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日本七鳃鳗RGD毒素肽的分子克隆、表达及对血管新生的抑制作用

摘要

RGD毒素肽是某些有毒生物唾液腺分泌物中特有的以RGD(Arg-Gly-Asp)序列为特征性模体(motif)的小分子量蛋白.从日本七鳃鳗口腔腺中提取总RNA进行RT-PCR,获得了三条日本七鳃鳗RGD毒素肽候选基因.测序结果显示,其与已有报道的RGD毒素肽家族蛋白除具有RGD模体的共性外,在蛋白质一级结构上没有同源性.对此三条候选基因进行克隆、转化与诱导后,得到了其蛋白的可溶性高效表达.经组氨酸亲和层析纯化,获得了三条重组可溶性均质蛋白,并将其命名为Lamptrin1,Lamptrin2,Lamptrin3.体内体外活性测定结果显示,Lamptrin1-3对血管新生均有抑制作用:其均能明显抑制bFGF诱导的鸡胚绒毛尿囊膜血管的新生作用;其对人脐静脉血管内皮细胞ECV304的增殖、黏附、浸润及迁移也均有抑制作用,并能诱导ECV304细胞发生凋亡.

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