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EGFR基因突变调节NSCLC Rad51蛋白表达及其亚细胞定位对放射敏感性的影响

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目的：探讨NSCLC细胞中突变EGFR基因调节HR修复蛋白Rad51增加放射敏感的机制.rn 方法：构建稳定表达突变EGFR基因(delE746-A750 EGFR)的重组质粒(delE746-A750 EGFR-pIRES2-EGFP),采用脂质体Lipofectamine2000进行质粒转染EGFR野生型A549细胞,命名为A549del.并以高表达Rad51的野生型A549细胞作为阴性对照，低表达Rad51的突变株H820细胞作为阳性对照。Westernblot检测各细胞株放射诱导的Rad51蛋白的表达及亚细胞分布;Real-timeqPCR检测细胞内Rad51在mRNA水平的表达;克隆形成实验检测细胞放射敏感性，根据线性二次(LQ)模型拟合生存曲线并获得放射敏感参数。R值;流式细胞技术检测细胞凋亡及周期分布。rn 结果：1)不同EGFR表型NSCLC细胞表达Rad51存在差异，EGFR突变型细胞H820较野生型细胞A549表达低。突变型EGFR细胞H820放射诱导核内Rad51蛋白较野生型A549更少。2)转染突变型EGFR基因后，A549细胞内放射诱导的Rad51蛋白的表达以及细胞核内Rad51蛋白的分布均减少。3)转染突变型EGFR基因后增加细胞的放射敏感性，A549细胞经转染后SF2从0.606降至0.448，但仍然高于突变型细胞株H820(SF2:0.361。R值4.02升至7.27，仍低于突变型细胞株H820(a/β:8. 23）。转染后细胞放射诱导凋亡较转染前明显增加，但仍低于突变细胞株H820。放射诱导后各细胞株G2-M期阻滞增多，S期阻滞减少，其中突变株H820周期改变幅度更大，转染后A549de1细胞较转染前G2-M期阻滞比例增多，S期阻滞进一步减少。rn 结论:突变EGFR基因影响NSCLC的放射敏感性，EGFR突变细胞株较野生型细胞株对放射更为敏感，转染突变型EGFR基因可增加细胞的放射敏感性，这与突变EGFR基因致放射诱导的Rad51蛋白表达更低，在细胞核内参与DNA损伤HR修复的Rad51蛋白更少以及增加细胞凋亡、改变细胞周期分布有关。

著录项

来源
《第八届中国肿瘤学术大会暨第十三届海峡两岸肿瘤学术会议》|2014年|818|共1页
会议地点济南
作者
王瑾; 罗国民;
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作者单位

中华医学会肿瘤学分会;

中国抗癌协会;

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会议组织
正文语种
原文格式 PDF
中图分类 R734.2:R730.2;
关键词
非小细胞肺癌; 突变基因; 表皮生长因子受体; Rad51蛋白; 亚细胞定位; 放射敏感性;

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