大鼠骨桥蛋白干扰质粒的构建及其干扰效率的鉴定

武金峰; 王佐林

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大鼠骨桥蛋白干扰质粒的构建及其干扰效率的鉴定

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目的:构建针对大鼠骨桥蛋白(osteopontin,OPN)基因的小干扰RNA(microRNA,miRNA)绿色荧光蛋白表达载体,并转染大鼠原代皮肤成纤维细胞后,通过半定量RT-PCR法对其干扰效率进行鉴定,从而筛选出最佳的干扰序列.方法:体外化学合成大鼠OPN序列特异性pre-miRNA双链(OPNi-1,OPNi-2及OPNi-3)和非特异性对照双链OPNi-3M,并分别将退火后的双链克隆至线性质粒表达载体pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR.经测序验证后,脂质体介导转染293T细胞进行真核表达验证,并进一步将4种重组质粒经脂质体介导转染大鼠原代皮肤成纤维细胞,半定量RT-PCR法检测各个重组质村对OPN的干扰效果.结果:经测序验证并转染293T细胞后证明4种重组质粒均构建成功.进一步转染大鼠原代皮肤成纤维细胞后,半定量RT-PCR结果显示OPNi-1、OPNi-2、OPNi-3和OPNi-3M对OPN抑制率分别为49%、35%、21%和2%,而各组间β-actin表达无显著性差异.结论:成功构建针对大鼠OPN的miRNA真核表达载体,其中OPNi-1对大鼠原代成纤维细胞OPN的表达具有最佳抑制率,而对照组OPNi-3M几乎无干扰效果.

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来源
《口腔颌面外科杂志》 |2009年第6期|385-389|共5页
作者
武金峰; 王佐林;
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作者单位

同济大学附属口腔医院口腔颌面外科,上海20072;

同济大学附属口腔医院口腔颌面外科,上海20072;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类口腔颌面部外科学;基因载体;
关键词
骨桥蛋白; 小干扰RNA; 干扰质粒; 鼠;

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