无血清培养狂犬病毒的研究

摘要

目的:探讨建立无血清无动物源性培养基(VP-SFM)培养Vero细胞和狂犬病毒CTN-1V株的工艺,以期为生产中采用VP-SFM培养狂犬病毒提供一定的实验依据.rn 方法:采用VP-SFM培养Vero细胞和CTN-1V株,绘制病毒增殖曲线;比较不同代次的Vero细胞在VP-SFM中培养狂犬病毒滴度和效力;通过细胞生长、细胞病变观察、病毒增殖等指标检测来进行无血清和含血清培养CTN-1V株的比较;在250mL spin-ner flask中加入2g/L cytodex1,培养Vero细胞,细胞生长72小时按照0.02m.o.i接种CTN-1V株,收获狂犬病毒.rn 结果:采用VP-SFM培养CTN-1V株,病毒增殖良好;不同代次的Vero细胞在VP-SFM中培养的狂犬病毒滴度和效力均无显著性差异(P>0.05);Vero细胞分别经无血清和含血清培养的病毒滴度和抗原含量比较均无显著性差异(P>0.05);Vero细胞在VP-SFM上培养的狂犬病毒效力明显高于DMEM上,具有显著性差异(P<0.05);搅拌瓶微载体系统培养Vero细胞和狂犬病毒,细胞贴壁均匀,生长良好,种毒后第4d起收获病毒,每天收获1个有效体积,可连续收获7-8次,平均病毒滴度为6.50lgFFU/mL、平均病毒效力为6.77IU/mL;平均抗原含量为2.57μg/mL.rn 结论:初步结果显示无血清培养狂犬病毒的结果不差于传统的含血清培养;初步建立了微载体系统、无血清培养Vero细胞和狂犬病毒的工艺.

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