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首页> 中文会议>第一届全国脊柱脊髓损伤治疗与康复技术研讨会暨2014年海南省医学会骨科学术年会 >营养剥夺诱导髓核细胞凋亡诱导因子核转位的实验研究

营养剥夺诱导髓核细胞凋亡诱导因子核转位的实验研究

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目的:通过营养剥夺模拟体内髓核细胞退变微环境,检测促死亡蛋白凋亡诱导因子(AIF,Apoptosis inducing factor)表达及细胞器定位情况,为进一步探索髓核细胞退变死亡机制提供实验依据.rn 方法:体外分离获取大鼠尾椎间盘髓核细胞,将细胞分别置入正常环境(DMEM/L培养基(杜尔贝科改良型低糖培养基)、10％胎牛血清、21％O2)和营养剥夺环境(DMEM无糖培养基(杜尔贝科改良型无糖培养基)、无血清、1％O2)培养0h、24h、48h、72h后,细胞免疫荧光染色及Western Blot(蛋白印迹)检测AIF蛋白表达及细胞器定位、流式细胞仪检测细胞存亡率及线粒体膜电位,酶标仪检测半胱氨酸蛋白酶(Caspase)活性.rn 结果:细胞活性检测发现实验组活细胞比例分别为82±2.4％、61±3.1％、42±2.9％,较对照组98％明显降低(p＜0.05),实验组细胞凋亡比例分别为12±1.2％、32±1.6％、49±2.1％,与对照组2％相比明显增高(p＜0.05);线粒体膜电位检测显示实验组细胞线粒体膜电位降低,发橙色荧光的细胞比例分别为80.22±2.31％,61.2±1.52％,15.01±2.91％,均显著低于正常对照组93±3.22％(P＜0.05);细胞免疫荧光染色及Western Blot显示对照组细胞AIF蛋白主要位于线粒体内,而实验组细胞AIF从线粒体释放并转移至细胞核内,同时髓核细胞出现非典型性凋亡;酶标仪检测发现Caspase酶活性无明显变化(P＞0.05).rn 结论:营养剥夺可能通过降低线粒体膜定位,增加其通透性导致AIF释放并转位细胞核,导致髓核细胞出现非典型性凋亡.

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