水稻OsACBP5基因及其在提高水稻抗病性中的应用

技术领域

本发明涉及植物抗病技术领域，具体地，涉及水稻OsACBP5基因及其在提高水稻抗病性中的应用。

背景技术

水稻是我国的重要粮食作物，全世界一半以上的人口以水稻为主食，病虫害浸染直接影响水稻的生长和产量。例如，由水稻黄单胞菌（Xanthomonas oryzae pv.oryzae, Xoo）引起的白叶枯病是水稻生产中的最严重的细菌性病害，在我国南北各稻区包括广东地区普遍存在，造成的损失巨大。据估计白叶枯病发生时，会导致水稻产量减产20~30%，严重的甚至导致绝收。因此，改善和提高水稻对病原菌胁迫的抗性、培育具有高抗病性的新种质，在促进水稻生产稳步发展、保障我国的粮食安全上具有重要的作用。

开发水稻抗病基因是提高水稻对病原菌胁迫的抗性、培育具有高抗病性的新种质的有效途径。目前，水稻中已定位至少30个稻瘟病抗性位点和25个白叶枯病抗性位点。其中，抗稻瘟病的Pib和Pi-ta和抗白叶枯病的Xa21和Xa1基因已经被克隆鉴定。但是，目前水稻的抗病基因资源还不够丰富，而且已报道的这些抗病基因大多都是针对某一特定病害起作用。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种水稻抗病基因OsACBP5。

    本发明的另一个目的是提供一种抗病基因OsACBP5在提高水稻抗病性中的应用，尤其是提高水稻抗黄单胞菌引起的白叶枯病。

为了实现上述目的，本发明是通过以下方案予以实现的：

一种水稻抗病基因OsACBP5，该基因的全长5,579 bp（如SEQ ID NO：1所示），CDS长1,710 bp（如SEQ ID NO：2所示），编码570 aa的蛋白（如SEQ ID NO：3所示）。

发明人通过研究发现，该基因能够提高水稻抗黄单胞菌引起的白叶枯病。

经序列比对发现，本发明水稻抗病基因OsACBP5编码的蛋白与拟南芥AtACBP3蛋白是同源蛋白，同AtACBP3一样，OsACBP5是唯一一个其ACB结构域存在于C末端的ACBP蛋白，其N末端也同样检测到了与AtACBP3相似的信号肽/转膜结构域；氨基酸序列比对分析结果显示，AtACBP3和OsACBP5蛋白中氨基酸序列的相同率为56%。

水稻OsACBP5基因在提高水稻抗病中的应用，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1或2所示。

本发明通过比较野生型和过表达转基因（OsACBP5基因）植物对细菌性病菌的耐受性，结果表明OsACBP5基因可以提高植物的抗病能力，尤其是抗稻瘟病和白叶枯病，可以广泛应用于基因工程领域有着巨大的经济价值和应用前景。实施例中虽然中做了对日本晴品种的抗病情况，但是，本发明在保护基因的用途时，对于水稻的品种并不局限于日本晴这种品种。

水稻OsACBP5基因在提高水稻抗黄单胞菌引起的白叶枯病中的应用，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1或2所示。

一种抗黄单胞菌引起的白叶枯病的水稻的构建方法，包括如下步骤：

S1.将SEQ ID NO：1或2所述的OsACBP5基因克隆到PCXSN-MYC载体；

S2.用农杆菌转化法侵染水稻，得到稳定表达的转基因植株。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

本发明在水稻中首次发现了OsACBP5基因，该基因的全长5,579 bp，CDS长1,710 bp，编码570 aa的蛋白。用CDD、PFAM、SMART、Interproscan程序分析预测，该蛋白有跨膜域和ACBP结构域。通过比较突变体、野生型和过表达转基因水稻的对细菌性病菌的耐受性，发现OsACBP5基因可以提高水稻的抗病能力，可以广泛应用于基因工程领域有着巨大的经济价值和应用前景。

附图说明

图1为SMART程序预测OsACBP5蛋白的结构域，含有跨膜结构域和ACBP结构域。

图2为黄单胞菌（Xoo）处理16天后野生型、过表达转基因水稻植株的生长情况，CK为野生型水稻。

具体实施方式

下面结合说明书附图和具体实施例对本发明作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。

实施例1水稻OsACBP5基因的克隆

根据拟南芥中的AtACBP3的同源蛋白的同源性，在水稻基因组数据中利用Blastp 程序进行搜索，得到水稻OsACBP5蛋白，其是唯一一个其ACB结构域存在于C末端的水稻ACBP蛋白，其N末端也同样检测到了与AtACBP3相似的信号肽/转膜结构域。设计正反向引物

XS258：CATGGAGCTGTTCTACGAGCTGCTCCTC；

XS259：TCATTCAGCAGGGATGTCAGAACTCTGT；

提取水稻叶片RNA，反转录成cDNA后，以上述引物进行PCR扩增，将PCR扩增产物进行克隆测序。水稻OsACBP5基因的全长5579 bp（如SEQ ID NO：1所示），CDS长1710 bp（如SEQ ID NO：2所示），编码570 aa的蛋白（如SEQ ID NO：3所示）。用CDD、PFAM、SMART、Interproscan程序分析预测，水稻OsACBP5蛋白有跨膜域和ACBP结构域，见图1。

实施例2水稻OsACBP5基因的功能研究

将实施例1所述的OsACBP5基因连接到pCXSN-MYC载体上，具体步骤如下：将通过XS258和XS259引物克隆后的序列（即SEQ ID NO：2所示）序列），通过TaKaRa的加“A”试剂盒，与用XcmⅠ进行酶切的pCXSN-MYC载体相连接，在含卡那平板上进行筛选后，通过PCR鉴定并送测序，正确后转化农杆菌。

将阳性载体利用农杆菌转化法转化到日本晴水稻中，得到稳定表达的转基因植株OsACBP5-OE，具体步骤如下：

将成熟水稻种子消毒后，经盾片诱导培养基诱导产生胚性愈伤，用含有鉴定正确的农杆菌侵染，侵染20 min后将愈伤组织转至加有一张滤纸的共培养基上，然后转入筛选培养基上进行筛选培养。生长旺盛的水稻愈伤在预分化光照培养2-3周，转移到分化培养基上培养至分化出苗，再转至壮苗生根培养基中，最后移栽到人工气候室种植。

黄单胞菌处理野生型和转基因水稻：分别将野生型（日本晴水稻，Oryza sativajaponica. cv. Nipponbare，后续简称为CK）和转基因水稻OsACBP5-OE的成熟种子，去颖壳，用75%酒精浸泡30~45秒，无菌水洗3次，再用20%的次氯酸钠浸泡30分钟，不时摇晃，水洗5次以上；消毒完成后，将三种类型的种子分别置于含有1/2 MS液体培养液的无菌烧杯内培养。 然后再种植在1/2 MS固体培养基上，并移入28℃（16-h光照/8-h黑暗）的人工气候室。

待以上三种水稻生长到20天大小的植株，分别接种黄单胞菌，具体步骤如下：采用剪叶法进行接种，利用剪出2 - 3cm的缺口，将菌龄为3 d，菌液浓度3×10⁸ cfu，，接种后于湿度大于85%的环境中培育。

选取己完全展开的水稻野生型和转基因植株叶片，用手术剪蘸取菌液，剪切叶片2-3 cm的缺口，接种后90%的环境中培育。

接种Xoo（Pxo99）处理后16天，发现转基因水稻OsACBP5-OE的叶片比对照野生型水稻的叶片病斑长度与叶片总长比值低（见图2），这说明OsACBP5基因可以提高植物对黄单胞菌的抗性。

                         SEQUENCE LISTING

<110>  中山大学

<120>  水稻OsACBP5基因及其在提高水稻抗病性中的应用

<130> 

<160>  5    

<170>  PatentIn version 3.3

<210>  1

<211>  5580

<212>  DNA

<213>  OsACBP5基因DNA序列全长

<400>  1

ccggttgctc gatcgtctcg ctctcctctc ctcttctctt cgtctctcct cctgaccctt     60

tttccgcttt cccttttccc ccctcctcga tccgcggcgc aaccgaacac gaaagcgaga    120

gagagaggag tgcagccgct gccctgtccc ctcaccgcgc cgcgccgaca tggagctgtt    180

ctacgagctg ctcctcacgg cggctgcctc cctcctcgtc gccttcctgc tggccaggct    240

gctggcctcc gccgccaccg ccagtgatcc ccgccgccgc gcgcccgatc acgccgccgt    300

gatcgcggag gaggaggcgg tggtggtgga ggaggagagg atcatcgagg tcgatgaggt    360

cgaggtgaag agcgcgcgcg cgagggagtg cgtggtttcg gaggggtggg tcgaggtggg    420

gagggcctcg tcggcggagg ggaagctcga gtgcttgccg gaggaagagg aggctcccgc    480

gaaggccgct cgggagcttg ttctcgatgc cgttttggag gaacgcgagg aggaaggaca    540

agttggcgaa gagcggtgcg atttggccgc tgcggtggcg gaggtcgtgg gagtgaagcc    600

gcatgagttg ggggttgaag ctgctcccgg ggaggtatct gacgtgacgc tggaggaagg    660

gaaggtgcag gatgttgggg tggagcagca tgatttggtc gccgaggctg ctccaaggga    720

agctcttgac acagggttgg agaaacaggg tgttcccatc attgaagcgg ttgaaatcaa    780

gcggcaggat gatctgggtg ctgaggtagc tccgagtgac gttcctgagg tggaatttga    840

gcaacaggga gttcgcatta ttgaagctat tgatgtgaat caacatcatc gggttgctct    900

ggctgctcct gcggaagttg ttgatgcggg attggaggag agggtccaag ctattgaagc    960

agggtcatct ggattgactt ccgagacagt tcctgaagag gttcttgacg agttatctga   1020

gaagcaagaa gagcaagtta ttgaagagaa ggaacatcaa ttggctgcag cgactgctcc   1080

agtagcaatt cctggtgtgg cattggcaga gacggaggaa cttaaagaag aacaatcctc   1140

tgaaaaagct gtcaatgttc atgaagaagt tcagagtaag gacgaagcta aatgcaagct   1200

ccatctggtt gatcaacaag aaggttcggc ttctaaggtg gagctggtgg ggaggaatac   1260

cgacaatgtg gaaattagcc atggaagcag ttctggtgac aaaatgattg ctgagttgac   1320

cgaggaggaa ttgacattgc aaggtgtgcc cgcagatgag actcagacag acatggaatt   1380

tggggagtgg gaagggattg aaagaactga gatagaaaag aggtttggtg tggcagcagc   1440

gtttgcatct agtgacgccg ggatggctgc cctgtcaaag cttgatagtg atgtgcagct   1500

gcagctgcag ggactcctta aggttgccat tgatggtcca tgctatgact ctacacagcc   1560

acttaccttg aggccttcat ctcgtgcaaa atggtaattg tttttctcat tgatatccta   1620

gctccaactt tttttttggt atgctgcaca actgcggtag gttatatagt tcaaggacaa   1680

caaaaccaat atactaccca aatgccttac tttgcactgg ctagaatgta atcggcaatg   1740

gacttgtgat ttataggcag atcaggtata ctggtctgaa atagcttaaa ctagtccttt   1800

ttttggcaaa agaccaaagt acagaacttt gaactctgaa ttctgggtag ttggtagata   1860

gactgtaatg acatattaga aaactgaatt gtttgatctg ctggtctgtt tgatctagtt   1920

gggacttctt atggctacta tgacacttat gtatgaaatt tggtcctagc tatttggcta   1980

aacctaaaaa agagccaaag aactggttca aaattttgaa tcccatttta ctgcggaaca   2040

tagaacttct ctgtggaaca ataaacgact catataatgc aaaagttttt aatcttttgc   2100

ataattgatt gttaaaatta gaaaaatatt ttcctacctt atgttgtgac ttgagacaat   2160

gagaatctgt cctctaattt gttaagggga aaaaaagctt ctgtcaactt ttctgggcta   2220

tctaaacaaa gacattaaat gtgccatttt tgttttatat tgtttaataa acttgttatg   2280

ctaaaagaag ataattatag ttgtccatca tcagtgaaga taaagataag tgaattataa   2340

ttgcccatca tcaatgggat aatgcactta aaccagtgat atagtgtgta atagtgtaag   2400

gatgtcactg atacgctgat cttctgtcat gcataatggt gtgtggttca catgagaatc   2460

tatcaagttt ttgggataag ttgcaagtga aggcaaagca aagcatatga aaagcatagt   2520

atttttagag gtatcaatcc agtgttactt ggccgcactg caaggtagtt attcatataa   2580

acaggccaaa acacttcatc tatgtatgcc caacatgata taactgtgac atgagtgcag   2640

gacacacata ttgcaatatt ccatgcttaa tgcagtcaga tttgtaattt ggagtgcttc   2700

tccgagatag tttgtaacta atcatgtagc tactatttgg aatccaaaaa tggacaaaat   2760

ccaatgtcaa atatatgatg taagcagtta ttgagatgct gatacgctag gtatttctct   2820

tgttggacat aattatatat gagtatatca ttgaactata ggtattttgt caaagctacc   2880

taaaacgatg catttgagtt gattcaataa ttatatctta actgaatacc tttatatatg   2940

acaaaaccta aatggtgggc gacccccttt tcatctccca tatttggcat gtgggaccca   3000

cctgttagtt gcatacttgc atgtgataga caattatagt actcctgtca cttttgaaca   3060

tttattcttt ttactatgag tttttccaca aatacttgtc acttcacagt ctcaatcaat   3120

caatttttgt ttgcatagag cgcccctgtt agttctatat gtgccaccat gtaattcaat   3180

atcatatact tggagtgcag aggtagcata tacttacaaa atgggaccta tcaaaaaaat   3240

tactagttga atttttttca ctggtattat gatatgccat cgaatgactg attccagcca   3300

gatttcctat gataaatgag agtaatgatc acaaattcaa agaattttca tatgttttgc   3360

atgtgcgcag caccttatct ctcatttgtt ggttgtgtag cctttttata ttgattcttt   3420

aaatgggttg ctgccaaaag cggagcgggg cctgtgtcta accataacaa ttaccctttg   3480

gttgagtgag aacctagatg ttttagaata tggaatgctg gtcacataat atacatgatg   3540

tgacagcatc acagcactga catcttgcac ctatctctct atgttaaggc tttctattta   3600

gtataatggt agttggttga caatctatag tcatattcat atatgcctgt aagtaattct   3660

ggagttatac ttgcagtaac tatatataac ttggctactt atatttttta tttccaaaaa   3720

ttatagggaa tgtatgttgg actatatgaa aaattataag ttgtaaatag acataaggaa   3780

agacacacaa gatggtgggc tatttgtttg taggagttgt acaattctgt taagctgcat   3840

acgagtcaca gtctgtaatg ataacccata actatcgtgt attattctct cagggctgct   3900

tggcaaaagc tagggaacat gtatccggag acagctatgg aaagatacat gaatcttttg   3960

tcagaggcta ttccaggatg gatgggtgac aatatctcgg taagtttttc tatgggtgcc   4020

aaagtgttac ttctgtttat tgcattgttt ttttacacca gactggacaa tagttctaat   4080

catttcgaaa tactgtactc tagggcacaa aggaacatga agctggtgat gatgctgtag   4140

ggtctgtctt aacaatgact tcaaatacaa tcaaccaaca tgacagtcaa gggtaattta   4200

ctcatttact gtagtgtgaa acctggaatg tagcaaagtg ttgacagggc tgaccatacc   4260

gatgatatac ctgccatact aactagtagt atttgttagt gctggtataa gaatatctta   4320

aatgaaattc ctggctcttt agctgtacca gttctttttt acaatggcaa tatctacgag   4380

tcccaactgg tataactcaa tctggtacgg taaccttgat ttagaagtgt ttctaatgtt   4440

tattaccatg gcttgctcct gctgatggat ttcttggcag gaatgaagac aatactggca   4500

tgtatgaagg tcacttgaca agttccccta acccagagaa aggtacgtac ttgtcatatt   4560

ttcggcagtg aaccaggatt ttttttatct ggctcctaaa agtaaaatat tgcaattcat   4620

tagtgaccag tgttgtgtat ttatgcatga cgactggttc aggtgcattt gtgaaattaa   4680

cttctgatag ctatctatca tttttttgcc tgcaccctct gtgatctcca ctttgttaac   4740

cacattttgt aaggaaaact aaattacaag gagtatctcc tgcgtgtttg agaaaaaaaa   4800

acttatggag tatattgcat ttcattagtg gtagttctcc tgccatgcat gtgttgtgct   4860

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tcattctttt tttacttgct atttcaggca taggtgcaga tcacaatgca tgcatttgac   4980

cgttacatta ctgaacttat ttagaaaatg atatctaaag taattttgtg aaaaaaaaat   5040

ctgctaatac catttcagtg tgaaaatagt ataaacattt ttagtcaaag aatggaagtg   5100

taccgttcct ctatttcagt atgtttctgt ttgattactt cgtcaatcaa tttcatgaat   5160

tcaacccgcc actaaatttt caggacagag ttctgacatc cctgctgaat gaacataaca   5220

ctcatggaag atttcttgca tcagtgattt cagcccattg ctgagaccgc taccgatgcc   5280

ttcctcataa gattagattt gtacagtgct cctgtggtgc taatattagt gttgtcatgg   5340

tgttggtttg tgtatatata tgactgtata tatcagtaac tgccggtcct actgcgtgta   5400

ttccgccagc agcagactta tcatctggta ttctggtgta gtctgtagaa caatacatct   5460

ggtgagtcgt aattatatgt cgatacgatg cagtttggaa ggagaaattg aagtggttgg   5520

aaaaccagtt gaaaggactg aaaaataatc tcatcagaag gaacataaat tctttatccc   5580

<210>  2

<211>  1710

<212>  DNA

<213>  OsACBP5基因cDNA序列全长

<400>  2

atggagctgt tctacgagct gctcctcacg gcggctgcct ccctcctcgt cgccttcctg     60

ctggccaggc tgctggcctc cgccgccacc gccagtgatc cccgccgccg cgcgcccgat    120

cacgccgccg tgatcgcgga ggaggaggcg gtggtggtgg aggaggagag gatcatcgag    180

gtcgatgagg tcgaggtgaa gagcgcgcgc gcgagggagt gcgtggtttc ggaggggtgg    240

gtcgaggtgg ggagggcctc gtcggcggag gggaagctcg agtgcttgcc ggaggaagag    300

gaggctcccg cgaaggccgc tcgggagctt gttctcgatg ccgttttgga ggaacgcgag    360

gaggaaggac aagttggcga agagcggtgc gatttggccg ctgcggtggc ggaggtcgtg    420

ggagtgaagc cgcatgagtt gggggttgaa gctgctcccg gggaggtatc tgacgtgacg    480

ctggaggaag ggaaggtgca ggatgttggg gtggagcagc atgatttggt cgccgaggct    540

gctccaaggg aagctcttga cacagggttg gagaaacagg gtgttcccat cattgaagcg    600

gttgaaatca agcggcagga tgatctgggt gctgaggtag ctccgagtga cgttcctgag    660

gtggaatttg agcaacaggg agttcgcatt attgaagcta ttgatgtgaa tcaacatcat    720

cgggttgctc tggctgctcc tgcggaagtt gttgatgcgg gattggagga gagggtccaa    780

gctattgaag cagggtcatc tggattgact tccgagacag ttcctgaaga ggttcttgac    840

gagttatctg agaagcaaga agagcaagtt attgaagaga aggaacatca attggctgca    900

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gaacaatcct ctgaaaaagc tgtcaatgtt catgaagaag ttcagagtaa ggacgaagct   1020

aaatgcaagc tccatctggt tgatcaacaa gaaggttcgg cttctaaggt ggagctggtg   1080

gggaggaata ccgacaatgt ggaaattagc catggaagca gttctggtga caaaatgatt   1140

gctgagttga ccgaggagga attgacattg caaggtgtgc ccgcagatga gactcagaca   1200

gacatggaat ttggggagtg ggaagggatt gaaagaactg agatagaaaa gaggtttggt   1260

gtggcagcag cgtttgcatc tagtgacgcc gggatggctg ccctgtcaaa gcttgatagt   1320

gatgtgcagc tgcagctgca gggactcctt aaggttgcca ttgatggtcc atgctatgac   1380

tctacacagc cacttacctt gaggccttca tctcgtgcaa aatgggctgc ttggcaaaag   1440

ctagggaaca tgtatccgga gacagctatg gaaagataca tgaatctttt gtcagaggct   1500

attccaggat ggatgggtga caatatctcg ggcacaaagg aacatgaagc tggtgatgat   1560

gctgtagggt ctgtcttaac aatgacttca aatacaatca accaacatga cagtcaaggg   1620

aatgaagaca atactggcat gtatgaaggt cacttgacaa gttcccctaa cccagagaaa   1680

ggacagagtt ctgacatccc tgctgaatga                                    1710

<210>  3

<211>  569

<212>  PRT

<213>  OsACBP5蛋白序列

<400>  3

Met Glu Leu Phe Tyr Glu Leu Leu Leu Thr Ala Ala Ala Ser Leu Leu

1               5                   10                  15     

Val Ala Phe Leu Leu Ala Arg Leu Leu Ala Ser Ala Ala Thr Ala Ser

            20                  25                  30         

Asp Pro Arg Arg Arg Ala Pro Asp His Ala Ala Val Ile Ala Glu Glu

        35                  40                  45             

Glu Ala Val Val Val Glu Glu Glu Arg Ile Ile Glu Val Asp Glu Val

    50                  55                  60                 

Glu Val Lys Ser Ala Arg Ala Arg Glu Cys Val Val Ser Glu Gly Trp

65                  70                  75                  80 

Val Glu Val Gly Arg Ala Ser Ser Ala Glu Gly Lys Leu Glu Cys Leu

                85                  90                  95     

Pro Glu Glu Glu Glu Ala Pro Ala Lys Ala Ala Arg Glu Leu Val Leu

            100                 105                 110        

Asp Ala Val Leu Glu Glu Arg Glu Glu Glu Gly Gln Val Gly Glu Glu

        115                 120                 125            

Arg Cys Asp Leu Ala Ala Ala Val Ala Glu Val Val Gly Val Lys Pro

    130                 135                 140                

His Glu Leu Gly Val Glu Ala Ala Pro Gly Glu Val Ser Asp Val Thr

145                 150                 155                 160

Leu Glu Glu Gly Lys Val Gln Asp Val Gly Val Glu Gln His Asp Leu

                165                 170                 175    

Val Ala Glu Ala Ala Pro Arg Glu Ala Leu Asp Thr Gly Leu Glu Lys

            180                 185                 190        

Gln Gly Val Pro Ile Ile Glu Ala Val Glu Ile Lys Arg Gln Asp Asp

        195                 200                 205            

Leu Gly Ala Glu Val Ala Pro Ser Asp Val Pro Glu Val Glu Phe Glu

    210                 215                 220                

Gln Gln Gly Val Arg Ile Ile Glu Ala Ile Asp Val Asn Gln His His

225                 230                 235                 240

Arg Val Ala Leu Ala Ala Pro Ala Glu Val Val Asp Ala Gly Leu Glu

                245                 250                 255    

Glu Arg Val Gln Ala Ile Glu Ala Gly Ser Ser Gly Leu Thr Ser Glu

            260                 265                 270        

Thr Val Pro Glu Glu Val Leu Asp Glu Leu Ser Glu Lys Gln Glu Glu

        275                 280                 285            

Gln Val Ile Glu Glu Lys Glu His Gln Leu Ala Ala Ala Thr Ala Pro

    290                 295                 300                

Val Ala Ile Pro Gly Val Ala Leu Ala Glu Thr Glu Glu Leu Lys Glu

305                 310                 315                 320

Glu Gln Ser Ser Glu Lys Ala Val Asn Val His Glu Glu Val Gln Ser

                325                 330                 335    

Lys Asp Glu Ala Lys Cys Lys Leu His Leu Val Asp Gln Gln Glu Gly

            340                 345                 350        

Ser Ala Ser Lys Val Glu Leu Val Gly Arg Asn Thr Asp Asn Val Glu

        355                 360                 365            

Ile Ser His Gly Ser Ser Ser Gly Asp Lys Met Ile Ala Glu Leu Thr

    370                 375                 380                

Glu Glu Glu Leu Thr Leu Gln Gly Val Pro Ala Asp Glu Thr Gln Thr

385                 390                 395                 400

Asp Met Glu Phe Gly Glu Trp Glu Gly Ile Glu Arg Thr Glu Ile Glu

                405                 410                 415    

Lys Arg Phe Gly Val Ala Ala Ala Phe Ala Ser Ser Asp Ala Gly Met

            420                 425                 430        

Ala Ala Leu Ser Lys Leu Asp Ser Asp Val Gln Leu Gln Leu Gln Gly

        435                 440                 445             

Leu Leu Lys Val Ala Ile Asp Gly Pro Cys Tyr Asp Ser Thr Gln Pro

    450                 455                 460                

Leu Thr Leu Arg Pro Ser Ser Arg Ala Lys Trp Ala Ala Trp Gln Lys

465                 470                 475                 480

Leu Gly Asn Met Tyr Pro Glu Thr Ala Met Glu Arg Tyr Met Asn Leu

                485                 490                 495    

Leu Ser Glu Ala Ile Pro Gly Trp Met Gly Asp Asn Ile Ser Gly Thr

            500                 505                 510        

Lys Glu His Glu Ala Gly Asp Asp Ala Val Gly Ser Val Leu Thr Met

        515                 520                 525            

Thr Ser Asn Thr Ile Asn Gln His Asp Ser Gln Gly Asn Glu Asp Asn

    530                 535                 540                

Thr Gly Met Tyr Glu Gly His Leu Thr Ser Ser Pro Asn Pro Glu Lys

545                 550                 555                 560

Gly Gln Ser Ser Asp Ile Pro Ala Glu

                565                

<210>  4

<211>  28

<212>  DNA

<213>  XS258

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