调控作物对高光适应性响应的基因HIDE1及其编码蛋白与应用

技术领域

本发明属于植物基因工程领域。具体而言，本发明涉及一种调控作物对高光适应性响应的基因HIDE1(

背景技术

据预测，世界人口以1.4％的速率逐年增加，将在2050年超过90亿，急速增长的人口为全球粮食安全的保障带来严峻的挑战(Crist et al.,2017)，作物产量必须提升50％才能满足日益增长的需求(Fischer and Edmeades,2010；Long et al.,2015；Ray et al.,2013)。如何持续的提高作物产量，是保障粮食安全的首要任务。

高光效育种一直是吸引和困扰基础科学家和育种家的重要科学问题，目前，科学家将高光效育种的主要技术路线分为以下三个方面：1)提高吸收光能、传递光能和转化光能的效率。主要通过提高捕光天线蛋白(Light-harvesting antenna)的捕光范围，提高光系统之间的电子传递效率，增强ATP和NADPH之间的转化效率。2)提高光能的利用效率。主要通过降低光抑制对光系统II(PSII)活性的损伤，增强光保护，快速松驰非光化学淬灭造成的能量损耗。3)提高光合碳同化效率。主要通过优化RuBisCO(Ribulose 1,5BisphosphateCarboxylase/Oxygenase)酶的羧化活性，引进新的光呼吸通路，减少碳损耗(Zhang etal.,2017)。这三条技术路线，相互依赖，共同调控光能的高效利用。

光合作用是作物产量形成的物质基础，但是当天线系统捕获的光能超过光合系统所能利用的量时，过剩的光能会对光合器官尤其是PSII带来损伤，引起光合效率的降低，导致光抑制的发生，这种过剩的光强相对于生长光(Growth light)被称为高光(High light)(Aro et al.,1993；Powles,1984)。光抑制严重限制作物的实际光能利用效率，造成其生物量的减少。如何提高光下PSII的稳定性，减少光抑制的损伤，进而增强植物的光合效率，生物量和产量是长期困扰这一领域科学家的基础性科学问题和挑战性难题。近期的研究当中利用合成生物学增加核源D1合成途径，显著提高了植物的高温耐受能力，光合效率以及生物量(Chen et al.,2020)。目前围绕PSII高光修复已经鉴定到了一系列的辅助因子，但是人们对于PSII的质量控制网络认识仍很局限，尤其是通过提高PSII稳定性以达到增产目的的研究较少。因此，通过筛选高光适应因子，提高PSII的稳定性，培育高光能利用效率作物，对保障全球农业可持续发展和粮食安全具有重要意义。

发明内容

本发明的发明人利用甲基磺酸乙酯(EMS)诱变和遗传筛选，分离并鉴定到一个高光适应生长缺陷的水稻突变体hide1(high-light defective growth1)。在此基础上，克隆了水稻高光适应的关键基因HIDE1，明确了HIDE1参与叶绿体PSII的稳态维持，并且该基因的表达量与水稻的光合利用效率及产量正相关。同时，通过对突变体的表型分析以及遗传互补实验，证明了该基因的功能。此外，又在经济作物番茄和生菜中证明该基因功能保守，其高表达能够显著提高作物的光合利用效率和产量。

因此，本发明的一个目的是鉴定并提供一种调控作物高光适应性响应的基因HIDE1及其编码蛋白。本发明的另一个目的是确定该调控作物高光适应性响应的基因在培育具有高光能利用效率和高产量作物方面的应用。本发明的还一个目的是提供一种培育高光能利用效率和高产量的作物的方法。

在第一方面，本发明人鉴定了高光适应性响应调控基因HIDE1，所述基因编码SEQID No.2所示的蛋白，或编码由SEQ ID No.2所示的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加且与SEQ ID No.2所示的蛋白质具有相同功能的由SEQ ID No.2衍生的蛋白质。

其中SEQ ID No.2所示的蛋白质由271个氨基酸组成。

所述调控作物对高光适应性的基因HIDE1为分离的核苷酸序列。在优选的实施方案中，所述调控作物对高环光强适应性的基因HIDE1为SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。并且，本领域技术人员应该理解，在较广的意义上，所述调控作物对高光适应性的基因HIDE1可以为与SEQ ID No.1所示的核苷酸序列具有90％以上、优选99％以上的同源性，且编码具有相同功能的蛋白质的核苷酸序列。

其中SEQ ID No.1所示的核苷酸序列由4212个碱基组成。

在第二方面，本发明提供了由第一方面所述的调控作物高光适应性的基因HIDE1编码的蛋白质，所述蛋白质为下述(a)或(b)：

(a)SEQ ID No.2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(b)将SEQ ID No.2所示的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸的取代、缺失或添加且与SEQ ID No.2所示的蛋白质具有相同功能的由SEQ ID No.2衍生的蛋白质。

在一个优选的实施方案中，由第一方面所述的调控作物对高光适应性的基因HIDE1编码的蛋白质是一种分离的蛋白质，其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。

在第三方面，本发明提供包含第一方面所述的调控作物高光适应性的基因HIDE1的重组载体。

优选地，所述重组载体包含的外源核苷酸片段编码SEQ ID No.2所示的氨基酸序列。更优选地，所述重组载体包含的外源核苷酸片段如SEQ ID No.1所示。

所述重组载体中还可以包含增强子，以增加插入的核苷酸片段的表达。优选地，所述重组载体为重组表达载体。所述增强子包括翻译增强子或转录增强子，这些增强子区域可以是ATG起始密码子或邻接区域起始密码子等，但必须与编码序列的阅读框相同，以保证整个序列的正确翻译。所述翻译控制信号和起始密码子的来源是广泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻译起始区域可以来自转录起始区域或结构基因。

在一个实施方案中，用于构建所述重组载体的质粒可以选自，不限于pCAMBIA2300，BGV010和BGV008。

包含所述重组载体的宿主细胞也在本发明的范围内。可以通过将所述重组载体转化或转染到细胞中而得到包含所述重组载体的宿主细胞，以进一步用于扩增表达载体、表达所述蛋白或得到转基因植株等应用。用于转化或转染的细胞可以选自，但不限于细菌细胞，例如大肠杆菌细胞或农杆菌细胞，真菌细胞，例如酵母细胞，或植物细胞，例如水稻细胞，等等。

在第四方面，本发明提供一种培育高光能利用效率和高产量的作物的方法，所述方法包括在作物植株中过表达调控作物高光适应性的基因HIDE1。基因HIDE1的过表达可以通过下述实现：用HIDE1基因或包含HIDE1基因的重组载体或宿主细胞转化或转染作物的细胞或组织，并将转化或转染作物的细胞或组织培育成植株。

HIDE1基因的转化或转染可以通过农杆菌介导法或基因枪法进行。

本领域的研究人员应该明确，利用任何一种引导外源基因在植物中表达的载体，将本发明提供的HIDE1基因导入植物细胞，或者对HIDE1基因的前导序列进行改造从而改变HIDE1的表达量，比如插入增强元件，可获得对高光适应性响应改变的细胞系及植株。

本发明的HIDE1基因在构建到植物表达载体中时，在其转录起始核苷酸前可以加上适当的增强启动子，例如35S。为了便于对转基因植物细胞或植物进行鉴定及筛选，可以对所使用的载体进行加工，如加入具有抗性的抗生素标记物(比如潮霉素基因)。携带有本发明HIDE1基因的表达载体可以通过使用农杆菌侵染转化植物。

本发明对培育具有高光适应性响应的高光效高产量作物品种提供了理论和材料基础。当本发明的基因被用于改良作物对高光的适应性响应时，可采用以下方法：(1)将本发明的HIDE1基因克隆到植物转化载体中；(2)将所构建的植物转化载体转化可再生的作物组织或器官并使本发明的基因在转化组织中表达；(3)将被转化的组织或器官培养成植株。

依据第四方面的方法，可以培育出能够在高光下正常响应和生长的作物品种，协同提高光能利用效率和作物产量。

综上所述，本发明提供以下实施方案：

1.调控作物对高光适应性响应的蛋白，所述蛋白为SEQ ID No.2所示的蛋白，或由SEQ ID No.2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸的插入、缺失或替换且与SEQ IDNo.2所示的蛋白具有相同功能的由SEQ ID No.2衍生的蛋白，其中，所述作物包括粮食作物和经济作物，优选为水稻、小麦、番茄或生菜。

2.多核苷酸序列，其编码项目1所述的调控作物对高光适应性响应的蛋白。

3.根据项目2所述的多核苷酸序列，其为HIDE1基因，所述基因的CDS如SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:5所示。

4.载体，其中，所述载体包含项目2或3所述的多核苷酸序列，其中所述载体为植物表达载体，例如pCAMBIA2300，BGV010或BGV008。

5.项目4所述的载体，其中，所述载体还包含增强启动子，例如35S。

6.包含项目2或3所述的多核苷酸序列或项目4所述的载体的宿主细胞，所述宿主细胞选自细菌、真菌或植物细胞，优选为大肠杆菌(Escherichia coli)细胞、农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)细胞或植物细胞。

7.项目1所述调控作物对高光适应性响应的蛋白，项目2或3所述的多核苷酸序列在培育光能利用效率和产量提高的作物中的应用。

8.一种培育光能利用效率和产量提高的转基因作物的方法，所述方法包括用项目2或3所述的多核苷酸序列或项目4所述的载体或项目5所述的宿主细胞转化所述目的作物的细胞或组织得到转基因作物，与所述目的作物相比，所述转基因作物的光能利用效率和产量提高。

9.项目8所述的方法，其中，所述转化通过农杆菌介导法或基因枪法进行。

10.项目8或9所述的方法，其中，所述作物包括粮食作物和经济作物，优选为水稻、小麦、番茄或生菜。

附图说明

图1.ZH11和oshide1的生长状况及其光合能力的测定。oshide1是一个高光适应生长缺陷的突变体。其中，(a)为ZH11和oshide1分别种植于北京和海南的成熟植株的表型(上图)及其株高和分蘖统计分析(下图)。(b)为ZH11和oshide1在生长光(GL,400μmol photonsm

图2.OsHIDE1的高精度连锁图谱的构建。图中水平线段代表染色体，垂直线段代表分子标记。RM331和P1是两个细菌人工染色体文库。图中显示了OsHIDE1候选基因的基因结构，黑色矩形框代表该基因的外显子，之间的黑色线段代表内含子，白色矩形框代表该基因上游和下游的非编码区。图底部显示了OsHIDE1的三个等位突变形式，其中oshide1发生了碱基的替换(A突变为T)，导致第156位的精氨酸突变成终止密码子；oshide

图3.OsHIDE1基因功能互补及过表达载体。连入野生型OsHIDE1基因组DNA序列的pCAMBIA2300互补载体(Com-1)结构示意图(上图)；连入OsHIDE1的互补DNA序列和HA/FLAG双标签的pCAMBIA2300过表达载体(Com-2)结构示意图(下图)。

图4.OsHIDE1基因互补和等位水稻植株与野生型比较。陵水种植的ZH11，oshide1，oshide1

图5.ZH11，oshide1，oshide1

图6.ZH11，oshide1，OE-1和OE-2的生长状况、产量和光合效率。其中，ZH11，oshide1，过表达植株OE-1和过表达植株OE-2在陵水生长的植株表型(a)及主穗表型(b)，图(a)和图(b)中的标尺，20cm。(c)为ZH11，oshide1和过表达植株的农艺性状分析。分别是株高统计；分蘖数统计；主穗粒数统计；结实率统计；百粒重统计；单株产量统计。n＝30株。利用双尾检验进行显著性差异分析。***，p<0.001；**，p<0.01；*，p<0.05；ns，无显著差异。(d)为ZH11，oshide1和过表达植株OE-1的叶绿素荧光参数测定。

图7.水稻、生菜及小汤姆番茄HIDE1过表达载体的构建。其中，(a)为连入OsHIDE11CDS序列的BGV010过表达载体结构示意图(上图)；连入LsHIDE1 CDS序列的BGV010过表达载体结构示意图(下图)。(b)为连入OsHIDE1 CDS序列的BGV008过表达载体结构示意图(上)；连入SlHIDE1CDS序列的BGV008过表达载体结构示意图(下图)。

图8.过表达HIDE1的番茄(a)及过表达HIDE1的生菜(b)的表型与产量统计。在图8(c)中，过表达HIDE1显著提高小汤姆番茄的单株果实数量，单株果实重量和番茄红素含量，过表达HIDE1显著提高京研意大利生菜的地上部分鲜重，过表达HIDE1可以显著提高番茄和生菜的净光合速率。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，并参照附图，对本发明作进一步的详细说明。

下述实施例中的实验方法，如果没有特殊说明，均为常规实验方法。实验所用到的试剂、试剂盒、实验仪器，如无特殊说明，均可在生物仪器和试剂公司购买到。

实施例1:水稻高光适应性响应控制基因的分离与遗传分析

本发明人利用北京夏季(5月份至10月份)及冬季海南陵水(12月份至次年4月份)的天然气候差异对粳稻品种ZH11(Oryza sativa L.japonica,购自中国农科院作物所)背景的EMS诱变突变体库(约120,000粒ZH11种子，0.8％浓度诱变)进行大田表型筛选，分别考察株高、分蘖数、穗粒数、结实率等农艺性状指标，筛选到的一个响应环境光强变化的矮秆少蘖叶黄突变体oshide1。具体而言，oshide1突变体与野生型ZH11相比较，当oshide1种植在较高光强条件下(陵水)，其株高明显降低，分蘖减至1至2个；当种植于较低光强时(北京)，株高和分蘖数没有明显变化(图1a)。

在严格控制温度条件下，于人工培养箱中设置不同的光强，进一步确认了oshide1的高光敏感表型(图1b)。

为了进一步确定oshide1的光合表现，本发明于旗叶期，对田间种植的材料进行光合能力的检测，结果表明oshide1的净光合效率，光系统II量子产量及光系统II电子传递速率显著降低(图1c)。因此，确定oshide1是一个高光适应生长缺陷的水稻突变体。

为了进一步挖掘水稻高光适应性响应的遗传调控基础，本发明将oshide1突变体与南京6号(Oryza sativa L.indica,购自中国农科院作物所)进行杂交获得F1，利用F1的自交后代构建F2分离群体并种植在冬季的陵水，并从中选取了330个突变体表型的样本，利用SSR和STS分子标记，将该基因定位在8号染色体长臂上的两个分子标记P3和P4之间，将其定位在八号染色体长臂的一段1.25Mb的区间内。为了进一步确定OsHIDE1的基因位点，本发明人结合基因组重测序结果，分析发现在此1.25Mb区间内，仅有5个纯合的SNP，其中两个在基因间，一个位于内含子，一个编码转座子，仅有一个位于外显子区域且编码功能蛋白。因此，本发明人将此SNP所在基因作为OsHIDE1的候选基因。OsHIDE1基因的CDS序列的466bp发生了碱基的置换(A突变为T)，导致第156位的精氨酸突变成终止密码子，造成了蛋白翻译的提前终止(图2)。

实施例2：HIDE1基因遗传互补及其调控水稻高光适应性响应功能验证

本发明人按常规分子生物学和遗传学操作方法(参照《植物基因工程》，王关林、方宏筠，科学出版社，2004年第2版经常规方法制备)，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术构建了oshide1的两个等位突变株系oshide1

同时本发明人以ZH11的DNA为模版，利用pCAMBIA2300载体骨架(购自CAMBIA公司)，构建了连入野生型OsHIDE1基因组DNA序列(SEQ ID No.1)的pCAMBIA2300互补载体(Com-1)和连入水稻HIDE1基因的CDS核苷酸序列(SEQ ID No.5)和HA/FLAG双标签的pCAMBIA2300互补载体(Com-2)；连入OsHIDE1的互补DNA序列(SEQ ID No.5)，农杆菌介导法转化oshide1突变体(参照《植物基因工程》，王关林、方宏筠，科学出版社，2004年第2版经常规方法制备)，获得阳性转基因植株后，发明人将阳性转基因植株种植在陵水和北京条件下观察转基因植株的表型。结果显示，阳性转基因互补株系的株高和分蘖数能恢复其对光强的响应(图4a，b)，同时光合表型结果显示阳性转基因互补株系也能恢复对光强度正常响应(图5)。

实施例3:增加HIDE1表达水平能提高水稻产量和光能利用效率

本发明人按常规分子生物学和遗传学操作方法(此实施例的实验方法和载体与实施例2相同，区别在于转化背景实施例2为突变体，例3为野生型)，以水稻HIDE1基因的CDS序列(SEQ ID No.5)为模版，构建了连入OsHIDE1的CDS序列和HA/FLAG双标签的pCAMBIA2300载体，农杆菌介导法转入野生型ZH11，经抗性检测和两代自交，筛选获得阳性纯合转基因植株OE-1和OE-2后，发明人在陵水和北京两地分别种植ZH11和过表达植株(图6a)。比较发现，过量表达HIDE1能在各个光强条件下略微增加水稻株高，但能显著提高分蘖数、穗粒数、结实率、百粒重和单株产量(图6b和图6c)。同时光合表型也显示，增加HIDE1表达水平能显著提高水稻的净光合效率Pn，光系统二量子产量Y(II)和光系统二电子传递速率(图6d)。

实施例4:增加HIDE1表达水平能提高番茄和生菜产量

本发明人按常规分子生物学和遗传学操作方法(此实施例的实验方法与实施例3基本相同，区别在于基因和载体)，基因序列来源于Phytozome并由小汤姆和京研意大利生菜CDS扩增，对应序列表中的SEQ ID No.3和SEQ ID No.4。具体地，以水稻品种ZH11、番茄品种小汤姆(SEQ ID No.3)和生菜品种京研意大利生菜(SEQ ID No.4)的DNA为模版，分别将OsHIDE1和SlHIDE1构入BGV010(购自百格公司)过表达载体，分别将OsHIDE1和LsHIDE1构入BGV008(购自百格公司)过表达载体(图7)，农杆菌介导法转入番茄品种小汤姆和生菜品种京研意大利生菜，获得阳性纯合转基因植株后，发明人再分别过表达植株。此处同时构建OsHIDE1过表达载体的目的是为了验证该基因功能的保守性。比较结果发现，过量表达HIDE1能显著增加番茄的单株果实数量、重量以及果实的番茄红素和净光合速率，显著提高生菜的地上部分鲜重和净光合速率(图8)。

参考文献：

张立新,卢从明,彭连伟,马为民,钱万强(2017).利用合成生物学原理提高光合作用效率的研究进展.生物工程学报,33,486-493

Aro,E.M.,McCaffery,S.,and Anderson,J.M.(1993).Photoinhibition and D1protein degradation in Peas acclimated to different growth irradiances.PlantPhysiol.103,835-843.

Chen,J.H.,Chen,S.T.,He,N.Y.,Wang,Q.L.,Zhao,Y.,Gao,W.,and Guo,F.Q.(2020).Nuclear-encoded synthesis of the D1 subunit of photosystemII increasesphotosynthetic efficiency and crop yield.Nat.Plants 6,570-580.

Crist,E.,Mora,C.,and Engelman,R.(2017).The interaction of humanpopulation,food production,and biodiversity protection.Science 356,260-264.

Fischer,R.A.,and Edmeades,G.O.(2010).Breeding and cereal yieldprogress.50,S85-S98.

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Powles,S.B.(1984).Photoinhibition of photosynthesis induced byvisible light.Annu.Rev.Plant Biol.35,15-44.

Ray,D.K.,Mueller,N.D.,West,P.C.,and Foley,J.A.(2013).Yield trends areinsufficient to double global crop production by 2050.PLoS One 8,e66428.

序列表：

SEQ ID No.1:水稻HIDE1基因的基因组核苷酸序列

GATTTCTCGCCTCCACTCGTTTGTGGGGGTGATCCAGTCGCGCGCTCCTCCTTCCACGCGCCAAAACCCCAGCCACCACCACCATCTCCCGTCCCGTTCCCACCAAAATCTCCCCCTCCGATTTCGCGCGGCTGCGGTGGTGGTGCGTGTGCTGCTGCCACTGACGTTGCGGCGGGAGAGCGCGATCGATGTCTGTGCAGTGCGCGGTCCGGCCGCTCGCGGCGCTCCCGGCGGCGGCGGGCACGTCGCGCTCGCGCCGCGTTGGCGGGGCGAGCCATGTCGCTGTTGCTGCCGTGCCGTCTTCGCCCCGCCGGCCGAGGCGCGCTGCCTCCGTCGCGCCGGTCAGGGCGGCCGAGTCGTCCCCGCCGGCCGCGGCGCCCGCGCCGCCGTCGTCCGGGGCCGCGGCCGGGAAGGCCGTCGTCCCCGACGAGGAGTTCACCCTCGCCAAGGTGAGCCACCGGGGGCGCGTTCTTTAATTCTTGCGGTAGCAGCAGCAGCAGCAGCGACAGCAGGTGTTGAATTGTAGCGGCGGCGACGAGTTTCTGACGGCGAATGGAATCTCACTTCATGCAGGTTTCGTTCGGTGTGATTGGGCTAGGTGTCGGTGGCACCCTCTTGTCGTAAGTTGGGATTGCACAATTGTGCTTGGCATTATTCAGAATGATGAAGTAGCTTGAAAGGCTTGATTTGGTGCGTTCTTGTGATTTCAGGTATGGATTCGGGGCGTATTTCAACCTGCTTCCTGGTTCGGAGTGGTCTGCACTTATGCTAACATATGGTTTTCCACTCACCATCATCGGCATGGCATTGAAGGCAAGAACTATCCCCCATGTGACATGTACAAGAGGAGAGGCAATGAGGCATATGACATGTTGAGACATATCAATTGTATTTGTTTAGATTGTTTGACCATACTGGTCAACTTAAGACCTTCCTCAGGAAGGTGCCTTTTGGCAATTAGCAGTCATTGGCCTTTCATTGAGTTTGCACCTTCATATTACATACTTGAAAATAACTCTGCAGCAATAGAATGCAGTTTACTGTGTTGGAGTTTCAGATGAGCAGCTGTCCTTAGTTTGGAGTTTAGGTTGAAGGTTGTCAGCTTCTTTGTTGCAGTGTGCACTGATTCTTAAATTTTTCTACATGCAGTATGCTGAACTGAAACCGGTGCCTTGCACAACCTACGCCGATGCTTTTGCTCTAAGAGAAAAGTGTGCTACCCCTATCCTCAATCAGGTACTATTCAATTTCCATTATCTAGGACATATGCTCCACTTCCACTGCTCAAATTTAACTATTTATTCATGGTGTACTTGAGCTGTTTATAATCTGTTTTCTTCTTATTTGGAGAAAAATAAGGCTACATGATGAGTACAATCCTCTTAGTGGATTTCTTACCATTGGTGCCAGGGGGGATTTAAGTGTTGAAAATTGTAGGAAGAGGCGTGAGTAGACATTAGCGAATTTGTGGATTTTGGAAAGATAACACCGGCAATAGTATTGATCTTCCAGCTTTACTTACCTCTAGGTCAGGAGTGATGTTACACGTTACAGATACGGTGATGAGCAGCACCTGGATGAAGCACTGAAGAGGATCTTTCAATATGGTTTGGTAATTCCTTTTTTTGCCCTTTTTTACTAACTGGACATTGTTTTGGCTCATCTATTTTTTATCAATAATTCCATGTTCTGTTATTAGAAGTTTTGCAAGGCAAGAACTTCCTTGCTTTATCCTACTTATTGATCTGCCTTCCTTTTGCACAATCCAACTGACAGGGTGGTGGAATTCCAAGGCGTAGTGCACCTATTTTACAAAACATTCGGGAAGAAGTAAGTTCCCAATACATTTATTTTTTTCTGTGAAGTAGTCTTTCCAAAATATTGCATAATGTAAATCACACATATCATTTTCATAGTTTATATTTCATACTCGTTGGAAGAGTTTAATTACAAAATGGACCCCTCAAGTTTCACAAAAGGTTACTTTGGTCCATCAAGTTTAAAAGAAGCCACTTTAGACCCTGCTTGGGTGAGCTTCAGATTTATCTGAAGCTGATATCAAACAAACCCAACTAATCCTGTAAGGATGATTTACTTAACATGCCATCCAAGACCGGTCCAAATTGTTCACACAATATCTGCCGCATGTGAATTGGCATTTGGCACCTGTTACTTCAATGTGGACTGTAGGATGTTACTGAAACAATTCCTACAGTAACATCAAGCAAAGTTGATGATTCAAAATATTTGCCTGTAAAAGAATATAAATGGGCAAAGTAGCGATTTTTAATGGCCTAGACCCTTTTACTCTAACCAGACTACTAAAAGGATTAGTGCAGTGATTAGCATGTCAAATGTCAACTTGTTACATAATGGCCAATTTGTGGTGTTCTTGAACTATAGATACATGAAAAGGAGGCAGGAAATTTAAATATGAATATCATAAATATGTATTTTTCTTGTGGGAAATAATTCCTCATTGATGTTTCTGTGTCCACCATGCATCTAAAAATCCTGCATCCCTCCATTTCTAATGGAAGTTTTGTCCCAATCGATTGTATCATCATTAAAGTCATGACAGATGAACTCAAATGATATTAAGTCAAATTAATAGCAGATTTTTCAGCTAGCATCAAATGCTATTTCTAGATCTCCGTAGTTTTCCTTGGTCATTGTTTCCTTTGTTTAATGGCTTCAATTAGTACACTGTTAGCACTGATCTCAGGGCAAAGGCACAGCCAATGTTGGTAAGAGTGGTGCCAAAGATCCTTTGGCTTGATTTTATTTTTATTGAAATTATTGTCAACTTTTGTTCATTGGACAAGGTAGTACTAGGCCTTAGAGGGCTCGGCCCCTTCTTTTCTCTTCGAGACAAGCCTTAGGCCCTGTAGTTGATTCTACTTTACCCAGTTAATGAACATGGCCCAGTTATATGTTAATGTTTCCTAGTTGTTCTTCATCTGATATTCCTCAAGTGTAAATGATATAGCTTTTGGCTGAACTCATGATGAAGGAATTGCACAAAAATAATTCAGACAATCTTTGAAACTGTCCAAATGCCTTGTGGAGATTCCAATGGGTTATATTTGTTTATTGATATCTCCAGTTTTACCCCAAAAAACATCTTCGTGGGTTACAGAAAGAATGTCTTGTTCACTGGGTGCGATTCTTGGTTAAAGGACTCAGTAGTTTTCCCCTTGTAGGTAACTGATGATGGGAAGTACAGTTTAGTACTTGTATTTGAAGCCAAAGCATTGGAGATATCCGATTTTGAGAAGAGACAGGTGAATCCCCTCTCCTAATTTCTAAATATAATACAGCACGGCTTCCATTGTGGACTGAGATGCATGTGGTATGCCTTTGTGGTCAGATCTAGATACATGTACTAGTCTTAAGCTCTATACTAAACTAATCTCATGTTACAAATACATGAATTTTTAGCAGCTTTGGGTTGTGGAAAAGATGAGGTTCAAAAATTAGCAGTAGAAGAAAGTGTAACCCAAAACTTGATGCTCAAAAATGACAAAATTCTGTGCCTAGATAGCTCCCATAAACTATTTCTTTGATGTACTGTGTACTTGGGCGAGCTGTTCGAGAACAATACATACTGTCGTCATGCTTATGATCCAAAATAGAATTAAATATTAACATTACTGATTCCTTGCAAACATTTTTCCCACGCAGGCCAAATTCACATCCTTTTTTGGTCCTGGGATTAAGGCAGAAATTGGTGAGTTGTATTATTTTTTCTTTAGCTCCATTAGATTTTGAAGCTTGGTTTGTCTATATCATCCATTGTCAATTTATGTTTCTGATGATACAGGAAAAGGTGGTGATGATCTATATGAAGTTCGTCTTATCTCAGAAACTACTTAGGAAACACACAGGACTCGCAGTTTCCTTTTCTGCTAATATACCAGAAAAATGTTTTTTTCCCTTGTTCCACTAATTTGTGTATATGATGTTAGTATTCTCAGAGTTCTGCCATTATATGCATCATGGCTGCTTTTCTGTCTACTGGTTATAGTCTGTGTGACGGAGAAATAGCATTTTTCATGTGCTTTTGTGCACATGCACAAATGAAAATGTGGCTGTAATATGCATGTAAATTGACTGGATTCACAGAGTTCTCCATACGTAGTAAAATAGTAGCTGACATTATTTTGGAAATCTTGGAGCAGTAGAATTATCCTGGTTTCTTACATTCATAAA

SEQ ID No.2:水稻HIDE1基因编码的蛋白质的氨基酸序列

MSVQCAVRPLAALPAAAGTSRSRRVGGASHVAVAAVPSSPRRPRRAASVAPVRAAESSPPAAAPAPPSSGAAAGKAVVPDEEFTLAKVSFGVIGLGVGGTLLSYGFGAYFNLLPGSEWSALMLTYGFPLTIIGMALKYAELKPVPCTTYADAFALREKCATPILNQVRSDVTRYRYGDEQHLDEALKRIFQYGLGGGIPRRSAPILQNIREEVTDDGKYSLVLVFEAKALEISDFEKRQAKFTSFFGPGIKAEIGKGGDDLYEVRLISETT*

SEQ ID No.3:番茄HIDE1基因的CDS序列

ATGTCTGTGCAGTGCGCGGTCCGGCCGCTCGCGGCGCTCCCGGCGGCGGCGGGCACGTCGCGCTCGCGCCGCGTTGGCGGGGCGAGCCATGTCGCTGTTGCTGCCGTGCCGTCTTCGCCCCGCCGGCCGAGGCGCGCTGCCTCCGTCGCGCCGGTCAGGGCGGCCGAGTCGTCCCCGCCGGCCGCGGCGCCCGCGCCGCCGTCGTCCGGGGCCGCGGCCGGGAAGGCCGTCGTCCCCGACGAGGAGTTCACCCTCGCCAAGGTTTCGTTCGGTGTGATTGGGCTAGGTGTCGGTGGCACCCTCTTGTCGTATGGATTCGGGGCGTATTTCAACCTGCTTCCTGGTTCGGAGTGGTCTGCACTTATGCTAACATATGGTTTTCCACTCACCATCATCGGCATGGCATTGAAGTATGCTGAACTGAAACCGGTGCCTTGCACAACCTACGCCGATGCTTTTGCTCTAAGAGAAAAGTGTGCTACCCCTATCCTCAATCAGGTCAGGAGTGATGTTACACGTTACAGATACGGTGATGAGCAGCACCTGGATGAAGCACTGAAGAGGATCTTTCAATATGGTTTGGGTGGTGGAATTCCAAGGCGTAGTGCACCTATTTTACAAAACATTCGGGAAGAAGTAACTGATGATGGGAAGTACAGTTTAGTACTTGTATTTGAAGCCAAAGCATTGGAGATATCCGATTTTGAGAAGAGACAGGCCAAATTCACATCCTTTTTTGGTCCTGGGATTAAGGCAGAAATTGGAAAAGGTGGTGATGATCTATATGAAGTTCGTCTTATCTCAGAAACTACTTAG

SEQ ID No.4:生菜HIDE1基因的CDS序列

ATGGTGAAAACAGTAGCAGCCATGCGAGGAGCTGGAGGAACCCTTTTCTGTTCTCAGAGTTTCGCTGTCTTCAATAACACTCAAATTCATGCCCAAATTCGACCTTCATTACCTCTTACATTGCCACCACTTGTGCACAAATTGACCACTTTCAGTAATCAAGATTCAATTTTGGCGAAAACCCAGTATCGTCTTCGACTTAAGGTTGTTACTAAAGCTGCTGATTCGTCTCAGCCTACCTCTGCTATAACTTCATCCGGCAACGCTATTGTTCCCGATGAAGAGTTTTCACTTGCTAAGGTTTCTTTTGGAGTTATTGGACTTGGTCTTGGTGTTTCACTTCTCTCGTATGGTTTTGGGGCATATTTTAACATTCTTCCAGGTTCCGAGTGGTCTGCAATTATGTTGACATATGGTTTCCCACTTGCAATAATTGGCATGGCTCTTAAGTATGCAGAGCTCAAACCTGTGCCATGCCTGACATATGCAGATGCTGAACTACTAAGGGAAAAATGTGCCACTCCAGTCCTTAAGCAGGTTAGGAGCGATGTGATAAGATACCGTTATGGGGATGAGCAGCATTTGGATGAGGCATTGAAGCGTATTTTCCAATTTGGACTGGGTGGAGGAATACCACGTAGAAGTGCTCCAATCTTACAAAATATTCGAGAAGAAGTGACTGAGGATGGTAAATACTGTCTAGTGCTGGTATTTGAGGCAAAAGCTCTGCAGTTATCAGATTTCGAAAAAAGACAGGCAAAATTTACGTCTTTCTTTGGACCTGGAATATCATCTGAAATTGTAAAGGGAGAGAATGATCTGTATGAAGTACGGCTAATTTCCAACACAACATTGTAG

SEQ ID No.5:水稻HIDE1基因的CDS序列

ATGTCTGTGCAGTGCGCGGTCCGGCCGCTCGCGGCGCTCCCGGCGGCGGCGGGCACGTCGCGCTCGCGCCGCGTTGGCGGGGCGAGCCATGTCGCTGTTGCTGCCGTGCCGTCTTCGCCCCGCCGGCCGAGGCGCGCTGCCTCCGTCGCGCCGGTCAGGGCGGCCGAGTCGTCCCCGCCGGCCGCGGCGCCCGCGCCGCCGTCGTCCGGGGCCGCGGCCGGGAAGGCCGTCGTCCCCGACGAGGAGTTCACCCTCGCCAAGGTTTCGTTCGGTGTGATTGGGCTAGGTGTCGGTGGCACCCTCTTGTCGTATGGATTCGGGGCGTATTTCAACCTGCTTCCTGGTTCGGAGTGGTCTGCACTTATGCTAACATATGGTTTTCCACTCACCATCATCGGCATGGCATTGAAGTATGCTGAACTGAAACCGGTGCCTTGCACAACCTACGCCGATGCTTTTGCTCTAAGAGAAAAGTGTGCTACCCCTATCCTCAATCAGGTCAGGAGTGATGTTACACGTTACAGATACGGTGATGAGCAGCACCTGGATGAAGCACTGAAGAGGATCTTTCAATATGGTTTGGGTGGTGGAATTCCAAGGCGTAGTGCACCTATTTTACAAAACATTCGGGAAGAAGTAACTGATGATGGGAAGTACAGTTTAGTACTTGTATTTGAAGCCAAAGCATTGGAGATATCCGATTTTGAGAAGAGACAGGCCAAATTCACATCCTTTTTTGGTCCTGGGATTAAGGCAGAAATTGGAAAAGGTGGTGATGATCTATATGAAGTTCGTCTTATCTCAGAAACTACTTAG

以上所述的具体实施例，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施例而已，并不用于限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。