毛红椿苦素及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及医药技术领域，更具体而言，涉及一种从中国毛红椿 (Toona ciliata var.pubescens)中提取分离得到的新颖的三萜类化合物毛 红椿苦素(toonapubesin C)。本发明还涉及该化合物的制备方法。生物 活性测试显示：该化合物为抑制HL-60人白血病细胞的活性成分，从 而它可用于制备治疗肿瘤疾病的药物。

背景技术

毛红椿为楝科香椿属植物，广泛分布在江西、湖北、湖南、广东、 贵州和云南等省；生于低海拔和中海拔的山地密林或疏林中。

发明内容

本发明是从中国毛红椿中提取分离得到的新颖的三萜类化合物毛 红椿苦素。经药理试验研究表明，该化合物对HL-60人白血病细胞具 有显著抑制活性。

因此，本发明的一个目的是提供新的三萜类化合物毛红椿苦素。

本发明的另一目的是提供所述毛红椿苦素的制备方法。

本发明的进一步目的是提供所述毛红椿苦素在制备治疗肿瘤疾病 的药物中的应用。

根据本发明的第一个目的，本发明首次从毛红椿中发现了一个新 的甘遂烷型三萜类化合物毛红椿苦素，其化学结构如下所示：

根据本发明的第二个目的，本发明提供了毛红椿苦素的制备方法， 它是从毛红椿中提取分离得到的，具体步骤如下：

提取：将中国毛红椿树皮用甲醇提取，所得提取液浓缩后得粗浸 膏；将该粗浸膏溶于水，混悬均匀后依次用氯仿和正丁醇萃取，所得 萃取液浓缩后分别得到氯仿浸膏和正丁醇浸膏；

分离：氯仿浸膏进行硅胶柱层析，以石油醚/乙酸乙酯梯度洗脱； 其中，石油醚/乙酸乙酯体积比80∶20洗脱部分，经Sephadex LH-20凝 胶柱层析，以氯仿/甲醇体积比1∶1洗脱，洗脱液再经制备型HPLC， 以甲醇-水体积比92∶8洗脱，得到毛红椿苦素。

在上述制备方法中，在提取步骤中，所述提取采用的方法为甲醇 渗漉提取。

在上述制备方法中，在分离步骤中，石油醚/乙酸乙酯梯度洗脱的 浓度依次为体积比90∶10、80∶20和70∶30。

在上述制备方法中，在分离步骤中，所述制备型HPLC的色谱柱 的填料为RP-18。

根据本发明的第三个目的，本发明提供了毛红椿苦素的用途。

本发明人对毛红椿苦素进行了体外抗肿瘤的实验。实验证明，毛 红椿苦素对肿瘤细胞株(例如HL-60人白血病细胞株)具有明显的抑制 作用。体外采用MTT方法进行HL-60人白血病细胞株抑制实验的结 果为IC₅₀＝2.1μM。

本发明的毛红椿苦素可用于制备治疗肿瘤的药物，特别是用于制 备治疗白血病的药物。

此外，本发明毛红椿苦素可以与药学上可接受的载体、赋形剂或 辅料组合，进而可制成抗肿瘤药物组合物。

本发明的毛红椿苦素可通过从植物中分离纯化得到；也可以经本 领域技术人员熟知的化学修饰方法合成获得。

具体实施方式

在如下的实施例中所指的毛红椿苦素的化学结构式(结构式中的 阿拉伯数字是化学结构中碳原子的标位)：

实施例1毛红椿苦素的制备

提取：将中国毛红椿树皮(采自江西省信丰县)4kg用甲醇(5L)进 行渗漉提取三次，所得提取液浓缩后得粗浸膏；将该粗浸膏溶于水， 混悬均匀后依次用氯仿(1L)和正丁醇(1L)分别萃取三次，所得萃取液 浓缩后分别得到氯仿浸膏(64g)和正丁醇浸膏(40g)。

分离：氯仿浸膏进行硅胶柱层析，以石油醚/乙酸乙酯梯度洗脱， 梯度洗脱的浓度依次为体积比90∶10、80∶20和70∶30；其中，石油醚/ 乙酸乙酯体积比80∶20洗脱部分，经Sephadex LH-20凝胶柱层析，以 氯仿/甲醇体积比1∶1洗脱，洗脱液再经制备型HPLC(色谱柱的填料为 RP-18)，以甲醇-水体积比92∶8洗脱，得到毛红椿苦素(15mg)。

毛红椿苦素，白色粉末，分子式为C₃₀H₄₈O₄。¹H及¹³C NMR数 据见表1。

表1毛红椿苦素的¹H和¹³CNMR(ppm，CDCl₃中)

实施例2抗肿瘤活性的测试

1、实验样品及实验方法

被测样品溶液的配制：测试样品为上述实施例1中制备的纯品化 合物毛红椿苦素。准确称取适量样品，用DMSO配制成所需浓度的溶 液，供活性测试。

抗肿瘤活性测定：采用四氮唑盐(MTT)还原法。将处于对数生长 期的HL-60人白血病细胞株按90μL/孔接种于96孔微量培养板内，培 养24h后加入药液1.0μL/孔，每个浓度均为三个复孔，另设无细胞调 零孔。肿瘤细胞在37℃、5％CO₂条件下培养72h后，加MTT(Sigma) 液(5mg/mL，用生理盐水配制)20μL/孔；继续培养4h后，加入三联 液(10％SDS-5％异丁醇-0.01mol/L HCl)50μL/孔，于CO₂培养箱中过 夜。然后用酶标仪在570nm波长测定光密度(OD₅₇₀)值。按下列公式 计算被测物对肿瘤细胞生长的抑制率，半数抑制浓度IC₅₀值采用Logit 法计算。

抑制率＝(对照组OD值-给药组OD值)/对照组OD值×100％

2、实验结果

化合物毛红椿苦素对HL-60人白血病细胞株抑制活性的结果： IC₅₀＝2.1μM，说明化合物毛红椿苦素对HL-60人白血病细胞株有显著 的抑制活性。

3、结论

化合物毛红椿苦素在低浓度下对HL-60人白血病细胞有显著的抑 制活性。因此，本发明的毛红椿苦素可用于制备治疗肿瘤的药物，特 别是用于制备治疗白血病的药物。