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鸡IFN-α,-β,-γ实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

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根据GenBank上鸡α-、β-、γ-干扰素(ChIFN-α,-β,-γ)基因的序列,在保守区设计并合成各自特异引物,并以鸡3-磷酸甘油脱氢酶(GAPDH)为内参,采用SYBR Green I染料建立实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测方法.首先将IFN-α,-β,-γ,克隆至pGEM-T载体上,以各阳性质粒作为标准品,构建标准曲线,并进行了熔解曲线分析.结果表明,鸡IFN-α,-β,-γ和GAPDH的Ct值与标准品稀释度在1 × 102～1×103拷贝/μL范围,分别呈良好的线性关系,r2均大于0．99.熔解曲线分析结果表明产物为特异的单峰,检测周期从RNA提取到荧光定量PCR结束只需4h.本试验建立的鸡IFN-α,-β,-γ基因实时荧光定量PCR法灵敏度高、特异性强、检测周期短,为在mRNA水平对鸡IFN的定量分析奠定了基础.

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来源
《中国畜牧兽医学会2008年学术年会暨第六届全国畜牧兽医青年科技工作者学术研讨会》|2008年|296-299|共4页
会议地点广州
作者

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作者单位

中国畜牧兽医学会;

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会议组织
正文语种
原文格式 PDF
中图分类 S854.43;
关键词
鸡IFN-α; IFN-β; IFN-γ; 实时荧光定量PCR;

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