小干扰RNA

摘要： 目的 探讨RhoA基因对唾液腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)细胞的迁移和侵袭能力的影响.方法 将液氮冻存的20例SACC及正常癌旁组织研磨匀浆,分别提取总RNA和总蛋白检测RhoA的表达情况.同时构建RhoA-siRNA转染2个细胞株SACC-LM和SACC-83细胞进行细胞学实验,实验分为实验组(转染RhoA-siRNA基因),阴性对照组(转染siRNA-NC基因)和空白对照组.通过qRT-PCR检测各组细胞RhoA的mRNA表达并确定转染效率;Western blot分析各组细胞RhoA及上皮-间充质转换(epithelial-mesenchymal transition,EMT)标志分子(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)的蛋白表达;Transwell实验及划痕实验分析各组细胞侵袭和迁移能力的变化.结果 与正常癌旁组织相比,RhoA mRNA和蛋白相对表达量在SACC组织中增高(P<0.01);实验组与对照组相比,RhoA mRNA的相对表达量和蛋白的相对表达量降低,E-cadherin蛋白的相对表达量增加,N-cadherin、Vimentin蛋白的相对表达量降低(P<0.01);实验组细胞侵袭和迁移能力降低(P<0.01).结论 RhoA在SACC组织中表达增高;体外沉默RhoA基因可有效抑制SACC-LM和SACC-83细胞迁移和侵袭能力,其可能通过作用EMT影响SACC细胞迁移和侵袭能力.

摘要： 背景:脊髓损伤后胶质瘢痕形成物理屏障抑制轴突跨越损伤部位,被认为是神经修复过程中的不利因素.目的:研究siRNA干扰波形蛋白表达对反应性星形胶质细胞的影响,探讨其在脊髓损伤后胶质瘢痕形成中的意义.方法:①选取生长良好的第3代星形胶质细胞,分为未转染组、siRNA-NC组、siRNA-Vimentin组,利用siRNA干扰技术沉默星形胶质细胞中波形蛋白表达,转染24 h进行波形蛋白免疫荧光染色,采用划痕法观察细胞迁移及增殖情况.②SD大鼠随机分为3组:正常组10只,只打开椎板,不损伤脊髓;模型组20只,制备脊髓损伤模型,脊髓内直接注射盐水和空载质粒;治疗组20只,制备脊髓损伤模型,脊髓内直接注射siRNA干扰24 h波形蛋白质粒,分别于术后1 d和4,8周观察脊髓的连续性、粗细及瘢痕与周围组织粘连情况.结果 与结论:①siRNA-Vimentin组免疫荧光染色积分吸光度值低于未转染组、siRNA-NC组(P<0.05),siRNA-Vimentin组的划痕宽度大于未转染组、siRNA-NC组;②术后4,8周,治疗组损伤部位脊髓组织结构改善,胶质瘢痕形成范围小于模型组;③结果 表明,波形蛋白对反应性星形胶质细胞增殖及迁移能力有显著的抑制作用,并可以抑制脊髓损伤后胶质瘢痕的形成,为脊髓损伤后轴突再生及神经功能恢复提供良好的微环境.

摘要： 马尔堡病毒在人类和非人灵长类动物中引起严重的出血热,具有很高的致死率,被列为A级致命病原体,需要在生物安全4级的实验室开展研究。目前尚无有效的预防和治疗方法以对抗马尔堡病毒。本文综述了马尔堡病在预防和治疗方面的研究进展。

摘要： 研究通过在异育银鲫脊髓细胞系(Spinal cord tissue cell lines of Carassius auratus gibelio,CSC)中对鲤疱疹病毒Ⅱ型(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)ORF57进行RNA干扰,以探究其对CyHV-2病毒复制的影响。首先,以FAM标记的异育银鲫β-actin的siRNA进行CSC细胞转染条件的优化,再将针对CyHV-2 ORF57基因设计的3条siRNA,转染CSC细胞,并进行病毒感染,评估siRNA对病毒复制和致细胞病变的影响。转染条件优化结果显示,在siRNA浓度为80 nmol/L,转染液维持24h后更换维持液,β-actin基因表达量最低且观察到的荧光点数量最多。而ORF57-siRNAs干扰结果显示,ORF57-siRNA-2组表现出了较强的抑制效果,在接毒48h时,ORF57-siRNA-2处理组的ORF57基因表达量降到相对于Mock组的33.55%(P<0.01),并且各ORF57-siRNA组都表现出了延缓CyHV-2致细胞病变的时间和强度,抑制时间可达120h。TCID_(50)结果显示,不同组的ORF57-siRNAs均能降低病毒滴度,其中ORF57-siRNA-2将病毒原液TCID_(50)108.487/mL下降至106.776/mL。研究结果表明,干扰ORF57的表达可大大降低CyHV-2的致细胞病变力和复制率,ORF57在CyHV-2复制与致细胞病变中起重要作用。本研究为CyHV-2基于siRNA技术的抗病毒治疗和弱毒株的改造提供了借鉴。

摘要： Inclisiran是一种小干扰RNA(siRNA),以干扰前蛋白转化酶枯草杆菌蛋白酶Kexin-9(PCSK9)信使RNA表达为主要作用,从而持续降低PCSK9和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,具有良好的有效性及安全性。现对inclisiran的适应证、作用机制、药代动力学、临床疗效、不良反应、特殊人群进行综述。

摘要： 目的探讨枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharide,LBP)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导主动脉血管内皮细胞氧化应激损伤的保护机制。方法通过应用小干扰RNA[siRNA(50 nmol)]转染大鼠胸主动脉内皮细胞(rat thoracic aortic endothelial cell,RTAEC),对Nrf2进行基因沉默,检测转染效率、筛选最佳siRNA后,对沉默Nrf2基因分组:空白对照组、AngⅡ组、AngⅡ+LBP组、沉默空载组(siNC组)、siNC+AngⅡ+LBP组、沉默Nrf2组(siRNA组)、siRNA+AngⅡ+LBP组。Western blot检测Nrf2、P-Nrf2的蛋白表达水平在AngⅡ+LBP组与siRNA+AngⅡ+LBP组的变化。ELISA检测丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢酶(CAT)、总抗氧化能力(T-AOC)的含量变化。结果转染效率检测结果显示:荧光显微镜下观察到带有荧光标记的siRNA转染内皮细胞的效率在80%以上。与空白对照组比较,siRNA5组的Nrf2蛋白表达降低(P<0.05)。与空白对照组比较,siRNA5组的Nrf2的mRNA表达降低(P<0.05)。转染目的siRNA实验结果显示:与AngⅡ+LBP组比较,siRNA+AngⅡ+LBP组的Nrf2蛋白表达下降(P<0.05)。与AngⅡ+LBP组比较,siRNA+AngⅡ+LBP组的MDA的表达水平升高(P<0.05),GSH、CAT、T-AOC的表达水平降低(P均<0.01)。结论LBP可能通过增加内皮细胞中Nrf2的蛋白表达水平,提高其抗氧化应激能力,达到保护血管内皮细胞功能的作用。

摘要： 目的观察整合素连接激酶-小干扰RNA-特异性腺相关病毒(ILK-siRNA-AAV)对大鼠青光眼滤过术后滤过通道瘢痕形成的抑制作用。方法选取SPF级8~9周龄SD大鼠48只,采用随机数表法将其分为空白对照组、ILK-siRNA-AAV组、NC-siRNA-AAV组和丝裂霉素C(MMC)组,每组12只。每只大鼠均取左眼为实验眼,右眼不做特殊处理。采用前房植入引流管法建立大鼠青光眼滤过术球结膜滤过泡模型,空白对照组、ILK-siRNA-AAV组和NC-siRNA-AAV组术后1 d滤过泡内分别注入磷酸盐缓冲液、ILK-siRNA-AAV和NC-siRNA-AAV各5μl,MMC组术中采用含0.4 mg/ml MMC的小棉片置于结膜瓣下5 min。术前及术后1、2、3、7、14、21、28 d,采用手持式眼压计测量术眼眼压;术后1、2、3、7、14、21、28 d,采用手术显微镜观察术眼滤过泡形成情况,采用Kaplan-Meier生存分析计算滤过泡生存天数;术后28 d,采用逆转录PCR及Western blot法检测术区结膜及结膜下组织中ILK的mRNA及蛋白表达,检测ILK基因沉默效应;采用苏木精-伊红染色观察ILK基因沉默对滤过通道组织形态的影响;采用Masson染色观察ILK基因沉默对球结膜滤过泡术区组织胶原纤维沉积作用,计算胶原纤维染色阳性面积占整个组织视野面积的百分比。结果各组大鼠手术前后不同时间点眼压总体比较,差异均有统计学意义(F_(分组)=76.84,P<0.001;F_(时间)=114.49,P<0.001),其中ILK-siRNA-AAV组术后第1、7、14和28天眼压均低于空白对照组,MMC组术后第2、3、7、14和28天眼压均低于空白对照组,ILK-siRNA-AAV组术后第7、14、21和28天眼压均低于NC-siRNA-AAV组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,空白对照组、NC-siRNA-AAV组、ILK-siRNA-AAV组和MMC组滤过泡生存天数分别为(3.50±1.51)、(5.00±3.41)、(31.50±3.15)和(31.33±2.46)d,总体比较差异有统计学意义(F=395.83,P<0.05),其中ILK-siRNA-AAV组和MMC组滤过泡生存天数均多于空白对照组和NC-siRNA-AAV组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。各组ILK mRNA及蛋白相对表达量总体比较差异均有统计学意义(F=222.32、752.69,均P<0.05),其中ILK-siRNA-AAV组ILK mRNA及蛋白相对表达量明显低于空白对照组和NC-siRNA-AAV组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。苏木精-伊红染色结果显示,空白对照组和NC-siRNA-AAV组术区纤维结缔组织增生,细胞大量增生,成纤维细胞密度高,呈团块状生长;ILK-siRNA-AAV组球结膜较薄,纤维结缔组织排列疏松,少量成纤维细胞增生;MMC组结膜纤维层疏松、菲薄,形成空洞,细胞稀少。各组胶原纤维染色阳性面积百分比总体比较差异有统计学意义(F=741.66,P<0.05),其中与空白对照组比较,ILK-siRNA-AAV组和MMC组阳性染色百分比显著降低,ILK-siRNA-AAV组阳性染色百分比明显低于NC-siRNA-AAV组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论ILK-siRNA-AAV沉默ILK表达可抑制大鼠滤过术后滤过区组织瘢痕形成,降低眼压。

摘要： 目的:研究表皮生长因子样结构域9(epiderma growth factor-like domain 9,EGFL9)基因在肝癌组织及细胞系中的表达水平及其对Huh-7肝癌细胞系增殖、侵袭和迁移的影响。方法:采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)方法检测EGFL9基因在20例肝癌及对应的癌旁肝组织标本中的表达水平。下载癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库内肝癌基因表达数据,对EGFL9在肝癌中的表达进行分析。RT-qPCR检测EGFL9基因在Huh-7、SMMC-7721及HepG2三种常见的肝癌细胞系和HL-7702正常肝脏细胞系中的表达水平。采用慢病毒介导的siRNA及基因转导技术分别构建EGFL9基因敲减及过表达的Huh-7肝癌细胞,以噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法、Transwell侵袭实验和迁移实验观察EGFL9基因敲减及过表达对Huh-7肝癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。结果:RT-qPCR结果显示,EGFL9基因在20例肝癌组织中的表达量高于对应的癌旁组织。TCGA数据库分析结果也显示,EGFL9在肝癌组织中的平均表达量明显高于癌旁组织。EGFL9在3株肝癌细胞系中的表达水平均高于正常肝脏细胞系。EGFL9基因敲减的Huh-7肝癌细胞的增殖速度明显慢于对照Huh-7肝癌细胞,其侵袭、迁移能力也明显被抑制;EGFL9基因过表达的Huh-7肝癌细胞实验结果则与之相反。结论:EGFL9在肝癌组织和细胞中的表达水平明显上调,且可促进肝癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力,提示EGFL9可能是一个潜在的肝癌治疗靶点。

摘要： 目的:探讨真核细胞翻译起始因子3的亚基b(eIF3b)基因在三阴性乳腺癌(TNBC)增殖和侵袭中的作用。方法:采用免疫组化法检测50例TNBC组织中eIF3b蛋白的表达;应用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)、细胞计数试剂盒8(CCK-8)、细胞克隆形成、细胞划痕实验、细胞侵袭实验,以及蛋白质印迹(Western blot)法分别检测RNA干扰(RNAi)前后MDA-MB-231细胞株eIF3b mRNA表达、细胞增殖、细胞迁移、细胞侵袭能力的变化,以及β-Catenin、C-myc蛋白的表达。结果:50例TNBC中eIF3b高表达率为74%,显著高于癌旁正常组织(P0.05)。RNAi后MDA-MB-231细胞株的eIF3b mRNA水平显著下降(P<0.05),细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著低于对照组(P<0.05),Western blot结果显示β-Catenin蛋白和C-myc蛋白表达水平显著低于对照组(P<0.05)。结论:eIF3b在TNBC组织中高表达;eIF3b基因沉默可抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,可能与阻断Wnt/β-Catenin信号通路影响细胞周期有关。

摘要： 目的探讨siRNA沉默COX-2基因表达对大鼠创伤性深静脉血栓形成(TDVT)的影响及可能的分子机制,期望能为TDVT的治疗新方向提供有力的证据支持。方法将构建好的COX-2siRNA-AAV表达载体溶液由尾静脉注入造模成功的大鼠体内设为COX-2干扰组,并设置生理盐水组、低分子肝素组、阴性对照组以及未造模的正常对照组,每组6只大鼠。饲养5 d后取材,通过HE染色、ELISA、RT-PCR以及Western Blot检测相应指标。结果COX-2干扰组血栓形成率下降,ELISA、RT-PCR及Western Blot检测结果发现,COX-2干扰组的COX-2的蛋白表达量及mRNA的表达水平降低(P<0.001)。结论COX-2siRNA可以通过调节COX-2基因的表达来降低大鼠TDVT的形成,同时提示COX-2可以作为TDVT治疗的一个重要靶点。

摘要： 肝细胞癌由于其本身一些特点，如多灶性，易于发生血管侵犯以及常伴发肝硬化结节等，都在很大程度上影响了肝癌患者的长期生存率。早期发现并采取根治性治疗措施是提高肝癌诊治水平的关键，因此探讨肝癌发生、发展的分子生物学机制以进一步指导肝癌的早期诊断和治疗具有重要意义。siRNA沉默DFNA9基因表达可减弱肝癌细胞的在体外培养状态下的生长增殖能力，抑制肿瘤生长；并且这种作用可能是通过下调肿瘤细胞SOX2蛋白的表达而实现的。随着对DFNA9功能研究的深入，DFNA9有可能成为肝癌诊断的新型标志物和生物治疗的新靶点。

摘要： 肝细胞癌由于其本身一些特点，如多灶性，易于发生血管侵犯以及常伴发肝硬化结节等，都在很大程度上影响了肝癌患者的长期生存率。早期发现并采取根治性治疗措施是提高肝癌诊治水平的关键，因此探讨肝癌发生、发展的分子生物学机制以进一步指导肝癌的早期诊断和治疗具有重要意义。siRNA沉默DFNA9基因表达可减弱肝癌细胞的在体外培养状态下的生长增殖能力，抑制肿瘤生长；并且这种作用可能是通过下调肿瘤细胞SOX2蛋白的表达而实现的。随着对DFNA9功能研究的深入，DFNA9有可能成为肝癌诊断的新型标志物和生物治疗的新靶点。

摘要： 肝细胞癌由于其本身一些特点，如多灶性，易于发生血管侵犯以及常伴发肝硬化结节等，都在很大程度上影响了肝癌患者的长期生存率。早期发现并采取根治性治疗措施是提高肝癌诊治水平的关键，因此探讨肝癌发生、发展的分子生物学机制以进一步指导肝癌的早期诊断和治疗具有重要意义。siRNA沉默DFNA9基因表达可减弱肝癌细胞的在体外培养状态下的生长增殖能力，抑制肿瘤生长；并且这种作用可能是通过下调肿瘤细胞SOX2蛋白的表达而实现的。随着对DFNA9功能研究的深入，DFNA9有可能成为肝癌诊断的新型标志物和生物治疗的新靶点。

摘要： 肝细胞癌由于其本身一些特点，如多灶性，易于发生血管侵犯以及常伴发肝硬化结节等，都在很大程度上影响了肝癌患者的长期生存率。早期发现并采取根治性治疗措施是提高肝癌诊治水平的关键，因此探讨肝癌发生、发展的分子生物学机制以进一步指导肝癌的早期诊断和治疗具有重要意义。siRNA沉默DFNA9基因表达可减弱肝癌细胞的在体外培养状态下的生长增殖能力，抑制肿瘤生长；并且这种作用可能是通过下调肿瘤细胞SOX2蛋白的表达而实现的。随着对DFNA9功能研究的深入，DFNA9有可能成为肝癌诊断的新型标志物和生物治疗的新靶点。

摘要： 肝细胞癌由于其本身一些特点，如多灶性，易于发生血管侵犯以及常伴发肝硬化结节等，都在很大程度上影响了肝癌患者的长期生存率。早期发现并采取根治性治疗措施是提高肝癌诊治水平的关键，因此探讨肝癌发生、发展的分子生物学机制以进一步指导肝癌的早期诊断和治疗具有重要意义。siRNA沉默DFNA9基因表达可减弱肝癌细胞的在体外培养状态下的生长增殖能力，抑制肿瘤生长；并且这种作用可能是通过下调肿瘤细胞SOX2蛋白的表达而实现的。随着对DFNA9功能研究的深入，DFNA9有可能成为肝癌诊断的新型标志物和生物治疗的新靶点。

摘要： 肝细胞癌由于其本身一些特点，如多灶性，易于发生血管侵犯以及常伴发肝硬化结节等，都在很大程度上影响了肝癌患者的长期生存率。早期发现并采取根治性治疗措施是提高肝癌诊治水平的关键，因此探讨肝癌发生、发展的分子生物学机制以进一步指导肝癌的早期诊断和治疗具有重要意义。siRNA沉默DFNA9基因表达可减弱肝癌细胞的在体外培养状态下的生长增殖能力，抑制肿瘤生长；并且这种作用可能是通过下调肿瘤细胞SOX2蛋白的表达而实现的。随着对DFNA9功能研究的深入，DFNA9有可能成为肝癌诊断的新型标志物和生物治疗的新靶点。

摘要： 小干扰RNA(siRNA)因其强大的基因沉默能力而成为肿瘤治疗中最有潜力的药物.但是裸露的siRNA存在一些固有的缺陷,如在血液中极易被核酸酶降解以及被肾脏快速清除,使得裸siRNA不能直接用于系统给药,因此构建安全有效的siRNA递送系统对于提高siRNA的成药性具有重要意义.在之前的研究中,提出了一种新型的物理-化学协同组装策略,通过物理静电作用和化学共价键作用,提高了siRNA的体内稳定性,实现了siRNA的体内有效递送.基于此,又将物理-化学协同组装策略进一步拓展,利用叠氮基团与炔基基团间的点击反应,构建了模块化功能脂质体用于siRNA的体内外递送.

摘要： 小干扰RNA(siRNA)因其强大的基因沉默能力而成为肿瘤治疗中最有潜力的药物.但是裸露的siRNA存在一些固有的缺陷,如在血液中极易被核酸酶降解以及被肾脏快速清除,使得裸siRNA不能直接用于系统给药,因此构建安全有效的siRNA递送系统对于提高siRNA的成药性具有重要意义.在之前的研究中,提出了一种新型的物理-化学协同组装策略,通过物理静电作用和化学共价键作用,提高了siRNA的体内稳定性,实现了siRNA的体内有效递送.基于此,又将物理-化学协同组装策略进一步拓展,利用叠氮基团与炔基基团间的点击反应,构建了模块化功能脂质体用于siRNA的体内外递送.

摘要： 小干扰RNA(siRNA)因其强大的基因沉默能力而成为肿瘤治疗中最有潜力的药物.但是裸露的siRNA存在一些固有的缺陷,如在血液中极易被核酸酶降解以及被肾脏快速清除,使得裸siRNA不能直接用于系统给药,因此构建安全有效的siRNA递送系统对于提高siRNA的成药性具有重要意义.在之前的研究中,提出了一种新型的物理-化学协同组装策略,通过物理静电作用和化学共价键作用,提高了siRNA的体内稳定性,实现了siRNA的体内有效递送.基于此,又将物理-化学协同组装策略进一步拓展,利用叠氮基团与炔基基团间的点击反应,构建了模块化功能脂质体用于siRNA的体内外递送.

摘要： 小干扰RNA(siRNA)因其强大的基因沉默能力而成为肿瘤治疗中最有潜力的药物.但是裸露的siRNA存在一些固有的缺陷,如在血液中极易被核酸酶降解以及被肾脏快速清除,使得裸siRNA不能直接用于系统给药,因此构建安全有效的siRNA递送系统对于提高siRNA的成药性具有重要意义.在之前的研究中,提出了一种新型的物理-化学协同组装策略,通过物理静电作用和化学共价键作用,提高了siRNA的体内稳定性,实现了siRNA的体内有效递送.基于此,又将物理-化学协同组装策略进一步拓展,利用叠氮基团与炔基基团间的点击反应,构建了模块化功能脂质体用于siRNA的体内外递送.

摘要： 本发明公开了一种长链非编码RNA lnc‑PMIF，以及lnc‑PMIF的小干扰RNA。另外，本发明还公开了该长链非编码RNA lnc‑PMIF在制备或筛选诊断人骨骼系统疾病的产品中的应用，以及小干扰RNA在制备治疗人骨骼系统疾病药物或药物组合物中的应用。本发明通过设计小干扰RNA序列，验证lnc‑PMIF的功能，证明lnc‑PMIF可以通过HuR抑制成骨细胞迁移，lnc‑PMIF序列可用于骨骼系统疾病的诊断或作为治疗靶点；设计的小干扰RNA序列可用于制备治疗骨骼系统疾病的药物及药物组合物，包括人骨质疏松、股骨头坏死、关节退行性变、脊柱侧弯以及其它骨骼系统疾病。

摘要： 本发明公开了针对哺乳动物R‑Spondin3基因靶点的小干扰RNA、短发卡RNA及载体和应用。所述小干扰RNA包含正义链和反义链。基于该小干扰RNA可通过化学合成法合成短发卡RNA。短发卡RNA可进一步与病毒表达载体或非病毒表达载体相连，形成一种针对哺乳动物R‑Spondin3基因靶点的载体。其中病毒表达载体为慢病毒载体或腺病毒载体，非病毒表达载体为质粒载体。上述的短发卡RNA的载体可用于制备肝纤维化基因治疗药物。本发明设计的针对R‑Spondin3基因靶点的RNA干扰片段能促使激活的肝星状细胞回退到静止状态或凋亡，从而有效促进肝纤维化的恢复过程。

摘要： 本发明公开了针对哺乳动物R‑Spondin2基因靶点的小干扰RNA、短发卡RNA及载体和应用。所述小干扰RNA包含正义链和反义链。基于该小干扰RNA可通过化学合成法合成短发卡RNA。短发卡RNA可进一步与病毒表达载体或非病毒表达载体相连，形成一种针对哺乳动物R‑Spondin2基因靶点的载体。其中病毒表达载体为慢病毒载体或腺病毒载体，非病毒表达载体为质粒载体。上述的短发卡RNA的载体可用于制备肝纤维化基因治疗药物。本发明设计的针对R‑Spondin2基因靶点的RNA干扰片段能促使激活的肝星状细胞回退到静止状态或凋亡，从而有效促进肝纤维化的恢复过程。

摘要： 本发明公开了针对哺乳动物R‑Spondin1基因靶点的小干扰RNA、短发卡RNA及载体和应用。所述小干扰RNA包含正义链和反义链。基于该小干扰RNA可通过化学合成法合成短发卡RNA。短发卡RNA可进一步与病毒表达载体或非病毒表达载体相连，形成一种针对哺乳动物R‑Spondin1基因靶点的载体。其中病毒表达载体为慢病毒载体或腺病毒载体，非病毒表达载体为质粒载体。上述的短发卡RNA的载体可用于制备肝纤维化基因治疗药物。本发明设计的针对R‑Spondin1基因靶点的RNA干扰片段能促使激活的肝星状细胞回退到静止状态或凋亡，从而有效促进肝纤维化的恢复过程。

摘要： 制备小干扰RNA(siRNA)表达系统文库，以生产通过诱导靶基因RNA表达产物降解来沉默靶基因的siRNA的方法，包括：(i)从细胞群中分离一种或多种靶基因的RNA；(ii)从分离的RNA产生RNA片段；(iii)将RNA片段转化为dsDNA片段；和(iv)将dsDNA片段克隆到载体中以形成克隆的载体，每个载体包含一个或多个启动子和能够接受至少一个dsDNA片段插入的至少一个限制性酶位点，使得可以产生siRNA。也提供了从siRNA表达系统产生siRNA的方法以及通过使用从siRNA表达系统产生的siRNA识别用于治疗的功能性靶基因和识别RNAi治疗剂的方法。

摘要： 本发明公开了一种长链非编码RNA lnc‑PMIF，以及lnc‑PMIF的小干扰RNA。另外，本发明还公开了该长链非编码RNA lnc‑PMIF在制备或筛选诊断人骨骼系统疾病的产品中的应用，以及小干扰RNA在制备治疗人骨骼系统疾病药物或药物组合物中的应用。本发明通过设计小干扰RNA序列，验证lnc‑PMIF的功能，证明lnc‑PMIF可以通过HuR抑制成骨细胞迁移，lnc‑PMIF序列可用于骨骼系统疾病的诊断或作为治疗靶点；设计的小干扰RNA序列可用于制备治疗骨骼系统疾病的药物及药物组合物，包括人骨质疏松、股骨头坏死、关节退行性变、脊柱侧弯以及其它骨骼系统疾病。

摘要： 本发明提供一种针对人巨细胞病毒长链非编码RNA4.9的小干扰RNA序列，其核苷酸序列是：5’‑TGCGTCTTGTACATAGATATA‑3’。本发明根据小干扰RNA设计原则，选择的小干扰RNA的cDNA序列GC含量为33.3％。构建针对人巨细胞病毒长链非编码RNA4.9的小干扰RNA慢病毒载体，进行慢病毒包装后感染人巨细胞病毒潜伏感染的细胞模型，能有效降低长链非编码RNA4.9的核酸水平，可应用于体内外人巨细胞病毒长链非编码RNA4.9及其调控蛋白的功能研究。

摘要： 本发明涉及分子生物学、基因工程技术以及生物医药领域，具体涉及一种针对SOX4基因靶点的小干扰RNA、短发卡RNA及重组载体和应用。小干扰RNA包括SEQ ID NO.1所示的正义链和SEQ ID NO.2所示的反义链。短发卡RNA包括SEQ ID NO.3所示的正义链和SEQ ID NO.4所示的反义链。包含短发卡RNA的重组载体能在宿主细胞内转录得到SOX4‑shRNA，经宿主细胞加工后可生成小分子干扰RNA，并靶向SOX4的信使RNA，降低SOX4的表达，导致基因沉默效应，有效抑制食管鳞癌细胞的增殖并促进化疗药物阿霉素诱导的食管鳞癌细胞的衰老，具有抗肿瘤应用价值，为进一步研究SOX4在肿瘤细胞衰老逃逸中的功能及靶向SOX4的药物研发提供了基础。

摘要： 本发明公开了针对哺乳动物R‑Spondin3基因靶点的小干扰RNA、短发卡RNA及载体和应用。所述小干扰RNA包含正义链和反义链。基于该小干扰RNA可通过化学合成法合成短发卡RNA。短发卡RNA可进一步与病毒表达载体或非病毒表达载体相连，形成一种针对哺乳动物R‑Spondin3基因靶点的载体。其中病毒表达载体为慢病毒载体或腺病毒载体，非病毒表达载体为质粒载体。上述的短发卡RNA的载体可用于制备肝纤维化基因治疗药物。本发明设计的针对R‑Spondin3基因靶点的RNA干扰片段能促使激活的肝星状细胞回退到静止状态或凋亡，从而有效促进肝纤维化的恢复过程。

摘要： 本发明公开了针对哺乳动物R-Spondin1基因靶点的小干扰RNA、短发卡RNA及载体和应用。所述小干扰RNA包含正义链和反义链。基于该小干扰RNA可通过化学合成法合成短发卡RNA。短发卡RNA可进一步与病毒表达载体或非病毒表达载体相连，形成一种针对哺乳动物R-Spondin1基因靶点的载体。其中病毒表达载体为慢病毒载体或腺病毒载体，非病毒表达载体为质粒载体。上述的短发卡RNA的载体可用于制备肝纤维化基因治疗药物。本发明设计的针对R-Spondin1基因靶点的RNA干扰片段能促使激活的肝星状细胞回退到静止状态或凋亡，从而有效促进肝纤维化的恢复过程。