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基于大鼠睾丸细胞3D共培养模型的雄性生殖毒性测试系统建立

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目的：建立一个能用于各类化学物对大鼠睾丸细胞和功能影响进行评价、睾丸毒作用机制研究的新的体外毒性测试系统,以更好满足雄性生殖毒性评价和机制研究的需要.rn 方法：通过相关指标的测定(细胞形态、细胞增殖能力、睾酮含量、生精细胞脱落率及脱落细胞存活率、生精细胞分化能力),初步建立3D共培养模型,通过细胞外基质浓度、细胞浓度、乳鼠年龄及共培养周期的选择来确定和优化最适宜的睾丸细胞3D共培养条件.选择欧洲替代方法研究中心推荐的多种生殖毒物如双酚A、邻苯二甲酸盐及其代谢物和阴性对照物等验证该睾丸细胞三维共培养模型能否作为毒性测试系统.根据阳性物和阴性物的作用特点,选择是否需用体外代谢活化系统(S9)、比较受试物作用时间、观察时间,进一步为优化方案提供依据.rn 结果：成功分离了生精细胞、Sertoli细胞和Leydig细胞，并用染色法和免疫荧光法进行了鉴定。通过相关指标的测定（细胞形态、细胞增殖能力、睾酮含量、生精细胞脱落率及脱落细胞存活率、L-乳酸盐及丙酮酸盐含量），比较了无细胞外基质共培养和有细胞外基质共培养模型的差异，并通过精原细胞分化情况确定3D共培养模型的成功建立。通过各指标的检测，对3D共培养系统的条件进行了优化，确定了最适宜的ECM浓度、细胞浓度、乳鼠年龄和共培养周期。rn 结论：l、初步建立了大鼠睾丸细胞3D共培养模型，并对其共培养条件进行了优化。2、初步验证了该系统的适用性。3、利用该模型对已知有生殖毒性的化合物进行了筛选。

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来源
《2016年第六届全国药物毒理学年会》|2016年|198-199|共2页
会议地点重庆
作者
张晓芳; 任丽君;
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作者单位

中国毒理学会;

中国药学会;

中华中医药学会;

中国药理学会;

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会议组织
正文语种
原文格式 PDF
中图分类实验药理学;
关键词
药物; 生殖毒性; 生化指标; 测试系统;

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