys Arg Phe Gly Pro Val Thr Trp Asp Cys Gly

1               5                   10                  15

Tyr Lys Gly Gly

            20

<210>7

<211>20

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>7

Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp Val Cys Lys

1               5                   10                  15

Pro Gln Gly Gly

            20

<210>8

<211>23

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>8

Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp Val Cys Lys

1               5                   10                  15

Pro Gln Gly Gly Ser Ser Lys

            20

<210>9

<211>10

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<220>

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<222>(2)..(2)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<220>

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<222>(3)..(3)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<220>

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<222>(6)..(6)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<220>

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<222>(9)..(9)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<400>9

Cys Xaa Xaa Gly Pro Xaa Thr Trp Xaa Cys

1               5                   10

<210>10

<211>19

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>10

Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Gly Pro Leu Thr Trp Val Cys Lys Pro

1               5                   10                  15

Gln Gly Gly

<210>11

<211>19

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>11

Val Gly Asn Tyr Met Ala His Met Gly Pro Ile Thr Trp Val Cys Arg

1               5                   10                  15

Pro Gly Gly

<210>12

<211>18

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>12

Gly Gly Pro His His Val Tyr Ala Cys Arg Met Gly Pro Leu Thr Trp

1               5                   10                  15

Ile Cys

<210>13

<211>18

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>13

Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp Val Cys Lys

1               5                   10                  15

Pro Gln

<210>14

<211>20

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>14

Gly Gly Leu Tyr Ala Cys His Met Gly Pro Met Thr Trp Val Cys Gln

1               5                   10                  15

Pro Leu Arg Gly

            20

<210>15

<211>22

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>15

Thr Ile Ala Gln Tyr Ile Cys Tyr Met Gly Pro Glu Thr Trp Glu Cys

1               5                   10                  15

Arg Pro Ser Pro Lys Ala

            20

<210>16

<211>13

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>16

Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp Val Cys Lys

1               5                   10

<210>17

<211>11

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>17

Tyr Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp Val Cys

1               5                   10

<210>18

<211>10

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<220>

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<222>(1)..(1)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(3)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(6)..(6)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<220>

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<222>(9)..(9)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(10)..(10)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<400>18

Xaa Xaa Xaa Gly Pro Xaa Thr Trp Xaa Xaa

1               5                   10

<210>19

<211>12

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<220>

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<222>(3)..(3)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸<220>

<220>

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<222>(4)..(4)

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<220>

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<222>(5)..(5)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸<220>

<220>

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<222>(8)..(8)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<220>

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<222>(11)..(11)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<220>

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<222>(12)..(12)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<400>19

Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Pro Xaa Thr Trp Xaa Xaa

1               5                   10

<210>20

<211>14

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>misc_feature

<222>(1)..(1)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(3)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸<220>

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸<220>

<220>

<221>misc_feature

<222>(5)..(5)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸<220>

<220>

<221>misc_feature

<222>(6)..(6)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(9)..(9)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(10)..(10)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(11)..(11)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(12)..(12)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(13)..(13)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(14)..(14)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<400>20

Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa

1               5                   10

<210>21

<211>18

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>misc_feature

<222>(1)..(1)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(3)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(5)..(6)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(9)..(9)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(12)..(12)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(14)..(14)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(15)..(15)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(16)..(16)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<400>21

Xaa Tyr Xaa Cys Xaa Xaa Gly Pro Xaa Thr Trp Xaa Cys Xaa Xaa Xaa

1               5                   10                  15

Leu Leu

<210>22

<211>20

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>22

Gly Gly Leu Tyr Leu Cys Arg Phe Gly Pro Val Thr Trp Asp Cys Gly

1               5                   10                  15

Tyr Lys Gly Gly

            20

<210>23

<211>20

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>23

Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp Val Cys Lys

1               5                   10                  15

Pro Gln Gly Gly

            20

<210>24

<211>20

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>24

Val Gly Asn Tyr Met Cys His Phe Gly Pro Ile Thr Trp Val Cys Arg

1               5                   10                  15

Pro Gly Gly Gly

            20

<210>25

<211>20

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>25

Gly Gly Val Tyr Ala Cys Arg Met Gly Pro Ile Thr Trp Val Cys Ser

1               5                   10                  15

Pro Leu Gly Gly

            20

<210>26

<211>22

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>26

Thr Ile Ala Gln Tyr Ile Cys Tyr Met Gly Pro Glu Thr Trp Glu Cys

1               5                   10                  15

Arg Pro Ser Pro Lys Ala

            20

<210>27

<211>13

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>27

Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp Val Cys Lys

1               5                   10

<210>28

<211>11

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>28

Tyr Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp Val Cys

1               5                   10

<210>29

<211>12

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>29

Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp Val Cys Lys

1               5                   10

<210>30

<211>12

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<220>

<221>misc_feature

<222>(2)..(2)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(3)..(3)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(4)..(4)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(5)..(5)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(8)..(8)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(11)..(11)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<220>

<221>misc_feature

<222>(12)..(12)

<223>Xaa可以为任何天然存在的氨基酸

<400>30

Ala Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Pro Xaa Thr Trp Xaa Xaa

1               5                   10

<210>31

<211>125

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(125)

<223>Vh1重链可变区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(31)

<223>构架1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(32)..(32)

<223>互补决定区1(CDR1)，X是3-20(5)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(33)..(46)

<223>构架2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(47)..(47)

<223>互补决定区2(CDR2)，X是10-30(17)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(48)..(79)

<223>构架3

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(80)..(80)

<223>互补决定区3(CDR3)，X是25-55(42)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(81)..(125)

<223>构架4

<400>31

Gln Val Gln Leu Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly

1               5                   10                  15

Ala Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Xaa

            20                  25                  30

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Xaa Arg

        35                  40                  45

Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu

    50                  55                  60

Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Xaa

65                  70                  75                  80

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Lys Gly

                85                  90                  95

Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly

            100                 105                 110

Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro

        115                 120                 125

<210>32

<211>124

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(124)

<223>Vh2重链可变区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(30)

<223>构架1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(31)..(31)

<223>互补决定区1(CDR1)，X是3-20(7)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(32)..(45)

<223>构架2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(46)..(46)

<223>互补决定区2(CDR2)，X是10-30(16)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(47)..(78)

<223>构架3

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(79)..(79)

<223>互补决定区3(CDR3)，X是15-40(16)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(80)..(124)

<223>构架4

<400>32

Gln Ile Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln

1               5                   10                  15

Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Xaa Trp

            20                  25                  30

Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu Trp Leu Ala Xaa Arg Leu

        35                  40                  45

Thr Ile Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Val Leu Thr Met Thr

    50                  55                  60

Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg Xaa Trp

65                  70                  75                  80

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Pro Thr Ser Pro

                85                  90                  95

Lys Val Phe Pro Leu Ser Leu Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr

            100                 105                 110

Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro

        115                 120

<210>33

<211>100

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(100)

<223>Vh3a重链可变区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(31)

<223>构架1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(32)..(32)

<223>互补决定区1(CDR1)，X是3-20(5)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(33)..(46)

<223>构架2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(47)..(47)

<223>互补决定区2(CDR2)，X是10-30(18)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(48)..(79)

<223>构架3

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(80)..(80)

<223>互补决定区3(CDR3)，X是20-40(31)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(81)..(100)

<223>构架4

<400>33

Glu Val Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly

1               5                   10                  15

Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Xaa

            20                  25                  30

Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Xaa Arg

        35                  40                  45

Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met

    50                  55                  60

Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Xaa

65                  70                  75                  80

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Lys Ala

                85                  90                  95

Pro Ser Val Phe

            100

<210>34

<211>102

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(102)

<223>Vh3b重链可变区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(30)

<223>构架1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(31)..(31)

<223>互补决定区1(CDR1)，X是3-20(5)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(32)..(45)

<223>构架2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(46)..(46)

<223>互补决定区2(CDR2)，X是5-25(11)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(47)..(78)

<223>构架3

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(79)..(79)

<223>互补决定区3(CDR3)，X是15-40(23)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(80)..(102)

<223>构架4

<400>34

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1               5                   10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Xaa Trp

            20                  25                  30

Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Xaa Arg Phe

        35                  40                  45

Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn

    50                  55                  60

Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Thr Xaa Trp

65                  70                  75                  80

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro

                85                  90                  95

Ser Val Phe Pro Leu Ala

            100

<210>35

<211>101

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(101)

<223>Vh3c重链可变区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(30)

<223>构架1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(31)..(31)

<223>互补决定区1(CDR1)，X是3-20(5)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(32)..(45)

<223>构架2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(46)..(46)

<223>互补决定区2(CDR2)，X是10-30(19)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(47)..(79)

<223>构架3

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(80)..(80)

<223>互补决定区3(CDR3)，X是15-40(25)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(81)..(101)

<223>构架4

<400>35

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1               5                   10                  15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Xaa Trp

            20                  25                  30

Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Gly Xaa Arg Phe

        35                  40                  45

Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser Ile Ala Tyr Leu Gln Met Asn

    50                  55                  60

Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Arg Asn Xaa

65                  70                  75                  80

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Thr Lys Gly

                85                  90                  95

Pro Ser Val Leu Pro

            100

<210>36

<211>108

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(108)

<223>Vh4重链可变区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(33)

<223>构架1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(34)..(34)

<223>互补决定区1(CDR1)，X是3-20(7)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(35)..(48)

<223>构架2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(49)..(49)

<223>互补决定区2(CDR2)，X是10-30(16)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(50)..(81)

<223>构架3

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(82)..(82)

<223>互补决定区3(CDR3)，X是20-45(32)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(83)..(108)

<223>构架4

<400>36

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1               5                   10                  15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ser Ile Ser Ser

            20                  25                  30

Ser Xaa Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly

        35                  40                  45

Xaa Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu

    50                  55                  60

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

65                  70                  75                  80

Arg Xaa Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Pro Thr

                85                  90                  95

Lys Ala Pro Asp Val Phe Pro Ile Ile Ser Gly Cys

            100                 105

<210>37

<211>132

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(132)

<223>Vh5重链可变区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(31)

<223>MISC_FEATURE

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(32)..(32)

<223>互补决定区1(CDR1)，X是3-20(5)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(33)..(46)

<223>构架2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(47)..(47)

<223>互补决定区2(CDR2)，X是10-30(17)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(48)..(79)

<223>构架3

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(80)..(80)

<223>互补决定区3(CDR3)，X是15-40(23)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(81)..(132)

<223>构架4

<400>37

Glu Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly

1               5                   10                  15

Glu Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Xaa

            20                  25                  30

Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met Gly Xaa Gln

        35                  40                  45

Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Trp

    50                  55                  60

Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala Arg Xaa

65                  70                  75                  80

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Ala

                85                  90                  95

Pro Ser Val Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn Ser Pro Ser Asp Thr

            100                 105                 110

Ser Ser Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp Phe Leu Pro Asp Ser

        115                 120                 125

Ile Thr Phe Ser

    130

<210>38

<211>125

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(125)

<223>Vh6重链可变区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(30)

<223>构架1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(31)..(31)

<223>互补决定区1(CDR1)，X是3-20(7)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(32)..(45)

<223>构架2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(46)..(46)

<223>互补决定区2(CDR2)，X是10-30(18)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(47)..(78)

<223>构架3

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(79)..(79)

<223>互补决定区3(CDR3)，X是5-30(13)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(80)..(125)

<223>构架4

<400>38

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln

1               5                   10                  15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Xaa Trp

            20                  25                  30

Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu Trp Leu Gly Xaa Arg Ile

        35                  40                  45

Thr Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn

    50                  55                  60

Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Xaa Trp

65                  70                  75                  80

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Ala Ser Ala Pro

                85                  90                  95

Thr Leu Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn Ser Pro Ser Asp Thr Ser

            100                 105                 110

Ser Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp Phe Leu Pro

        115                 120                 125

<210>39

<211>91

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(91)

<223>Vh7重链可变区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(30)

<223>构架1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(31)..(31)

<223>互补决定区1(CDR1)，X是3-20(5)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(32)..(45)

<223>构架2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(46)..(46)

<223>互补决定区2(CDR2)，X是10-30(17)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(47)..(78)

<223>构架3

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(79)..(79)

<223>互补决定区3(CDR3)，X是5-30(13)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(80)..(91)

<223>构架4

<400>39

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala

1               5                   10                  15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Xaa Trp

            20                  25                  30

Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Xaa Arg Phe

        35                  40                  45

Val Phe Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Ile Ser

    50                  55                  60

Ser Leu Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Xaa Trp

65                  70                  75                  80

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ser

                85                  90

<210>40

<211>93

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(93)

<223>κ1_4轻链可变区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(24)

<223>构架1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(25)..(25)

<223>互补决定区1(CDR1)，X是10-30(17)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(26)..(40)

<223>构架2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(41)..(41)

<223>互补决定区2(CDR2)，X是3-20(7)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(42)..(73)

<223>构架3

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(74)..(74)

<223>互补决定区3(CDR3)，X是20-40(30)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(75)..(93)

<223>构架4

<400>40

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1               5                   10                  15

Asp Arg Arg Val Thr Ile Thr Cys Xaa Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly

            20                  25                  30

Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Xaa Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser

        35                  40                  45

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln

    50                  55                  60

Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Xaa Phe Gly Gln Gly Thr Lys

65                  70                  75                  80

Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe

                85                  90

<210>41

<211>92

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(92)

<223>κ2轻链可变区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(23)

<223>构架1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(24)..(24)

<223>互补决定区1(CDR1)，X是10-30(17)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(25)..(39)

<223>构架2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(40)..(40)

<223>互补决定区2(CDR2)，X是3-20(7)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(41)..(72)

<223>构架3

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(73)..(73)

<223>互补决定区3(CDR3)，X是20-40(29)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(74)..(92)

<223>构架4

<400>41

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1               5                   10                  15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Xaa Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln

            20                  25                  30

Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Xaa Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly

        35                  40                  45

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala

    50                  55                  60

Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Xaa Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val

65                  70                  75                  80

Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe

                85                  90

<210>42

<211>91

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(91)

<223>κ3轻链可变区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(23)

<223>构架1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(24)..(24)

<223>互补决定区1(CDR1)，X是5-30(13)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(25)..(39)

<223>构架2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(40)..(40)

<223>互补决定区2(CDR2)，X是3-20(7)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(41)..(72)

<223>构架3

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(73)..(73)

<223>互补决定区3(CDR3)，X是20-40(30)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(74)..(91)

<223>构架4

<400>42

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1               5                   10                  15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Xaa Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

            20                  25                  30

Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Xaa Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly

        35                  40                  45

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro

    50                  55                  60

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Xaa Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val

65                  70                  75                  80

Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val

                85                  90

<210>43

<211>85

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(85)

<223>κ5轻链可变区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(23)

<223>构架1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(24)..(24)

<223>互补决定区1(CDR1)，X是5-20(11)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(25)..(39)

<223>构架2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(40)..(40)

<223>互补决定区2(CDR2)，X是3-20(7)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(41)..(72)

<223>构架3

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(73)..(73)

<223>互补决定区3(CDR3)，X是10-30(19)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(74)..(85)

<223>构架4

<400>43

Glu Thr Thr Leu Thr Gln Ser Pro Ala Phe Met Ser Ala Thr Pro Gly

1               5                   10                  15

Asp Lys Val Asn Ile Ser Cys Xaa Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Glu

            20                  25                  30

Ala Ala Ile Phe Ile Ile Gln Xaa Gly Ile Pro Pro Arg Phe Ser Gly

        35                  40                  45

Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Asn Ile Glu Ser

    50                  55                  60

Glu Asp Ala Ala Tyr Tyr Phe Cys Xaa Leu Arg His Phe Trp Pro Gly

65                  70                  75                  80

Asp Gln Ala Ala Gly

                85

<210>44

<211>79

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(67)

<223>κNew1轻链可变区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(17)

<223>构架1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(18)..(18)

<223>互补决定区1(CDR1)，X是10-30(17)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(19)..(33)

<223>构架2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(34)..(34)

<223>互补决定区2(CDR2)，X是3-20(7)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(35)..(66)

<223>构架3

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(67)..(67)

<223>互补决定区3(CDR3)，X是10-30(21)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(68)..(79)

<223>构架4

<400>44

Glu Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Val Asn Leu Ser Met Ser Ala Gly

1               5                   10                  15

Glu Xaa Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Phe Ile

            20                  25                  30

Tyr Xaa Gly Ile Ser Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp

        35                  40                  45

Phe Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Ser Glu Asp Phe Ala Val Tyr

    50                  55                  60

Tyr Cys Xaa Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Asp Ile Lys Arg Thr

65                  70                  75

<210>45

<211>77

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(65)

<223>κNew2轻链可变区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(15)

<223>构架1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(16)..(16)

<223>互补决定区1(CDR1)，X是10-30(18)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(17)..(31)

<223>构架2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(32)..(32)

<223>互补决定区2(CDR2)，X是3-20(7)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(33)..(64)

<223>构架3

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(65)..(65)

<223>互补决定区3(CDR3)，X是10-30(21)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(66)..(77)

<223>构架4

<400>45

Glu Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Xaa

1               5                   10                  15

Trp Tyr Gln His Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Val Ile His Xaa

            20                  25                  30

Gly Ile Ser Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

        35                  40                  45

Leu Thr Ile Thr Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Leu Tyr Tyr Cys

    50                  55                  60

Xaa Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Asp Phe Lys Arg Thr

65                  70                  75

<210>46

<211>95

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(95)

<223>κNew3轻链可变区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(24)

<223>构架1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(25)..(25)

<223>互补决定区1(CDR1)，X是10-30(17)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(26)..(40)

<223>构架2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(41)..(41)

<223>互补决定区2(CDR2)，X是3-20(7)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(42)..(73)

<223>构架3

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(74)..(74)

<223>互补决定区3(CDR3)，X是3-30(9)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(75)..(95)

<223>构架4

<400>46

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1               5                   10                  15

Gly Arg Arg Ala Thr Ile Asn Cys Xaa Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly

            20                  25                  30

Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Xaa Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser

        35                  40                  45

Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln

    50                  55                  60

Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Xaa Phe Gly Gly Gly Thr Lys

65                  70                  75                  80

Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Lys Phe

                85                  90                  95

<210>47

<211>98

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(98)

<223>λ1a轻链可变区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(22)

<223>构架1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(23)..(23)

<223>互补决定区1(CDR1).X是5-25(14)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(24)..(38)

<223>构架2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(39)..(39)

<223>互补决定区2(CDR2).X是3-20(7)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(40)..(71)

<223>构架3

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(72)..(72)

<223>互补决定区3(CDR3).X是30-50(39)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(73)..(98)

<223>构架4

<400>47

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln

1               5                   10                  15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Xaa Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala

            20                  25                  30

Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Xaa Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

        35                  40                  45

Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Ser Gly Leu Gln Ser Glu

    50                  55                  60

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Xaa Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr

65                  70                  75                  80

Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro

                85                  90                  95

Ser Ser

<210>48

<211>99

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(99)

<223>λ1b轻链可变区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(23)

<223>构架1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(24)..(24)

<223>互补决定区1(CDR1)，X是3-25(13)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(25)..(39)

<223>构架2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(40)..(40)

<223>互补决定区2(CDR2)，X是3-20(7)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(41)..(72)

<223>构架3

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(73)..(73)

<223>互补决定区3(CDR3)，X是30-50(41)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(74)..(99)

<223>构架4

<400>48

Ala Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly

1               5                   10                  15

Gln Lys Val Thr Ile Ser Cys Xaa Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr

            20                  25                  30

Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Xaa Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly

        35                  40                  45

Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln Thr

    50                  55                  60

Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Xaa Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu

65                  70                  75                  80

Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro

                85                  90                  95

Pro Ser Ser

<210>49

<211>99

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(72)

<223>λ2轻链可变区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(22)

<223>构架1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(23)..(23)

<223>互补决定区1(CDR1)，X是8-25(14)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(24)..(38)

<223>构架2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(39)..(39)

<223>互补决定区2(CDR2)，X是3-20(7)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(40)..(71)

<223>构架3

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(72)..(72)

<223>互补决定区3(CDR3)，X是25-50(38)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(73)..(99)

<223>构架4

<400>49

Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln

1               5                   10                  15

Ser Ile Thr Ile Ser Cys Xaa Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala

            20                  25                  30

Pro Lys Leu Met Ile Tyr Xaa Gly Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Ser

        35                  40                  45

Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Ala Glu

    50                  55                  60

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Xaa Phe Gly Gly Gly Thr Thr Lys Leu

65                  70                  75                  80

Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro

                85                  90                  95

Pro Ser Ser

<210>50

<211>107

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(107)

<223>λ3a轻链可变区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(22)

<223>构架1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(23)..(23)

<223>互补决定区1(CDR1)，X是5-20(11)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(24)..(38)

<223>构架2vv

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(39)..(39)

<223>互补决定区2(CDR2)，X是3-20(7)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(40)..(71)

<223>构架3

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(72)..(72)

<223>互补决定区3(CDR3)，X是15-40(26)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(73)..(107)

<223>构架4

<400>50

Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln

1               5                   10                  15

Thr Ala Arg Ile Thr Cys Xaa Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

            20                  25                  30

Pro Val Leu Val Ile Tyr Xaa Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser

        35                  40                  45

Ser Ser Gly Thr Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Gln Ala Glu

    50                  55                  60

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Xaa Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr

65                  70                  75                  80

Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro

                85                  90                  95

Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr

            100                 105

<210>51

<211>93

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(93)

<223>λ3b轻链可变区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(22)

<223>构架1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(23)..(23)

<223>互补决定区1(CDR1)，X是5-20(11)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(24)..(39)

<223>构架2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(40)..(40)

<223>互补决定区2(CDR2)，X是3-20(7)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(41)..(72)

<223>构架3

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(73)..(73)

<223>互补决定区3(CDR3)，X是15-40(27)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(74)..(93)

<223>构架4

<400>51

Ser Tyr Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln

1               5                   10                  15

Thr Ala Arg Ile Thr Cys Xaa Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

            20                  25                  30

Pro Val Leu Val Val Tyr Asp Xaa Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly

        35                  40                  45

Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala

    50                  55                  60

Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Xaa Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu

65                  70                  75                  80

Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Thr Val Thr

                85                  90

<210>52

<211>98

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(98)

<223>λ3c轻链可变区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(22)

<223>构架1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(23)..(23)

<223>互补决定区1(CDR1)，X是5-20(11)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(24)..(38)

<223>构架2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(39)..(39)

<223>互补决定区2(CDR2)，X是3-20(7)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(40)..(71)

<223>构架3

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(72)..(72)

<223>互补决定区3(CDR3)，X是25-50(37)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(73)..(98)

<223>构架4

<400>52

Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln

1               5                   10                  15

Thr Ala Ser Ile Thr Cys Xaa Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser

            20                  25                  30

Pro Val Leu Val Ile Tyr Xaa Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser

        35                  40                  45

Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met

    50                  55                  60

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Xaa Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr

65                  70                  75                  80

Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Arg Ser Leu Cys Pro Pro

                85                  90                  95

Pro Pro

<210>53

<211>98

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(98)

<223>λ3e轻链可变区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(22)

<223>构架1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(23)..(23)

<223>互补决定区1(CDR1)，X是5-20(11)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(24)..(38)

<223>构架2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(39)..(39)

<223>互补决定区2(CDR2)，X是3-20(7)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(40)..(71)

<223>构架3

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(72)..(72)

<223>互补决定区3(CDR3)，X是15-40(26)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(73)..(98)

<223>构架4

<400>53

Ser Ser Glu Leu Thr Gln Asp Pro Ala Val Ser Val Ala Leu Gly Gln

1               5                   10                  15

Thr Val Arg Ile Thr Cys Xaa Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

            20                  25                  30

Pro Val Leu Val Ile Tyr Xaa Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

        35                  40                  45

Ser Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Glu

    50                  55                  60

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Xaa Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr

65                  70                  75                  80

Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro

                85                  90                  95

Ser Ser

<210>54

<211>94

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(94)

<223>λ4a轻链可变区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(22)

<223>构架1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(23)..(23)

<223>互补决定区1(CDR1)，X是5-25(12)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(24)..(38)

<223>构架2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(39)..(39)

<223>互补决定区2(CDR2)，X是5-25(11)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(40)..(71)

<223>构架3

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(72)..(72)

<223>互补决定区3(CDR3)，X是10-40(23)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(73)..(94)

<223>构架4

<400>54

Gln Pro Val Leu Thr Gln Ser Ser Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ser

1               5                   10                  15

Ser Val Lys Leu Thr Cys Xaa Trp His Gln Gln Gln Pro Gly Lys Ala

            20                  25                  30

Pro Arg Tyr Leu Met Lys Xaa Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

        35                  40                  45

Ser Ser Gly Ala Asp Arg Tyr Leu Thr Ile Ser Asn Leu Gln Ser Glu

    50                  55                  60

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Xaa Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr

65                  70                  75                  80

Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe

                85                  90

<210>55

<211>95

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(95)

<223>λ4b轻链可变区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(22)

<223>构架1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(23)..(23)

<223>互补决定区1(CDR1)，X是5-25(12)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(24)..(38)

<223>构架2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(39)..(39)

<223>互补决定区2(CDR2)，X是5-25(11)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(40)..(71)

<223>构架3

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(72)..(72)

<223>互补决定区3(CDR3)，X是15-40(25)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(73)..(95)

<223>构架4

<400>55

Gln Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala

1               5                   10                  15

Ser Val Lys Leu Thr Cys Xaa Trp His Gln Gln Gln Pro Glu Lys Gly

            20                  25                  30

Pro Arg Tyr Leu Met Lys Xaa Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

        35                  40                  45

Ser Ser Gly Ala Glu Arg Tyr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser Glu

    50                  55                  60

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Xaa Phe Gly Gly Ile Gly Gly Gly Thr

65                  70                  75                  80

Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Ser

                85                  90                  95

<210>56

<211>88

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(75)

<223>λ5轻链可变区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(22)

<223>构架1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(23)..(23)

<223>互补决定区1(CDR1)，X是5-25(14)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(24)..(39)

<223>构架2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(40)..(40)

<223>互补决定区2(CDR2)，X是5-20(10)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(41)..(74)

<223>构架3

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(75)..(75)

<223>互补决定区3(CDR3)，X是10-35(22)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(76)..(88)

<223>构架4

<400>56

Gln Ala Val Leu Thr Gln Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Pro Gly Ala

1               5                   10                  15

Ser Ala Ser Leu Thr Cys Xaa Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Pro

            20                  25                  30

Pro Gln Tyr Leu Leu Arg Tyr Xaa Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

        35                  40                  45

Ser Lys Asp Ala Ser Ala Asn Ala Gly Ile Leu Leu Ile Ser Gly Leu

    50                  55                  60

Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Xaa Phe Gly Gly Gly Thr

65                  70                  75                  80

Lys Leu Thr Val Leu Ser Gln Pro

                85

<210>57

<211>101

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(101)

<223>λ6轻链可变区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(22)

<223>构架1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(23)..(23)

<223>互补决定区1(CDR1)，X是5-25(13)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(24)..(38)

<223>构架2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(39)..(39)

<223>互补决定区2(CDR2)，X是3-20(7)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(40)..(73)

<223>构架3

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(74)..(74)

<223>互补决定区3(CDR3)，X是25-50(38)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(75)..(101)

<223>构架4

<400>57

Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro His Ser Val Ser Glu Ser Pro Gly Lys

1               5                   10                  15

Thr Val Thr Ile Ser Cys Xaa Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Ser Ala

            20                  25                  30

Pro Thr Thr Val Ile Tyr Xaa Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

        35                  40                  45

Ile Asp Ser Ser Ser Asn Ser Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu Lys

    50                  55                  60

Thr Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Xaa Phe Gly Gly Gly Thr Lys

65                  70                  75                  80

Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe

                85                  90                  95

Pro Pro Ser Ser Ser

            100

<210>58

<211>89

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(72)

<223>λ7轻链可变区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(22)

<223>构架1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(23)..(23)

<223>互补决定区1(CDR1)，X是5-25(14)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(24)..(38)

<223>构架2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(39)..(39)

<223>互补决定区2(CDR2)，X是3-20(7)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(40)..(71)

<223>构架3

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(72)..(72)

<223>互补决定区3(CDR3)，X是10-35(23)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(73)..(89)

<223>构架4

<400>58

Gln Ala Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly

1               5                   10                  15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Xaa Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala

            20                  25                  30

Pro Arg Ala Leu Ile Tyr Xaa Trp Thr Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser

        35                  40                  45

Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Val Gln Pro Glu

    50                  55                  60

Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Xaa Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr

65                  70                  75                  80

Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro

                85

<210>59

<211>89

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(89)

<223>λ8轻链可变区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(22)

<223>构架1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(23)..(23)

<223>互补决定区1(CDR1)，X是5-25(14)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(24)..(38)

<223>构架2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(39)..(39)

<223>互补决定区2(CDR2)，X是3-20(7)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(40)..(71)

<223>构架3

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(72)..(72)

<223>互补决定区3(CDR3)，X是15-35(25)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(73)..(89)

<223>构架4

<400>59

Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Phe Ser Val Ser Pro Gly Gly

1               5                   10                  15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Xaa Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Gln Ala

            20                  25                  30

Pro Arg Thr Leu Ile Tyr Xaa Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

        35                  40                  45

Ile Leu Gly Asn Lys Ala Ala Leu Thr Ile Thr Gly Ala Gln Ala Asp

    50                  55                  60

Asp Glu Ser Asp Tyr Tyr Cys Xaa Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr

65                  70                  75                  80

Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro

                85

<210>60

<211>91

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(91)

<223>λ9轻链可变区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(22)

<223>构架1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(23)..(23)

<223>互补决定区1(CDR1)，X是5-25(12)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(24)..(38)

<223>构架2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(39)..(39)

<223>互补决定区2(CDR2)，X是5-25(12)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(40)..(79)

<223>构架3

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(80)..(80)

<223>互补决定区3(CDR3)，X是15-40(28)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(81)..(91)

<223>构架4

<400>60

Gln Pro Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala

1               5                   10                  15

Ser Val Thr Leu Thr Cys Xaa Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Lys Gly

            20                  25                  30

Pro Arg Phe Val Met Arg Xaa Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Val Leu

        35                  40                  45

Gly Ser Gly Leu Asn Arg Tyr Leu Thr Ile Lys Asn Ile Gln Glu Glu

    50                  55                  60

Asp Glu Ser Asp Tyr His Cys Xaa Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr

65                  70                  75                  80

Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val

                85                  90

<210>61

<211>87

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(87)

<223>λ10轻链可变区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(22)

<223>构架1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(23)..(23)

<223>互补决定区1(CDR1)，X是5-25(13)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(24)..(38)

<223>构架2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(39)..(39)

<223>互补决定区2(CDR2)，X是3-20(7)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(40)..(71)

<223>构架3

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(72)..(72)

<223>互补决定区3(CDR3)，X是15-40(27)个任何氨基酸。

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(73)..(87)

<223>构架4

<400>61

Gln Ala Gly Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Lys Gly Leu Arg Gln

1               5                   10                  15

Thr Ala Thr Leu Thr Cys Xaa Trp Leu Gln Gln His Gln Gly His Pro

            20                  25                  30

Pro Lys Leu Leu Ser Tyr Xaa Gly Ile Ser Glu Arg Phe Ser Ala Ser

        35                  40                  45

Arg Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Thr Gly Leu Gln Pro Glu

    50                  55                  60

Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Xaa Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr

65                  70                  75                  80

Val Leu Gly Gln Pro Lys Ala

                85

<210>62

<211>354

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(354)

<223>IgA1重链恒定区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(102)

<223>CH1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(103)..(121)

<223>铰链

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(122)..(222)

<223>CH2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(223)..(354)

<223>CH3

<400>62

Ala Ser Pro Thr Ser Pro Lys Val Phe Pro Leu Ser Leu Cys Ser Thr

1               5                   10                  15

Gln Pro Asp Gly Asn Val Val Ile Ala Cys Leu Val Gln Gly Phe Phe

            20                  25                  30

Pro Gln Glu Pro Leu Ser Val Thr Trp Ser Glu Ser Gly Gln Gly Val

        35                  40                  45

Thr Ala Arg Asn Phe Pro Pro Ser Gln Asp Ala Ser Gly Asp Leu Tyr

    50                  55                  60

Thr Thr Ser Ser Gln Leu Thr Leu Pro Ala Thr Gln Cys Leu Ala Gly

65                  70                  75                  80

Lys Ser Val Thr Cys His Val Lys His Tyr Thr Asn Pro Ser Gln Asp

                85                  90                  95

Val Thr Val Pro Cys Pro Val Pro Ser Thr Pro Pro Thr Pro Ser Pro

            100                 105                 110

Ser Thr Pro Pro Thr Pro Ser Pro Ser Cys Cys His Pro Arg Leu Ser

        115                 120                 125

Leu His Arg Pro Ala Leu Glu Asp Leu Leu Leu Gly Ser Glu Ala Asn

    130                 135                 140

Leu Thr Cys Thr Leu Thr Gly Leu Arg Asp Ala Ser Gly Val Thr Phe

145                 150                 155                 160

Thr Trp Thr Pro Ser Ser Gly Lys Ser Ala Val Gln Gly Pro Pro Glu

                165                 170                 175

Arg Asp Leu Cys Gly Cys Tyr Ser Val Ser Ser Val Leu Pro Gly Cys

            180                 185                 190

Ala Glu Pro Trp Asn His Gly Lys Thr Phe Thr Cys Thr Ala Ala Tyr

        195                 200                 205

Pro Glu Ser Lys Thr Pro Leu Thr Ala Thr Leu Ser Lys Ser Gly Asn

    210                 215                 220

Thr Phe Arg Pro Glu Val His Leu Leu Pro Pro Pro Ser Glx Glu Glu

225                 230                 235                 240

Leu Ala Leu Asn Glu Leu Val Thr Leu Thr Cys Leu Ala Arg Gly Phe

                245                 250                 255

Ser Pro Lys Asp Val Leu Val Arg Trp Leu Gln Gly Ser Gln Glu Leu

            260                 265                 270

Pro Arg Glu Lys Tyr Leu Thr Trp Ala Ser Arg Gln Glu Pro Ser Gln

        275                 280                 285

Gly Thr Thr Thr Phe Ala Val Thr Ser Ile Leu Arg Val Ala Ala Glu

    290                 295                 300

Asp Trp Lys Lys Gly Asp Thr Phe Ser Cys Met Val Gly His Glu Ala

305                 310                 315                 320

Leu Pro Leu Ala Phe Thr Gln Lys Thr Ile Asp Arg Leu Ala Gly Lys

                325                 330                 335

Pro Thr His Val Asn Val Ser Val Val Met Ala Glu Val Asp Gly Thr

            340                 345                 350

Cys Tyr

<210>63

<211>340

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(340)

<223>IgA2重链恒定区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(102)

<223>CH1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(103)..(108)

<223>铰链

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(109)..(209)

<223>CH2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(210)..(340)

<223>CH3

<400>63

Ala Ser Pro Thr Ser Pro Lys Val Phe Pro Leu Ser Leu Asp Ser Thr

1               5                   10                  15

Pro Gln Asp Gly Asn Val Val Val Ala Cys Leu Val Gln Gly Phe Phe

            20                  25                  30

Pro Gln Glu Pro Leu Ser Val Thr Trp Ser Glu Ser Gly Gln Asn Val

        35                  40                  45

Thr Ala Arg Asn Phe Pro Pro Ser Gln Asp Ala Ser Gly Asp Leu Tyr

    50                  55                  60

Thr Thr Ser Ser Gln Leu Thr Leu Pro Ala Thr Gln Cys Pro Asp Gly

65                  70                  75                  80

Lys Ser Val Thr Cys His Val Lys His Tyr Thr Asn Pro Ser Gln Asp

                85                  90                  95

Val Thr Val Pro Cys Pro Val Pro Pro Pro Pro Pro Cys Cys His Pro

            100                 105                 110

Arg Leu Ser Leu His Arg Pro Ala Leu Glu Asp Leu Leu Leu Gly Ser

        115                 120                 125

Glu Ala Asn Leu Thr Cys Thr Leu Thr Gly Leu Arg Asp Ala Ser Gly

    130                 135                 140

Ala Thr Phe Thr Trp Thr Pro Ser Ser Gly Lys Ser Ala Val Gln Gly

145                 150                 155                 160

Pro Pro Glu Arg Asp Leu Cys Gly Cys Tyr Ser Val Ser Ser Val Leu

                165                 170                 175

Pro Gly Cys Ala Gln Pro Trp Asn His Gly Glu Thr Phe Thr Cys Thr

            180                 185                 190

Ala Ala His Pro Glu Leu Lys Thr Pro Leu Thr Ala Asn Ile Thr Lys

        195                 200                 205

Ser Gly Asn Thr Phe Arg Pro Glu Val His Leu Leu Pro Pro Pro Ser

    210                 215                 220

Glu Glu Leu Ala Leu Asn Glu Leu Val Thr Leu Thr Cys Leu Ala Arg

225                 230                 235                 240

Gly Phe Ser Pro Lys Asp Val Leu Val Arg Trp Leu Gln Gly Ser Gln

                245                 250                 255

Glu Leu Pro Arg Glu Lys Tyr Leu Thr Trp Ala Ser Arg Gln Glu Pro

            260                 265                 270

Ser Gln Gly Thr Thr Thr Phe Ala Val Thr Ser Ile Leu Arg Val Ala

        275                 280                 285

Ala Glu Asp Trp Lys Lys Gly Asp Thr Phe Ser Cys Met Val Gly His

    290                 295                 300

Glu Ala Leu Pro Leu Ala Phe Thr Gln Lys Thr Ile Asp Arg Leu Ala

305                 310                 315                 320

Gly Lys Pro Thr His Val Asn Val Ser Val Val Met Ala Glu Val Asp

                325                 330                 335

Gly Thr Cys Tyr

            340

<210>64

<211>384

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(384)

<223>IgD重链恒定区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(101)

<223>CH1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(102)..(135)

<223>铰链1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(136)..(159)

<223>铰链2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(160)..(267)

<223>CH2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(268)..(384)

<223>CH3

<400>64

Ala Pro Thr Lys Ala Pro Asp Val Phe Pro Ile Ile Ser Gly Cys Arg

1               5                   10                  15

His Pro Lys Asp Asn Ser Pro Val Val Leu Ala Cys Leu Ile Thr Gly

            20                  25                  30

Tyr His Pro Thr Ser Val Thr Val Thr Trp Tyr Met Gly Thr Gln Ser

        35                  40                  45

Gln Pro Gln Arg Thr Phe Pro Glu Ile Gln Arg Arg Asp Ser Tyr Tyr

    50                  55                  60

Met Thr Ser Ser Gln Leu Ser Thr Pro Leu Gln Gln Trp Arg Gln Gly

65                  70                  75                  80

Glu Tyr Lys Cys Val Val Gln His Thr Ala Ser Lys Ser Lys Lys Glu

                85                  90                  95

Ile Phe Arg Trp Pro Glu Ser Pro Lys Ala Gln Ala Ser Ser Val Pro

            100                 105                 110

Thr Ala Gln Pro Gln Ala Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala

        115                 120                 125

Pro Ala Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys

    130                 135                 140

Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu

145                 150                 155                 160

Cys Pro Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Tyr Leu Leu Thr Pro Ala

                165                 170                 175

Val Gln Asp Leu Trp Leu Arg Asp Lys Ala Thr Phe Thr Cys Phe Val

            180                 185                 190

Val Gly Ser Asp Leu Lys Asp Ala His Leu Thr Trp Glu Val Ala Gly

        195                 200                 205

Lys Val Pro Thr Gly Gly Val Glu Glu Gly Leu Leu Glu Arg His Ser

    210                 215                 220

Asn Gly Ser Gln Ser Gln His Ser Arg Leu Thr Leu Pro Arg Ser Leu

225                 230                 235                 240

Trp Asn Ala Gly Thr Ser Val Thr Cys Thr Leu Asn His Pro Ser Leu

                245                 250                 255

Pro Pro Gln Arg Leu Met Ala Leu Arg Glu Pro Ala Ala Gln Ala Pro

            260                 265                 270

Val Lys Leu Ser Leu Asn Leu Leu Ala Ser Ser Asp Pro Pro Glu Ala

        275                 280                 285

Ala Ser Trp Leu Leu Cys Glu Val Ser Gly Phe Ser Pro Pro Asn Ile

    290                 295                 300

Leu Leu Met Trp Leu Glu Asp Gln Arg Glu Val Asn Thr Ser Gly Phe

305                 310                 315                 320

Ala Pro Ala Arg Pro Pro Pro Gln Pro Arg Ser Thr Thr Phe Trp Ala

                325                 330                 335

Trp Ser Val Leu Arg Val Pro Ala Pro Pro Ser Pro Gln Pro Ala Thr

            340                 345                 350

Tyr Thr Cys Val Val Ser His Glu Asp Ser Arg Thr Leu Leu Asn Ala

        355                 360                 365

Ser Arg Ser Leu Glu Val Ser Tyr Val Thr Asp His Gly Pro Met Lys

    370                 375                 380

<210>65

<211>497

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(497)

<223>IgE重链恒定区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(103)

<223>CH1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(104)..(210)

<223>CH2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(211)..(318)

<223>CH3

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(319)..(497)

<223>CH4

<400>65

Ala Ser Thr Gln Ser Pro Ser Val Phe Pro Leu Thr Arg Cys Cys Lys

1               5                   10                  15

Asn Ile Pro Ser Asn Ala Thr Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Ala Thr

            20                  25                  30

Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Met Val Thr Trp Asp Thr Gly Ser Leu

        35                  40                  45

Asn Gly Thr Thr Met Thr Leu Pro Ala Thr Thr Leu Thr Leu Ser Gly

    50                  55                  60

His Tyr Ala Thr Ile Ser Leu Leu Thr Val Ser Gly Ala Trp Ala Lys

65                  70                  75                  80

Gln Met Phe Thr Cys Arg Val Ala His Thr Pro Ser Ser Thr Asp Trp

                85                  90                  95

Val Asp Asn Lys Thr Phe Ser Val Cys Ser Arg Asp Phe Thr Pro Pro

            100                 105                 110

Thr Val Lys Ile Leu Gln Ser Ser Cys Asp Gly Gly Gly His Phe Pro

        115                 120                 125

Pro Thr Ile Gln Leu Leu Cys Leu Val Ser Gly Tyr Thr Pro Gly Thr

    130                 135                 140

Ile Asn Ile Thr Trp Leu Glu Asp Gly Gln Val Met Asp Val Asp Leu

145                 150                 155                 160

Ser Thr Ala Ser Thr Thr Gln Glu Gly Glu Leu Ala Ser Thr Gln Ser

                165                 170                 175

Glu Leu Thr Leu Ser Gln Lys His Trp Leu Ser Asp Arg Thr Tyr Thr

            180                 185                 190

Cys Gln Val Thr Tyr Gln Gly His Thr Phe Glu Asp Ser Thr Lys Lys

        195                 200                 205

Cys Ala Asp Ser Asn Pro Arg Gly Val Ser Ala Tyr Leu Ser Arg Pro

    210                 215                 220

Ser Pro Phe Asp Leu Phe Ile Arg Lys Ser Pro Thr Ile Thr Cys Leu

225                 230                 235                 240

Val Val Asp Leu Ala Pro Ser Lys Gly Thr Val Asn Leu Thr Trp Ser

                245                 250                 255

Arg Ala Ser Gly Lys Pro Val Asn His Ser Thr Arg Lys Glu Glu Lys

            260                 265                 270

Gln Arg Asn Gly Thr Leu Thr Val Thr Ser Thr Leu Pro Val Gly Thr

        275                 280                 285

Arg Asp Trp Ile Glu Gly Glu Thr Tyr Gln Cys Arg Val Thr His Pro

    290                 295                 300

His Leu Pro Arg Ala Leu Met Arg Ser Thr Thr Lys Thr Ser Gly Pro

305                 310                 315                 320

Val Gly Pro Arg Ala Ala Pro Glu Val Tyr Ala Phe Ala Thr Pro Glu

                325                 330                 335

Trp Pro Gly Ser Arg Asp Lys Arg Thr Leu Ala Cys Leu Ile Gln Asn

            340                 345                 350

Phe Met Pro Glu Asp Ile Ser Val Gln Trp Leu His Asn Glu Val Gln

        355                 360                 365

Leu Pro Asp Ala Arg His Ser Thr Thr Gln Pro Arg Lys Thr Lys Gly

    370                 375                 380

Ser Gly Phe Phe Val Phe Ser Arg Leu Glu Val Thr Arg Ala Glu Trp

385                 390                 395                 400

Glu Gln Lys Asp Glu Phe Ile Cys Arg Ala Val His Glu Ala Ala Ser

                405                 410                 415

Pro Ser Gln Thr Val Gln Arg Ala Val Ser Val Asn Pro Gly Lys Asp

            420                 425                 430

Val Cys Val Glu Glu Ala Glu Gly Glu Ala Pro Trp Thr Trp Thr Gly

        435                 440                 445

Leu Cys Ile Phe Ala Ala Leu Phe Leu Leu Ser Val Ser Tyr Ser Ala

    450                 455                 460

Ala Leu Thr Leu Leu Met Val Gln Arg Phe Leu Ser Ala Thr Arg Gln

465                 470                 475                 480

Gly Arg Pro Gln Thr Ser Leu Asp Tyr Thr Asn Val Leu Gln Pro His

                485                 490                 495

Ala

<210>66

<211>339

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(339)

<223>IgG1重链恒定区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(98)

<223>CH1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(99)..(113)

<223>铰链

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(114)..(223)

<223>CH2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(224)..(339)

<223>CH3

<400>66

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1               5                   10                  15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

            20                  25                  30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

        35                  40                  45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

    50                  55                  60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65                  70                  75                  80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

                85                  90                  95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

            100                 105                 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

        115                 120                 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

    130                 135                 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145                 150                 155                 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

                165                 170                 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

            180                 185                 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

        195                 200                 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

    210                 215                 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu

225                 230                 235                 240

Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

                245                 250                 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asx Asn Gly Gln Pro Glu

            260                 265                 270

Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe

        275                 280                 285

Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly

    290                 295                 300

Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr

305                 310                 315                 320

Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Thr His Thr Cys Pro

                325                 330                 335

Pro Cys Pro

<210>67

<211>326

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(326)

<223>IgG2重链恒定区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(98)

<223>CH1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(99)..(110)

<223>铰链

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(111)..(219)

<223>CH2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(220)..(326)

<223>CH3

<400>67

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1               5                   10                  15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

            20                  25                  30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

        35                  40                  45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

    50                  55                  60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr

65                  70                  75                  80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

                85                  90                  95

Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

            100                 105                 110

Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

        115                 120                 125

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

    130                 135                 140

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

145                 150                 155                 160

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn

                165                 170                 175

Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp

            180                 185                 190

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro

        195                 200                 205

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu

    210                 215                 220

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn

225                 230                 235                 240

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

                245                 250                 255

Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

            260                 265                 270

Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

        275                 280                 285

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

    290                 295                 300

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

305                 310                 315                 320

Ser Leu Ser Pro Gly Lys

                325

<210>68

<211>377

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(377)

<223>IgG3重链恒定区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(98)

<223>CH1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(99)..(115)

<223>铰链1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(116)..(130)

<223>铰链2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(131)..(145)

<223>铰链3

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(146)..(160)

<223>铰链4

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(161)..(270)

<223>CH2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(271)..(377)

<223>CH3

<400>68

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1               5                   10                  15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

            20                  25                  30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

        35                  40                  45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

    50                  55                  60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65                  70                  75                  80

Tyr Thr Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

                85                  90                  95

Arg Val Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Pro

            100                 105                 110

Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg

        115                 120                 125

Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys

    130                 135                 140

Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro

145                 150                 155                 160

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

                165                 170                 175

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

            180                 185                 190

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Lys Trp Tyr

        195                 200                 205

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

    210                 215                 220

Gln Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

225                 230                 235                 240

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

                245                 250                 255

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln

            260                 265                 270

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met

        275                 280                 285

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

    290                 295                 300

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gln Pro Glu Asn Asn

305                 310                 315                 320

Tyr Asn Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

                325                 330                 335

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Ile

            340                 345                 350

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln

        355                 360                 365

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

    370                 375

<210>69

<211>327

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(327)

<223>IgG4重链恒定区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(98)

<223>CH1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(99)..(110)

<223>铰链

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(111)..(220)

<223>CH2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(221)..(327)

<223>CH3

<400>69

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1               5                   10                  15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

            20                  25                  30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

        35                  40                  45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

    50                  55                  60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

65                  70                  75                  80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

                85                  90                  95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro

            100                 105                 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

        115                 120                 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

    130                 135                 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

145                 150                 155                 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

                165                 170                 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

            180                 185                 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

        195                 200                 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

    210                 215                 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

225                 230                 235                 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

                245                 250                 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

            260                 265                 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

        275                 280                 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

    290                 295                 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

305                 310                 315                 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

                325

<210>70

<211>476

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(476)

<223>IgM重链恒定区

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(104)

<223>CH1

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(105)..(217)

<223>CH2

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(218)..(323)

<223>CH3

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(324)..(476)

<223>CH4

<400>70

Gly Ser Ala Ser Ala Pro Thr Leu Phe Pro Leu Val Ser Cys Glu Asn

1               5                   10                  15

Ser Pro Ser Asp Thr Ser Ser Val Ala Val Gly Cys Leu Ala Gln Asp

            20                  25                  30

Phe Leu Pro Asp Ser Ile Thr Phe Ser Trp Lys Tyr Lys Asn Asn Ser

        35                  40                  45

Asp Ile Ser Ser Thr Arg Gly Phe Pro Ser Val Leu Arg Gly Gly Lys

    50                  55                  60

Tyr Ala Ala Thr Ser Gln Val Leu Leu Pro Ser Lys Asp Val Met Gln

65                  70                  75                  80

Gly Thr Asp Glu His Val Val Cys Lys Val Gln His Pro Asn Gly Asn

                85                  90                  95

Lys Glu Lys Asn Val Pro Leu Pro Val Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys

            100                 105                 110

Val Ser Val Phe Val Pro Pro Arg Asp Gly Phe Phe Gly Asn Pro Arg

        115                 120                 125

Ser Lys Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr Gly Phe Ser Pro Arg Gln

    130                 135                 140

Ile Gln Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly Lys Gln Val Gly Ser Gly Val

145                 150                 155                 160

Thr Thr Asp Gln Val Gln Ala Glu Ala Lys Glu Ser Gly Pro Thr Thr

                165                 170                 175

Tyr Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr Ile Lys Glu Ser Asp Trp Leu Ser

            180                 185                 190

Gln Ser Met Phe Thr Cys Arg Val Asp His Arg Gly Leu Thr Phe Gln

        195                 200                 205

Gln Asn Ala Ser Ser Met Cys Val Pro Asp Gln Asp Thr Ala Ile Arg

    210                 215                 220

Val Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser Ile Phe Leu Thr Lys Ser

225                 230                 235                 240

Thr Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Asp Leu Thr Thr Tyr Asp Ser Val

                245                 250                 255

Thr Ile Ser Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu Ala Val Lys Thr His Thr

            260                 265                 270

Asn Ile Ser Glu Ser His Pro Asn Ala Thr Phe Ser Ala Val Gly Glu

        275                 280                 285

Ala Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser Gly Glu Arg Phe Thr Cys

    290                 295                 300

Thr Val Thr His Thr Asp Leu Pro Ser Pro Leu Lys Gln Thr Ile Ser

305                 310                 315                 320

Arg Pro Lys Gly Val Ala Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro

                325                 330                 335

Pro Ala Arg Glu Gln Leu Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys

            340                 345                 350

Leu Val Thr Gly Phe Ser Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Gln Met

        355                 360                 365

Gln Arg Gly Gln Pro Leu Ser Pro Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro

    370                 375                 380

Met Pro Glu Pro Gln Ala Pro Gly Arg Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu

385                 390                 395                 400

Thr Val Ser Glu Glu Glu Trp Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val

                405                 410                 415

Val Ala His Glu Ala Leu Pro Asn Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp

            420                 425                 430

Lys Ser Thr Gly Lys Pro Thr Ser Ala Asp Glu Glu Gly Phe Glu Asn

        435                 440                 445

Leu Trp Ala Thr Ala Ser Thr Phe Ile Val Leu Tyr Asn Val Ser Leu

    450                 455                 460

Val Met Ser Asp Thr Ala Gly Thr Cys Tyr Val Lys

465                 470                 475

<210>71

<211>107

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(107)

<223>轻链κ恒定区(IgKc)

<400>71

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

1               5                   10                  15

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

            20                  25                  30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

        35                  40                  45

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

    50                  55                  60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

65                  70                  75                  80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

                85                  90                  95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

            100                 105

<210>72

<211>107

<212>PRT

<213>智人(Homo sapiens)

<220>

<221>MISC_FEATURE

<222>(1)..(107)

<223>轻链λ恒定区(Igλ)

<400>72

Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser

1               5                   10                  15

Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp

            20                  25                  30

Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro

        35                  40                  45

Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn

    50                  55                  60

Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys

65                  70                  75                  80

Ser His Arg Lys Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr

                85                  90                  95

Val Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser

            100                 105

<210>73

<211>4

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>73

Gly Gly Gly Ser

1

<210>74

<211>6

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>74

Gly Ser Gly Gly Gly Ser

1               5

<210>75

<211>5

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>75

Cys Pro Pro Cys Pro

1               5

<210>76

<211>110

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>76

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

1               5                   10                  15

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

            20                  25                  30

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

        35                  40                  45

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

    50                  55                  60

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

65                  70                  75                  80

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

                85                  90                  95

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys

            100                 105                 110

<210>77

<211>110

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>77

Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

1               5                   10                  15

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

            20                  25                  30

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

        35                  40                  45

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

    50                  55                  60

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

65                  70                  75                  80

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

                85                  90                  95

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys

            100                 105                 110

<210>78

<211>107

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>78

Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp

1               5                   10                  15

Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe

            20                  25                  30

Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu

        35                  40                  45

Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe

    50                  55                  60

Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly

65                  70                  75                  80

Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr

                85                  90                  95

Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

            100                 105

<210>79

<211>110

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>79

Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

1               5                   10                  15

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

            20                  25                  30

Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr

        35                  40                  45

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

    50                  55                  60

Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

65                  70                  75                  80

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

                85                  90                  95

Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys

            100                 105                 110

<210>80

<211>110

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>80

Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

1               5                   10                  15

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

            20                  25                  30

Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr

        35                  40                  45

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

    50                  55                  60

Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

65                  70                  75                  80

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

                85                  90                  95

Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys

            100                 105                 110

<210>81

<211>107

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>81

Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu

1               5                   10                  15

Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe

            20                  25                  30

Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu

        35                  40                  45

Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe

    50                  55                  60

Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly

65                  70                  75                  80

Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr

                85                  90                  95

Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

            100                 105

<210>82

<211>247

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>82

Gln Ile Gln Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp

1               5                   10                  15

Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly Gly Ser Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

            20                  25                  30

Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

        35                  40                  45

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

    50                  55                  60

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

65                  70                  75                  80

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

                85                  90                  95

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

            100                 105                 110

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

        115                 120                 125

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

    130                 135                 140

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys

145                 150                 155                 160

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

                165                 170                 175

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

            180                 185                 190

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

        195                 200                 205

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser

    210                 215                 220

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

225                 230                 235                 240

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

                245

<210>83

<211>249

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>83

Gln Ile Gln Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp

1               5                   10                  15

Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly Gly Gly Gly Ser Cys Pro Pro Cys Pro

            20                  25                  30

Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

        35                  40                  45

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

    50                  55                  60

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

65                  70                  75                  80

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

                85                  90                  95

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

            100                 105                 110

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

        115                 120                 125

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

    130                 135                 140

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu

145                 150                 155                 160

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

                165                 170                 175

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

            180                 185                 190

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

        195                 200                 205

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

    210                 215                 220

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

225                 230                 235                 240

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

                245

<210>84

<211>251

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>84

Gln Ile Gln Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp

1               5                   10                  15

Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Cys Pro Pro

            20                  25                  30

Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro

        35                  40                  45

Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr

    50                  55                  60

Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn

65                  70                  75                  80

Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg

                85                  90                  95

Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val

            100                 105                 110

Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser

        115                 120                 125

Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys

    130                 135                 140

Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp

145                 150                 155                 160

Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe

                165                 170                 175

Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu

            180                 185                 190

Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe

        195                 200                 205

Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly

    210                 215                 220

Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr

225                 230                 235                 240

Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

                245                 250

<210>85

<211>247

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>85

Gln Ile Gln Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp

1               5                   10                  15

Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly Gly Ser Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

            20                  25                  30

Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

        35                  40                  45

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

    50                  55                  60

Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp

65                  70                  75                  80

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr

                85                  90                  95

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

            100                 105                 110

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu

        115                 120                 125

Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

    130                 135                 140

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys

145                 150                 155                 160

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

                165                 170                 175

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

            180                 185                 190

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

        195                 200                 205

Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gin Gly Asn Val Phe Ser

    210                 215                 220

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

225                 230                 235                 240

Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

                245

<210>86

<211>249

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>86

Gln Ile Gln Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp

1               5                   10                  15

Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly Gly Gly Gly Ser Cys Pro Pro Cys Pro

            20                  25                  30

Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

        35                  40                  45

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

    50                  55                  60

Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr

65                  70                  75                  80

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

                85                  90                  95

Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

            100                 105                 110

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

        115                 120                 125

Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

    130                 135                 140

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu

145                 150                 155                 160

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

                165                 170                 175

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

            180                 185                 190

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

        195                 200                 205

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

    210                 215                 220

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

225                 230                 235                 240

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

                245

<210>87

<211>247

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>87

Gln Ile Gln Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp

1               5                   10                  15

Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly Gly Ser Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

            20                  25                  30

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

        35                  40                  45

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

    50                  55                  60

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

65                  70                  75                  80

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

                85                  90                  95

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

            100                 105                 110

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

        115                 120                 125

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

    130                 135                 140

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

145                 150                 155                 160

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

                165                 170                 175

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

            180                 185                 190

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

        195                 200                 205

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

    210                 215                 220

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

225                 230                 235                 240

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

                245

<210>88

<211>247

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>88

Gln Ile Gln Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp

1               5                   10                  15

Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly Gly Ser Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

            20                  25                  30

Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

        35                  40                  45

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

    50                  55                  60

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

65                  70                  75                  80

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

                85                  90                  95

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

            100                 105                 110

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

        115                 120                 125

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

    130                 135                 140

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

145                 150                 155                 160

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

                165                 170                 175

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

            180                 185                 190

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

        195                 200                 205

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

    210                 215                 220

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

225                 230                 235                 240

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

                245

<210>89

<211>249

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>合成的肽

<400>89

Gln Ile Gln Gly Gly Thr Tyr Ser Cys His Phe Gly Pro Leu Thr Trp

1               5                   10                  15

Val Cys Lys Pro Gln Gly Gly Gly Gly Gly Ser Cys Pro Pro Cys Pro

            20                  25                  30

Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys

        35                  40                  45

Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val

    50                  55                  60

Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr

65                  70                  75                  80

Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu

                85                  90                  95

Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His

            100                 105                 110

Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys

        115                 120                 125

Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln

    130                 135                 140

Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met

145                 150                 155                 160

Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

                165                 170                 175

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

            180                 185                 190

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

        195                 200                 205

Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val

    210                 215                 220

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

225                 230                 235                 240

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

                245