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破伤风毒素C片段的基因克隆、表达、纯化及免疫原性分析

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应用PCR技术直接从破伤风梭状芽孢杆菌的质粒DNA中扩增出1.4Kd的破伤风毒素C片段(简称TTC)基因,经序列分析与国内克隆株的序列相同.将此基因片段插入到表达载体pET-22b(+)中,并在大肠菌BL21(DE3)中表达.经SDS-PAGE分析,表达产物的分子量约为55Kd,表达量占菌体总蛋白的15％.免疫印迹实验证实该重组蛋白是破伤风毒素C片段抗原.经两步纯化——阴离子交换层析和金属离子螯合亲和层析,得到纯度为96.5％的重组蛋白.参照《中国生物制品规程2000年版》的免疫攻击实验方法对纯化的重组蛋白进行检测,其效价为18.706IU/mg,ED<,50>为20μg.经加强免疫,1μg免疫剂量即能产生足够的抗体保护动物免受破伤风毒素的攻击,说明重组蛋白具有良好的免疫原性.

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来源
《第七次全国生物制品学术会议》|2003年|213-216|共4页
会议地点北京
作者
谭亚军; 雷殿良; 张庶民;
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作者单位

中国微生物学会;

中国预防医学会;

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会议组织
正文语种
原文格式 PDF
中图分类免疫学技术、设备及实验方法;
关键词
破伤风毒素; 基因克隆; 重组表达; 蛋白纯化; 免疫原性; 分离纯化;

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破伤风毒素C片段的基因克隆、表达、纯化及免疫原性分析

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