ASIC3-shRNA干扰慢病毒质粒的构建及其效率的鉴定

曲雪菲; 华佳; 吴进; 龚爱华; 蒋鹏

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ASIC3-shRNA干扰慢病毒质粒的构建及其效率的鉴定

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目的:构建酸敏感离子通道3(acid-sensing ion channels 3,ASIC3)干扰慢病毒质粒并进行效率鉴定。方法:利用Gen Bank获取ASIC3基因序列并合成相应干扰序列,通过T4DNA连接酶将ASIC3基因片段连接至环状Plko. 1-Puro载体,将重组质粒转染293T细胞获取慢病毒,用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测病毒滴度;将包装之后的慢病毒感染PC12、BV2、N2a细胞,分别分为ASIC3-shRNA组和EGFP-shRNA组(阴性对照),经慢病毒感染后用qRT-PCR和免疫印迹技术分别检测ASIC3 mRNA和蛋白表达。结果:合成的ASIC3干扰序列成功连接至Plko. 1-Puro载体; qRT-PCR及DNA测序鉴定结果证实,ASIC3-shRNA质粒构建成功; qRT-PCR与免疫印迹结果表明,在PC12、BV2、N2a细胞中,与EGFP-shRNA组相比,ASIC3-shRNA组ASIC3 mRNA和蛋白表达量均明显下调(P <0. 05)。病毒滴度约为1×109IU/mL。结论:ASIC3-shRNA干扰慢病毒质粒构建成功。

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来源
《江苏大学学报：医学版》 |2019年第1期|58-61|共5页
作者
曲雪菲; 华佳; 吴进; 龚爱华; 蒋鹏;
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作者单位

江苏大学医学院;

江苏大学附属医院麻醉科;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类 R393;
关键词
酸敏感离子通道3; 干扰质粒; 慢病毒; 疼痛;

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