模式抗原破伤风毒素C蛋白的克隆、表达条件优化及免疫原性初步分析

王明永; 张雅妮; 雷鸣; 左大明; 张丽芸; 陈政良

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模式抗原破伤风毒素C蛋白的克隆、表达条件优化及免疫原性初步分析

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目的获得高纯度、高免疫原性的破伤风毒素C片段(TTC)蛋白.方法以PCR从破伤风杆菌质粒DNA中扩增TTC基因片段,将其插入载体pET43.1a(+)并导入大肠杆菌BL21(DE3)plysS中表达.用Ni2+NTA琼脂糖柱纯化融合蛋白,经凝血酶酶切,再用Ni2+-NTA琼脂糖柱分离目的蛋白.SDS-PAGE和免疫印迹分析目的蛋白的相对分子质量和抗原性,动物免疫实验鉴定其免疫原性.结果获得1373 bp的TrC基因片段,构建成重组表达载体pET43.1a(+)-TTC并在大肠杆菌中表达.TTC-Nus融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的22％,酶切后TTC蛋白可与载体蛋白有效分离,获得纯度为95.5％的TTC蛋白,该蛋白可被破伤风抗毒素识别;将TTC蛋白免疫小鼠后,免疫血清可与破伤风毒素特异性结合,三次免疫后其抗体效价可达1:25 600.结论所获TTC蛋白纯度高,免疫原性好,为研究体内外抗原提呈、免疫应答提供了良好的模式抗原.

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来源
《南方医科大学学报》 |2008年第5期|731-735|共5页
作者
王明永; 张雅妮; 雷鸣; 左大明; 张丽芸; 陈政良;
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作者单位

南方医科大学免疫学教研室,广东,广州,510515;

南方医科大学免疫学教研室,广东,广州,510515;

南方医科大学免疫学教研室,广东,广州,510515;

南方医科大学免疫学教研室,广东,广州,510515;

南方医科大学免疫学教研室,广东,广州,510515;

南方医科大学免疫学教研室,广东,广州,510515;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类转化及克隆;
关键词
破伤风毒素C蛋白; 基因克隆; 重组表达; 免疫原性; 模式抗原;

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