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鲤浮肿病毒和锦鲤疱疹病毒双重实时荧光定量检测方法

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本发明公开了一种鲤浮肿病毒和锦鲤疱疹病毒双重实时荧光定量PCR检测方法，该方法包括以下步骤：第一、合成引物与TaqMan探针：根据CEV P4a基因序列，对引物序列进行优化，上游引物第1个碱基改为简并碱基W，下游引物第1个碱基改为简并碱基R；根据KHV ORF7基因保守序列，设计1对特异性引物和1条TaqMan探针；分别使用FAM和VIC作为探针报告基团，BHQ1作为探针淬灭基团；第二、确定反应体系及条件：采用20μL反应体系，2×Probe PCR Master Mix 10μL，上、下游引物和探针引物终浓度在0.2μmol/L～0.8μmol/L之间，QN ROX参考染料0.1μL，模板2.5μL，DEPC水补足20μL；反应程序为：95℃预变性2min，1个循环；95℃5s，50～60℃退火31s，40个循环。

著录项

公开/公告号CN109897918B

专利类型发明专利
公开/公告日2022-06-07

原文格式PDF
申请/专利权人北京市水产技术推广站;
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申请/专利号CN201910275066.4
发明设计人张文;徐立蒲;吕晓楠;
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申请日2019-04-08
分类号C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;
代理机构天津合正知识产权代理有限公司;
代理人吕琦
地址 102600 北京市大兴区北京经济开发区科创十四街99号1幢
入库时间 2022-08-23 13:48:22

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