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MEF2C基因RNA干扰质粒的构建及干扰效率测定

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本文构建猪MEF2C基因的RNA干扰重组质粒,并筛选出最佳干扰效率的序列.采用RNAi技术,设计并合成3条针对猪MEF2C基因的RNA干扰序列,构建RNA干扰重组质粒(命名为siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3),将其转染小鼠C2C12细胞,实时定量PCR检测细胞中MEF2C基因mRNA的表达,Western blot鉴定细胞中MEF2C基因蛋白的表达.结果显示,重组质粒经PCR扩增后显示产物大小与预期一致,产物经双酶切及测序鉴定该序列与NCBI提供的序列一致;重组质粒转染C2C12细胞后,实时定量PCR结果表明MEF2C基因mRNA表达受到不同程度抑制,抑制率分别为33.67％±2.51％、21.00％±3.60％、71.67％±4.04％;Western blot结果表明MEF2C基因蛋白表达受到不同程度抑制,抑制率分别为47.33％±0.05％、38.25％±0.16％、67.27％±0.12％.本试验成功构建猪MEF2C基因干扰重组质粒,最终确定干扰质粒(siRNA-3)具有最佳干扰效果,证实MEF2C基因的干扰质粒能有效抑制目的基因mRNA和蛋白的表达,为探讨该基因与肌肉肉质性状的关系提供理论基础.

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来源
《辽宁省畜牧兽医学会2015年学术年会》|2015年|241-245|共5页
会议地点沈阳
作者
曾阳阳; 朱弘焱; 田玉民; 苏玉虹;
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作者单位

辽宁省畜牧兽医学会;

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会议组织
正文语种
原文格式 PDF
中图分类 S858.28:S852.16;
关键词
猪MEF2C基因; RNA干扰序列; 重组质粒; 肌肉肉质;

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