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一种大肠杆菌表达蛋白Cry5B的制备及抗大熊猫蛔虫活性

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本申请实施例公开了一种大肠杆菌表达蛋白Cry5B的制备及抗大熊猫蛔虫活性，用于测定大肠杆菌异源表达重组Cry5B蛋白对大熊猫蛔虫的杀灭活性。本申请实施例方法包括：运用在线工具GENSCAN获取Bt Cry5B基因完整开放阅读框序列，分别在序列5’和3’端加入BamH I和Hind III酶切位点及其保护性碱基，得到嵌合序列；合成嵌合序列得到合成序列；将合成序列插入pMD19‑T克隆质粒进行TA克隆和测序分析，得到的克隆质粒用双酶切后连入pET‑32a(+)原核表达载体，得到pET‑32a‑Cry5B重组质粒；将pET‑32a‑Cry5B重组质粒转入原核表达菌DE3进行表达，得到重组Cry5B蛋白；重组Cry5B蛋白亲和层析后，得到纯化的重组Cry5B蛋白；将纯化的重组Cry5B蛋白进行倍比稀释，评价不同浓度重组Cry5B蛋白对大熊猫蛔虫成虫和L4期幼虫的杀灭活性。

著录项

公开/公告号CN115057915A

专利类型发明专利
公开/公告日2022-09-16

原文格式PDF
申请/专利权人四川农业大学;成都大熊猫繁育研究基地;
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申请/专利号CN202111630693.9
发明设计人谢跃;黄文俊;
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申请日2021-12-28
分类号C07K14/325;C07K1/22;C12N15/32;C12N15/70;C12N15/66;A61K38/16;A61P33/10;
代理机构深圳腾文知识产权代理有限公司;
代理人刘洵
地址 610000 四川省成都市惠民路211号四川农业大学
入库时间 2023-06-19 16:49:13

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2022-09-16

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1. 一种抗大肠杆菌噬菌体表达的内溶酶和穿孔素组合物及其制备方法和应用 [P] . 中国专利： CN112301021A . 2021-02-02
2. 大肠杆菌表达制备具诱骨活性的人骨形成蛋白-3 [P] . 中国专利： CN1165189A . 1997-11-19
3. Preparation of isolated protein, substantially pure or recombinant, isolated trt protein, substantially pure or recombinant isolated trt protein, substantially pure or recombinant, isolated trt protein or a variant thereof, or a fragment, polynucleotide, synthetic, substantially pure or recombinant, isolated nucleic acid, encoding a trt protein, expression vector, transfected cell, non-human animal, or its progeny, transgenic non-human animal, antibody or its binding fragment, antibody, specifically immunoreactive under immunologically reactive conditions, for a trt protein or its immunogenic fragment, processes of determining whether a compound or treatment is a modulator of a trt activity or expression, of determining whether a test compound is a modulator of a trt activity, of preparing recombinant telomerase, to detect a trt gene product in a sample, to detect the presence of d and at least one telomerase positive human cell in a biological sample comprising human cells, to diagnos [P] . BR9711844A . 2000-01-18

机译：分离的蛋白质，基本上纯的或重组的分离的trt蛋白，基本上纯的或重组的分离的trt蛋白，基本上纯的或重组的分离的trt蛋白或其变体或片段，多核苷酸，合成的，基本上纯的或重组的分离的核酸的制备编码trt蛋白的酸，表达载体，转染的细胞，非人类动物或其后代，转基因非人类动物，抗体或其结合片段，抗体，在免疫反应条件下对trt蛋白或其免疫原具有特异性片段，确定化合物或处理是否是trt活性或表达的调节剂，确定测试化合物是否是trt活性的调节剂，制备重组端粒酶以检测样品中trt基因产物的过程，检测包含人细胞的生物样品中d和至少一种端粒酶阳性人细胞的存在，以进行诊断
4. A process for preparing a biologically active, post-translationally modified protein hormone composed of several subunits, eukaryotic cell transfected with one or more expression vectors, and are able to produce such a hormone expression vector comprising heterologous DNA coding for the subunits of the hormone, a set of expression vectors, wherein each vector inclu [P] . DK171489B1 . 1996-11-25

机译：一种制备生物活性的，翻译后修饰的蛋白激素的方法，该蛋白激素由几个亚基组成，用一种或多种表达载体转染的真核细胞能够产生包含编码该激素亚基的异源DNA的激素表达载体，一组表达载体，其中每个载体包括
5. Process for preparing a biologically active, post- translationally modified protein hormone which is composed of several subunits, a eucaryotic cell which is transfected with one or more expression vectors and is able to produce such a hormone, and expression vector which comprises heterologous DNA which encodes the subunits of the hormone, a set of expression vectors in which each vector comprises heterologous DNA which encodes a different one of the subunits of the hormone, and a process for producing a pharmacetuial preparation. [P] . DK171489A . 1989-10-12

机译：制备由数个亚基组成的具有生物活性的翻译后修饰的蛋白激素的方法，用一种或多种表达载体转染并能够产生这种激素的真核细胞，以及包含编码下述蛋白的异源DNA的表达载体激素亚基，一组表达载体，其中每个载体包含编码该激素亚基的不同一个的异源DNA，以及制备药物制剂的方法。

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