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CYP4F2和β-actin基因实时荧光定量PCR标准品质粒和标准曲线的构建

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目的：制备用于CYP4F2和β-actin基因mRNA实时荧光定量PCR(Real time-PCR)检测的标准品质粒与标准曲线.rn 方法：通过PCR扩增出CYP4F2和β-actin目的片断,纯化后直接连接于pGEM-Teasy载体,转化E·coli DH5α宿主菌,获得阳性克隆;通过PCR扩增、双酶切鉴定和测序分析,确认重组质粒完整正确;大量抽提重组质粒,测定其拷贝浓度,10倍稀释成梯度标准品,并进行荧光定量PCR检测分析.rn 结果：CYP4F2和β-actin基因目的片段均成功重组,获得的重组质粒保持了目的片段的特异性和序列完整性.梯度浓度标准质粒的Real-time PCR结果显示,循环阈值(Ct)与起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系.rn 结论：成功构建了CYP4F2和β-actin基因实时Real-time PCR标准品质粒和标准曲线.

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来源
《2016年广东省药师周大会》|2015年|1-5|共5页
会议地点广州
作者
Yongpan Zhao; 赵永攀; Lei Shi; 石磊; Jin Li; 李晋; Xiaoze Li; 李晓泽; Jian Li; 李健; Shujin Zhao; 赵树进;
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作者单位

广东省药学会;

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会议组织
正文语种
原文格式 PDF
中图分类实验室诊断;
关键词
β-actin基因; CYP4F2基因; 实时荧光定量PCR; 重组质粒;

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