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SRAP分析体系的优化及在枇杷种质资源研究上的应用

摘要

本实验以me6(5’TGAGTCCAAACCGGTAA3’)和em2(5’GACTGCGTACGAATTTGC3’)这一对正反向引物组合对Javierin枇杷进行了SRAP分析研究,结果表明:25μl反应体系中,Teq DNA聚合酶、Mg2+、引物、模板DNA和dNTPs 5种主要成分的适宜浓度或用量分别是:dNTPS为0.3mmol/L,Mg2+为2.5mmol/L,Taq DNA聚合酶为1.0U,引物为0.75μmol/L,模板DNA为20ng,优化的扩增程序为94℃预变性5min,94℃变性1min,3S℃复性1min,72℃延伸1min30s,5个循环,94℃变性1min,50℃复性1min,72℃延伸1min30s,35个循环,最后72℃延伸10min。利用该优化的分析体系对来自美国、意大利、西班牙、日本和中国的46份枇杷种质进行了SRAP扩增,经琼脂糖电泳获得了清晰、稳定的SRAP指纹图谱。

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