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利用DDRT-PCR技术筛选新疆超细型细毛羊毛用性状相关基因

摘要

本实验以新疆超细型细毛羊(新吉细毛羊)为实验对象,从184只2岁新疆超细型细毛羊中选取了纤维直径极粗和极细的细毛羊各6只,取其皮肤组织各组成极粗和极细的RNA池,应用mRNA差异显示技术筛选不同纤维细度的绵羊肩部皮肤的差异表达基因。实验选用3种锚定引物,8种随机引物,经过24对引物组合对RNA池进行差异显示反转录PCR,扩增产物经过聚丙烯凝胶电泳分析、回收差异表达的基因片段,差异表达片段二次扩增,利用pGM-T载体将二次扩增后的片段克隆,经过反Northern Blot分析后,筛除假阳性片段,将最终的阳性差异片段测序,测序结果经GenBank分析。

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