一种免疫层析半定量检测方法及适用其的免疫层析半定量试剂卡

技术领域

本发明属于免疫层析分析技术领域，具体地，涉及一种免疫层析半定量检测方法及适用其的免疫层析半定量试剂卡。

背景技术

免疫层析试剂卡主要有胶体金免疫层析试剂卡和荧光免疫层析试剂卡，市面上的免疫层析试剂卡的定量读数大多需要借助定量分析仪器完成，定量分析仪器的使用，限制了免疫层析试剂卡在贫穷落后地区的普及以及大批量现场检测中的应用。市面曾出现过厂家声称的半定量免疫层析试剂卡，这种试剂卡一般是利用检测线发生变色示踪反应，采用人眼比色的方式判读显色强度以确定待测目标物在样品中的含量，这种半定量方式对浓度区间的划分有限，使得免疫层析试剂卡的适用浓度范围有限，另外，人眼比色受使用者的主观意识影响大，从而使得上述半定量方式存在很大的误差，而不同的显色反应相互之间可能会存在干扰，由此难以在同一个试剂卡上实现不同待测目标物的准确检测，基于上述原因，目前市面上的免疫层析试剂卡依然难以满足市场的需求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种免疫层析半定量检测方法及适用其的免疫层析半定量试剂卡，以提高免疫层析试剂卡进行现场半定量检测的准确性和灵活适用性。

根据本发明的一个方面，提供一种免疫层析半定量检测方法，包括以下步骤：S1.使被检液中的待测目标物与标记抗体结合，形成抗原-标记抗体对；S2.使抗原-标记抗体对与在层析膜上发生侧向层析，层析膜上设置有n条检测线，n＞1，检测线的表面包被有用于与待测目标物结合的特异性抗体，检测线的显色浓度沿层析方向递增；S3.有m条检测线显色，依据检测线的显色情况判断待测目标物的浓度c：若m＝0，以第1条检测线的显色浓度值为D

优选地，标记抗体包括了分别靶向不同待测目标物的多种第一抗体，标记不同第一抗体的示踪粒子的示踪信号互不串扰；特异性抗体包括了分别靶向不同待测目标物的多种第二抗体。通过引入靶向不同待测目标物的多种第一抗体和多种第二抗体，可以同时实现了对多种待测目标物的多联检测，提高了检测效率。

优选地，示踪信号包括显色信号和/或可见光信号。显色信号和可见光信号都能够被肉眼识别，基于此，可以使利用免疫层析试剂卡的定量检测脱离对定量分析仪器的依赖，读数便捷，有利于免疫层析试剂卡在实时检测中的推广应用。

优选地，示踪粒子包括可见光发光粒子，示踪信号包括由可见光发光粒子发出的可见光信号，可见光发光粒子的激发光谱互不重叠。由此，能够保证在不同的激发光照射下，最多只能有一种发光示踪粒子会显现出示踪光信号，排除了与其不同的发光示踪粒子发光而对其的发光效果产生的干涉效果，提高了检测的准确性。

优选地，可见光发光粒子的发射光谱互不重叠。由此，能够保证在不同的激发光照射下，最多只能有一种发光示踪粒子会显现出示踪光信号，排除了与其不同的发光示踪粒子发光而对其的发光效果产生的干涉效果，提高了检测的准确性。

优选地，还包括使被检液流经标记抗原的步骤；沿层析方向上，依次设置检测线和质控线，质控线的表面包被有用于与标记抗原结合的多克隆抗体；免疫层析半定量检测方法还包括S4：若质控线不显色，作出检测无效的判断；若质控线显色，作出检测有效的判断。

根据本发明的另一个方面，提供一种适用于上述免疫层析半定量检测方法的免疫层析半定量试剂卡，该试剂卡包括试纸条，试纸条包括固相载体和在固相载体的表面沿层析方向首尾相接的样品垫、标记物结合垫、反应垫和吸水垫；反应垫上设有检测区和质控区，检测区包括多条检测线，待测目标物在不同检测线上的检测浓度限沿层析方向依次增大，质控区设有质控线，质控线包被有多克隆抗体；标记物结合垫上含有标记抗体。

优选地，标记抗体包括分别靶向不同待测目标物的多种第一抗体，第一抗体被示踪粒子标记，标记不同第一抗体的示踪粒子的示踪信号互不串扰；每条检测线上包被的特异性抗体皆包括有分别靶向不同待测目标物的多种第二抗体，各种待测目标物在不同检测线上的检测浓度限沿层析方向依次增大。

本方案以示踪信号互不串扰的示踪粒子区分不同的待测目标物，从而使得不同待测目标物的检测结果互不干扰、互不重叠、互不交叉，不同的待测目标物在同一条检测线上都具有与其一一对应的示踪判断依据，能够实现多种不同待测目标物的多联检测，进一步地，通过设置多条对应不同待测目标物都有依次递增显色浓度的检测线，可以对不同的待测目标物实现定量检测。利用本发明提供的免疫层析半定量试剂卡可以对多种不同的待测目标物实现定量检测，具有较大的灵活适用性，无需为了检测不同的待测物而配置大量的样品，简化了样品处理的工序，大大提高了定量检测的检测效率。

优选地，示踪粒子包括显色粒子和/或可见光发光粒子。

优选地，在反应垫上，沿层析方向依次设置检测区、质控区。

附图说明

图1为本发明提供的免疫层析半定量试剂卡中含有的试纸条的结构示意图；

附图标记为：1固相载体、2样品垫、3标记物结合垫、4反应垫、5吸水垫、6检测区、7质控区。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明提供的技术方案中的技术特征作进一步清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

本实施例提供一种免疫层析半定量试剂卡，该试剂卡包括试纸条，试纸条的结构如图1所示，该试纸条包括固相载体1和在固相载体1的表面沿层析方向首尾相接的样品垫2、标记物结合垫3、反应垫4和吸水垫5；反应垫上设有检测区6和质控区7，检测区6设有多条检测线(T

在本实施例中，每条检测线上皆包被有靶向待测目标物的第二抗体，各种待测目标物在不同检测线上的检测浓度限沿层析方向依次增大，其中，检测线T

在本实施例中，固相载体1为PVC底板，样品垫2为玻璃纤维素膜，标记物结合垫3为玻璃纤维素膜，反应垫4为硝酸纤维素膜(NC膜)，吸水垫5为玻璃纤维素膜。

其中，多条检测线(T

需要说明的是，第一抗体和第二抗体均为靶向待测目标物的单克隆抗体，待测目标物样本中含有的待测目标物通过与第一抗体、第二抗体特异性结合，进而形成双抗体夹心结构。由于本实施例提供的多联检免疫层析半定量试剂卡的标记物结合垫3上包被有分别靶向不同待测目标物的多种第一抗体，不同的所述第一抗体被不同的示踪粒子标记，不同的示踪粒子的示踪信号互不串扰。

本发明提供的多联检免疫层析半定量试剂卡的判读方式如下：

1.质控线C不显色，则说明试剂卡失效，本此检测结果无效，需要重新进行检测。

2.质控线显色，则说明检测结果有效，进一步依据检测线的显色结果进行分析：

(1)没有检测线显色，作出待测目标物的浓度c＜C

(2)若存在显色的检测线：

a.未显色的检测线对应的显色浓度值高于显色的检测线对应的显色浓度值，仅检测线T

b.检测区内的所有检测线共n条全部显色，则作出C

c.未显色的检测线对应的显色浓度值低于显色的检测线对应的显色浓度值，仅检测线T

实施例2

本实施例以实施例1提供的免疫层析半定量试剂卡为基础，实现对人心肌肌钙蛋白I(CTnI)的半定量检测。参照图1，本实施例的免疫层析半定量试剂卡的标记物结合垫3上包被有胶体金标记的鼠抗人CTnI抗体Ⅰ和胶体金标记的鸡IgY，以胶体金标记的鼠抗人CTnI抗体Ⅰ对应实施例1提供的免疫层析半定量试剂卡中包被在结合垫3上的第一抗体(胶体金标记的鼠抗人CTnI抗体Ⅰ为特异性靶向CTnI的单克隆抗体)，沿层析方向，检测区6上依次划有4条检测线(T

在质控线C显色的情况下：

1、检测线均不显色，则c＜C

2、仅检测线T

3、检测线T

4、检测线T

5、检测线T

6、检测线T

7、检测线T

8、检测线T

实施例3

本实施例以实施例1提供的免疫层析半定量试剂卡为基础，实现对人心肌肌钙蛋白I(CTnI)和人D-二聚体的多联检半定量检测。参照图1，本实施例的半定量试剂卡的标记物结合垫3上包被有胶体金标记的鼠抗人CTnI单克隆抗体Ⅰ、铕胶乳微球标记的鼠抗人D-二聚体抗体Ⅰ和胶体金标记的鸡IgY，以胶体金标记的鼠抗人CTnI抗体Ⅰ、铕胶乳微球标记的鼠抗人D-二聚体抗体Ⅰ对应实施例1提供的免疫层析半定量试剂卡中包被在结合垫3上的两种不同的第一抗体(胶体金标记的鼠抗人CTnI抗体Ⅰ为特异性靶向CTnI的单克隆抗体，铕胶乳微球标记的鼠抗人D-二聚体抗体Ⅰ为特异性靶向人D-二聚体的单克隆抗体)，沿层析方向，检测区6上依次划有4条检测线(T

检测线T

检测线T

检测线T

检测线T

C

C

样品中CTnI的浓度为c

在日光灯照射下，若质控线C显色，则继续在日光灯照射下依照下列方式对CTnI进行半定量检测：

1、检测线均不显色，则c

2、仅检测线T

3、检测线T

4、检测线T

5、检测线T

6、检测线T

7、检测线T

8、检测线T

在日光灯照射下，若质控线C显色，则在紫外灯的照射下依照下列方式对鼠抗人D-二聚体进行半定量检测：

1、检测线均不显色，则c

2、仅检测线T

3、检测线T

4、检测线T

5、检测线T

6、检测线T

7、检测线T

8、检测线T

本实施例提供的免疫层析半定量试剂卡利用具有示踪信号互不重叠、互不交叉的示踪粒子标记特异性靶向不同待测目标物的单克隆抗体，并利用上述单克隆抗体与待测目标物构建夹心抗体结合物，使得不同的待测目标物在同一条检测线上都具有与其一一对应的示踪判断依据，能够实现多种不同待测目标物的多联检测，进一步地，通过设置多条对应不同待测目标物都有依次递增显色浓度的检测线，可以对不同的待测目标物实现多联检半定量检测。

在其他的具体实施例中，若有第三种待测目标物存在，可以通过引入第三种示踪粒子来实现肉眼半定量检测，如通过引入能够在其他特殊条件下(如蓝光照射)发出其他信号(如发出绿光)的示踪粒子，也可实现第三种待测目标物的肉眼半定量检测，以此类推。

以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照上述实施例对本发明进行了详细的说明，所属领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，但这些修改或替换均在本发明的保护范围之内。