基因沉默

摘要： 目的 探讨环状RNA小脑变性相关蛋白1的反义转录物(antisense to the cerebellar degeneration-related protein 1 transcript,CDR1as)在Balb/C小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)中过表达与低表达后对其成骨和成血管相关基因的影响。方法 体外培养及鉴定BMSCs,将含过表达与沉默circRNA CDR1as基因的慢病毒(lentiviruses,LV)载体及对照组慢病毒分别转染至小鼠BMSCs并筛选稳定的细胞株,分为circRNA CDR1as过表达组、过表达对照组、circRNA CDR1as低表达组和低表达对照组。各组成骨诱导14、21 d后分别进行茜素红染色和碱性磷酸酶染色;qRT-PCR检测目的基因circRNA CDR1as、成骨分化特异标志物碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、Runt相关基因2(runt-related transcription factor 2,RUNX2)、骨钙素(osteocalcin,OCN)、骨桥素(osteopontin,OPN)、锌指结构转录因子(osterix,OSX)、Ⅰ型胶原蛋白(collagen-I,COL-1),以及成血管特异标志物血管内皮生长因子(vascular endothelial grown factor,VEGF)、血管生成素-1(angiogenin-1,Ang-1)的mRNA表达水平。结果 茜素红和ALP染色均显示:过表达实验组钙沉淀和ALP染色区域多于过表达对照组;而低表达实验组钙沉淀和ALP染色区域少于低表达对照组,随着成骨诱导天数的增加,各组的钙沉淀和ALP染色面积也增大。qRT-PCR结果显示:过表达实验组BMSCs中circRNA CDR1as、ALP、RUNX2、OCN、OPN、OSX、COL-1、VEGF和Ang-1的mRNA表达水平显著升高(P<0.001);低表达实验组BMSCs中circRNA CDR1as、ALP、RUNX2、OCN、OPN、OSX、COL-1、VEGF和Ang-1的m RNA表达水平显著降低(P<0.001)。结论 过表达circRNA CDR1as基因可促进BMSCs的成骨分化及血管生成的能力;低表达circRNA CDR1as基因可抑制BMSCs的成骨分化及血管生成的能力。

摘要： 作物病虫害每年都会对作物产生危害,并造成巨大的经济损失。RNAi是目前最有可能应用于害虫绿色防控的新技术。本文就RNAi技术在作物病虫害防治中的应用现状、存在的问题及发展前景进行了综述,以期为RNAi技术在作物病虫害防治中的应用提供参考。

摘要： 小分子RNA在农作物的生长、发育、抗病、抗旱、抗寒等生命过程中发挥着重要作用,也是抵抗生物胁迫和非生物胁迫的关键种质资源,长久以来农业科技领域一直致力于开发高效、省时、高通量的小分子RNA检查、表达和沉默技术。该文基于大麦条纹花叶病毒载体,建立了一种在麦类作物体内瞬时高效沉默小分子RNA的技术体系,以期为研究麦类作物小分子RNA的生物学功能提供可选择的技术方法。

摘要： 目的探讨长链非编码RNA双同源盒假基因9(double homeoboxApseudogene 9,DUXAP9)在头颈鳞癌中的作用,研究DUXAP9在头颈鳞癌细胞中的表达水平、分子功能和机制。方法lnc RNA芯片筛选头颈鳞癌组织与癌旁组织差异表达的lncRNA,TCGA数据库中分析DUXAP9在头颈鳞癌组织中的表达水平及其与患者预后的关系;qRT⁃PCR检测DUXAP9在头颈鳞癌组织样本和细胞系中的表达水平。沉默DUXAP9后,CCK⁃8实验、细胞划痕实验、Transwell迁移实验和裸鼠皮下成瘤实验评估其在头颈鳞癌细胞中的功能。qRT⁃PCR和Western blot检测沉默DUXAP9后,头颈鳞癌细胞中上皮⁃间充质转化(epithelial⁃mesenchymaltransition,EMT)相关蛋白转录及翻译水平的变化。结果lncRNA芯片结果显示,与癌旁组织相比,DUXAP9在头颈鳞癌中异常高表达。TCGA数据库分析表明,与DUXAP9低表达患者相比,DUXAP9高表达的患者生存率差;qRT⁃PCR实验表明DUXAP9在头颈鳞癌组织标本和细胞系中异常高表达。沉默DUXAP9可以显著抑制头颈鳞癌细胞的增殖能力、迁移能力和EMT相关基因的表达水平。沉默DUXAP9能显著抑制头颈鳞癌细胞系CAL27的裸鼠皮下成瘤能力。结论DUXAP9促进头颈鳞癌细胞的增殖、迁移和裸鼠皮下成瘤能力。DUXAP9可能通过调控EMT介导头颈鳞癌细胞的迁移能力。

摘要： 目的基于Oncomine数据库分析细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)基因在卵巢癌中的表达水平及沉默其表达对癌细胞生物学行为的影响。方法利用Oncomine数据库中关于卵巢癌组织中Cyclin D1基因的相关信息,分析Cyclin D1基因在不同肿瘤中的表达情况以及在卵巢癌中的表达情况。使用在线数据库Kaplan-Meier Plotter分析Cyclin D1表达水平与卵巢癌预后的关系。使用qRT-PCR检测各卵巢癌细胞株(SKOV3、CAOV3、A2780、ES2)及正常卵巢上皮细胞中Cyclin D1的表达。取对数生长期卵巢癌细胞SKOV3,将细胞分为空白对照组、阴性对照组(NC siRNA组)和Cyclin D1基因沉默组(Cyclin D1 siRNA组);使用Western blotting检测各组Cyclin D1蛋白表达;分别使用MTT法、细胞划痕实验和Transwell实验检测各组SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭能力。结果通过挖掘分析Oncomine数据库涉及的Cyclin D1基因发现,与正常卵巢组织比较,在所有差异表达基因中,Cyclin D1基因的中位数值排名为202.0,P<0.001。与Cyclin D1低表达的卵巢癌患者比较,Cyclin D1高表达患者的总生存期和无瘤进展生存期均较短,差异有统计学意义(P<0.01)。与正常卵巢上皮细胞比较,Cyclin D1基因在各卵巢癌细胞(ES2、CAOV3、SKOV3、A2780)中的表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);与SKOV3细胞株比较,Cyclin D1基因在CAOV3、A2780、ES2细胞株中的表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Cyclin D1 siRNA组细胞中Cyclin D1的表达量、增殖能力、迁移面积、穿过聚碳酸酯膜的癌细胞数量均明显低于空白对照组和NC siRNA组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Cyclin D1基因在卵巢癌组织中高表达,该基因可能参与卵巢癌的发生发展和转移,并与患者预后密切相关。

摘要： 为探究Bx-TIMP基因在松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)致病过程中的功能,对Bx-TIMP基因进行克隆及分析,并验证基因沉默后松材线虫致病性变化。PCR法克隆Bx-TIMP,应用TMHMM 2.0 server和SignalP 4.1 Server分析该基因编码蛋白质的跨膜结构域和信号肽;应用原位杂交技术确定该基因在松材线虫体内表达部位;应用RNAi技术,分析沉默该基因后松材线虫对红松(Pinus koraiensis)致病性变化。该基因CDS区全长363 bp,编码120个氨基酸,编码蛋白具有跨膜结构域及信号肽。原位杂交表明该基因在松材线虫食道腺中表达。基因沉默后,松材线虫对红松致病性减弱。结果表明,Bx-TIMP为效应因子基因,与松材线虫致病性相关。本研究揭示Bx-TIMP基因是松材线虫危害松树致使其发病的关键基因,为进一步明确松材线虫致病机理提供理论依据,为研发松材线虫的防治技术奠定理论基础。

摘要： 目的利用小干扰RNA(siRNA)抑制CC趋化因子受体5(CCR5)的表达,以探讨CCR5 siRNA对类风湿关节炎(RA)大鼠滑膜细胞增殖与细胞周期的影响及其可能机制。方法采用胶原诱导法构建RA大鼠模型,分离和培养RA大鼠滑膜细胞,通过Lipofectamine 2000将CCR5 siRNA和NC siRNA载体转染入细胞以判断其转染效率。并将体外培养的滑膜细胞分为4组:RA组(RA大鼠滑膜细胞)、RA+NC组(加入脂质体包裹的NC siRNA)、RA+mock组(加入脂质体)、RA+siRNA组(加入脂质体包裹的CCR5 siRNA)。利用RNA干扰技术抑制RA大鼠滑膜细胞CCR5的表达后,再用qRT-PCR和Western Blot检测各组滑膜细胞CCR5、细胞周期相关基因(Cyclin D1、Cyclin E1、Cyclin B1)mRNA和蛋白表达情况;MTT检测各组滑膜细胞增殖情况;PI单染检测滑膜细胞细胞周期分布情况。结果与RA组比较,RA+siRNA组CCR5 mRNA表达水平(1.16±0.21)比(1.85±0.61)、CCR5蛋白水平(0.19±0.01)比(0.44±0.05)均明显降低(P0.05)。结论CCR5基因沉默可抑制滑膜细胞的生长,使G0/G1期滑膜细胞比例增加,S期细胞比例减少,还可通过调节细胞周期相关基因Cyclin D1、Cyclin E1、Cyclin B1的表达来调节细胞周期的分布,进而影响滑膜细胞的增殖。

摘要： 目的探讨沉默长链非编码RNA(lncRNA)LINC00472对脂多糖(LPS)诱导肾小管上皮细胞损伤的影响及其机制。方法体外培养人肾小管上皮细胞系HK-2(以下称HK-2细胞),随机分为对照组、LPS组、LPS+si-LINC00472组、LPS+si-NC组、LPS+miR-136-3p组、LPS+miR-NC组、LPS+si-LINC00472+anti-miR-136-3p组和LPS+si-LINC00472+anti-miR-NC组。LPS+si-LINC00472组转染si-LINC00472,LPS+si-NC组转染si-NC,LPS+miR-136-3p组转染miR-136-3p,LPS+miR-NC组转染miR-NC,LPS+si-LINC00472+anti-miR-136-3p组转染si-LINC00472、anti-miR-136-3p,LPS+si-LINC00472+anti-miR-NC组转染si-LINC00472、anti-miR-NC,转染6 h后给予1μg/mL LPS刺激24 h。LPS组不予转染,仅给予1μg/mL LPS刺激24 h。对照组常规培养,不予转染和LPS刺激。收集各组干预后细胞,采用RT-qPCR法检测lncRNA LINC00472、miR-136-3p表达,采用MTT法检测再培养48 h细胞增殖活性,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用ELISA法检测培养上清液IL-6、IL-8,采用Western blotting法检测程序性细胞死亡因子4(PDCD4)蛋白表达。通过LncBase Predicted v.2在线预测网站、starBase数据库预测lncRNA LINC00472与miR-136-3p、miR-136-3p与PDCD4的结合位点,并通过双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA LINC00472与miR-136-3p、miR-136-3p与PDCD4的靶向调控关系。结果LPS组lncRNA LINC00472相对表达量明显高于对照组,miR-136-3p相对表达量明显低于对照组,细胞增殖活性亦明显低于对照组,而细胞凋亡率及培养上清液IL-6、IL-8水平均明显高于对照组(P均<0.05)。LPS+si-LINC00472组lncRNA LINC00472相对表达量明显低于LPS+si-NC组,miR-136-3p相对表达量明显高于LPS+si-NC组,细胞增殖活性亦明显高于LPS+si-NC组,而细胞凋亡率及培养上清液IL-6、IL-8水平均明显低于对照组(P均<0.05)。LPS+miR-136-3p组miR-136-3p相对表达量和细胞增殖活性均明显高于LPS+miR-NC组,而细胞凋亡率及培养上清液IL-6、IL-8水平和PDCD4蛋白相对表达量均明显低于LPS+miR-NC组(P均<0.05)。LPS+si-LINC00472+anti-miR-136-3p组miR-136-3p相对表达量和细胞增殖活性均明显低于LPS+si-LINC00472+anti-miR-NC组,而细胞凋亡率及培养上清液IL-6、IL-8水平和PDCD4蛋白相对表达量均明显高于LPS+si-LINC00472+anti-miR-NC组(P均<0.05)。经LncBase Predicted v.2在线预测网站和starBase数据库预测并经双荧光素酶报告基因实验验证,lncRNA LINC00472与miR-136-3p存在靶向结合位点,miR-136-3p与PDCD4存在靶向结合位点。结论沉默lncRNA LINC00472可通过促进miR-136-3p表达、抑制PDCD4表达,减轻LPS诱导的肾小管上皮细胞损伤。

摘要： 目的观察整合素连接激酶-小干扰RNA-特异性腺相关病毒(ILK-siRNA-AAV)对大鼠青光眼滤过术后滤过通道瘢痕形成的抑制作用。方法选取SPF级8~9周龄SD大鼠48只,采用随机数表法将其分为空白对照组、ILK-siRNA-AAV组、NC-siRNA-AAV组和丝裂霉素C(MMC)组,每组12只。每只大鼠均取左眼为实验眼,右眼不做特殊处理。采用前房植入引流管法建立大鼠青光眼滤过术球结膜滤过泡模型,空白对照组、ILK-siRNA-AAV组和NC-siRNA-AAV组术后1 d滤过泡内分别注入磷酸盐缓冲液、ILK-siRNA-AAV和NC-siRNA-AAV各5μl,MMC组术中采用含0.4 mg/ml MMC的小棉片置于结膜瓣下5 min。术前及术后1、2、3、7、14、21、28 d,采用手持式眼压计测量术眼眼压;术后1、2、3、7、14、21、28 d,采用手术显微镜观察术眼滤过泡形成情况,采用Kaplan-Meier生存分析计算滤过泡生存天数;术后28 d,采用逆转录PCR及Western blot法检测术区结膜及结膜下组织中ILK的mRNA及蛋白表达,检测ILK基因沉默效应;采用苏木精-伊红染色观察ILK基因沉默对滤过通道组织形态的影响;采用Masson染色观察ILK基因沉默对球结膜滤过泡术区组织胶原纤维沉积作用,计算胶原纤维染色阳性面积占整个组织视野面积的百分比。结果各组大鼠手术前后不同时间点眼压总体比较,差异均有统计学意义(F_(分组)=76.84,P<0.001;F_(时间)=114.49,P<0.001),其中ILK-siRNA-AAV组术后第1、7、14和28天眼压均低于空白对照组,MMC组术后第2、3、7、14和28天眼压均低于空白对照组,ILK-siRNA-AAV组术后第7、14、21和28天眼压均低于NC-siRNA-AAV组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,空白对照组、NC-siRNA-AAV组、ILK-siRNA-AAV组和MMC组滤过泡生存天数分别为(3.50±1.51)、(5.00±3.41)、(31.50±3.15)和(31.33±2.46)d,总体比较差异有统计学意义(F=395.83,P<0.05),其中ILK-siRNA-AAV组和MMC组滤过泡生存天数均多于空白对照组和NC-siRNA-AAV组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。各组ILK mRNA及蛋白相对表达量总体比较差异均有统计学意义(F=222.32、752.69,均P<0.05),其中ILK-siRNA-AAV组ILK mRNA及蛋白相对表达量明显低于空白对照组和NC-siRNA-AAV组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。苏木精-伊红染色结果显示,空白对照组和NC-siRNA-AAV组术区纤维结缔组织增生,细胞大量增生,成纤维细胞密度高,呈团块状生长;ILK-siRNA-AAV组球结膜较薄,纤维结缔组织排列疏松,少量成纤维细胞增生;MMC组结膜纤维层疏松、菲薄,形成空洞,细胞稀少。各组胶原纤维染色阳性面积百分比总体比较差异有统计学意义(F=741.66,P<0.05),其中与空白对照组比较,ILK-siRNA-AAV组和MMC组阳性染色百分比显著降低,ILK-siRNA-AAV组阳性染色百分比明显低于NC-siRNA-AAV组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论ILK-siRNA-AAV沉默ILK表达可抑制大鼠滤过术后滤过区组织瘢痕形成,降低眼压。

摘要： 目的:通过基因干扰和过表达技术,研究V-ATP酶H亚基(V-ATPase membrane subunit H,VMAH)蛋白在柑橘绿霉病菌指状青霉生长中的生理功能,及其作为抗柑橘绿霉病药物作用靶点的可行性。方法:采用菌丝生长法和孢子萌发法,研究沉默和过表达VMAH基因对正常和胁迫条件下指状青霉细胞生长特性的影响。结果:在正常生长条件下,沉默VMAH基因显著抑制了指状青霉菌丝体的生长;而过表达VMAH基因对菌体生长表现出显著促进作用。在不同pH值环境下,沉默VMAH基因显著抑制了指状青霉菌丝的生长,尤其在偏酸性(pH值低于2)和偏碱性(pH值高于8)条件下尤为显著;而过表达VMAH基因在一定程度上促进了菌体菌丝的生长,pH值为6时,其促进作用最显著。与野生株相比,沉默VMAH基因对胞外Ca^(2+)、Cu^(2+)、Fe^(2+)等金属离子胁迫处理较为敏感。VMAH基因沉默菌株对质子泵抑制剂类杀菌剂的敏感性显著增加,尤其V-ATP酶专一性抑制剂巴佛洛霉素A_(1)最为明显;而VMAH基因过表达菌株对质子泵抑制剂类杀菌剂的敏感性显著降低。结论:VMAH在指状青霉生长过程中发挥重要作用,是研发低耐药性柑橘采后杀菌剂的潜在作用靶点。

摘要： 本文研究核心结合因子α-1(Cbfα-1)基因沉默对高磷诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)成骨样分化和钙化的影响.体外原代培养大鼠VSMC.针对大鼠Cbfα-1基因设计合成4对候选小分子干扰RNA(siRNA)序列,以Lipo2000为载体,转染体外培养的VSMC;FAM荧光标记siRNA优化转染条件.反转录(RT)-PCR检测Cbfα-1mRNA表达,筛选有效siRNA序列.将有效siRNA序列转染VSMC,细胞分为4组：(1)正常磷组(1.3mmol/L);(2)高磷组(2.6mmol/L);(3)siRNA转染组：高磷+Cbfα-1-siRNA;(4)阴性转染对照组：高磷+阴性对照siRNA.RT-PCR和Western印迹法检测Cbfα-1、骨桥蛋白(OPN)基因和蛋白表达;茜素红染色观察细胞钙盐沉积.结果表明，化学合成的Cbfα-1 siRNA可有效抑制VSMC Cbfα-1基因和蛋白的表达，从而抑制高磷诱导的VSMC成骨样转分化和细胞钙化。Cbfα-1可望成为CKD血管钙化治疗的靶点。

摘要： 目的：目的利用经典核雌激素受体(Estrogen receptor,ER)阴性、膜G蛋白偶联雌激素受体(G protein-coupled estro-gen receptor,GPER)阳性乳腺癌SKBR3细胞探索丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA)对细胞增殖活性的影响及其GPER介导途径. 方法：应用GPER SiRNA转染构建GPER基因沉默的SKBR3细胞;利用MTT细胞增殖、PI细胞周期测定方法观察丹参酮ⅡA对SKBR3细胞增殖速率、细胞增殖指数的影响及GPER的介导作用.利用Western Blot方法检测丹参酮ⅡA对SKBR3细胞周期蛋白Cyclin D表达情况的影响及GPER的介导功能. 结果：1×10-5mol·L-1-1×10-8mol·L-1丹参酮ⅡA能够显著降低SKBR3细胞增殖速率,1×10-5mol·L-1-1×10-6mol·L-1丹参酮ⅡA能够显著下调细胞增殖指数,且上述抑制作用可因GPER基因沉默而明显减弱.WB测定结果表明,1×10-5mol·L-1-1×10-6mol·L-1丹参酮ⅡA可使SKBR3细胞Cyclin D蛋白表达显著降低,且该效应可被GPER基因沉默所拮抗. 结论：丹参酮ⅡA具有抑制乳腺癌SKBR3细胞增殖的作用,该抑制作用是经GPER途径介导的.

摘要： 本文对长非编码RNA的研究背景、基本概念、在基因转录中可能的作用和表观遗传调控的基本概念、主要调控方式作了简单总结,并且简要介绍了几类lncRNA的基本情况以及通过何种方式介导基因沉默.

摘要： RNA干扰(RNAi)是指双链RNA(dsRNA)诱导同源靶基因的mRNA特异性降解或翻译抑制,而导致转录后基因沉默的现象。RNA介导的沉默复合体(RISC)在RNAi中起着重要的作用,而Argonaute蛋白又是该复合体中的关键蛋白,它剪开双链小RNAs,并引导其主链即介导链与靶mRNA互补配对,从而使靶mRNA降解或者抑制靶mRNA的翻译。rn 本文就Argonaute蛋白家族与小RNA之间的关系及Argonaute蛋白家族在小RNAs介导的基因沉默中的作用进行综述。目前研究表明：Argonaute蛋白在RNA介导的沉默机制中扮演着关键角色，在介导小RNA分子与靶mRNA互补配对中具有生物支架的作用。因此说Argonaute蛋白家族是RNAi机制中的关键成员。Argonaute蛋白具有RNA解旋酶活性。主链RNA在Argonaute蛋白引导下装配进入RNA介导的RISC后，RISC被活化，从而介导靶mRNA的沉默，在这个过程中，Argonaute蛋白同样起着关键作用。

摘要： 实验方法植物的CLA1(Cloroplastos alterados1,CLA1)编码1-脱氧木酮糖-5-磷酸合成酶(1-deoxyxylulose 5-phosphate synthase),参与叶绿体的发育过程,且此酶在进化中高度保守,棉花中此基因沉默后植株叶片表现出光漂白症状，文中实验以此基因作为VIGS体系操作成功与否的评价.利用VIGS技术将‘新陆早17号’棉花幼苗中的GhBES1基因沉默，测量其生理指标表明，沉默GhBES1基因的棉花苗相对于空载的含水量、甜菜碱、脯氨酸、可溶性糖以及叶绿素含量都有一定的降低，膜脂过氧化程度(MDA含量)有一定的增加。表明GhBES1基因的表达很可能与棉花的抗早机制调控有关。

摘要： 目的：探讨人成纤维细胞生长因子3(Fibroblast growth factor3,FGFR3)基因沉默对人类肺腺癌A549细胞侵袭能力及其对基质金属蛋白酶9(Matrix metaloproteinases9,MMP9)基因表达的影响. 方法：细胞分为3组：A组：实验组,即FGFR3特异性小干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)(siRNA-FGFR3)干扰组;B组：阴性对照组,即FGFR3非特异性阴性对照siRNA(siRNA-NC)干扰组;C组：空白对照组,无siRNA干扰;通过核酸转染试剂脂质体LipofectamineTM2000(Lipo2000)转染A549细胞;倒置荧光显微镜观察Lipo2000转染效率;转染后A549细胞的侵袭能力用Transwell实验检测;实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time quantitative polymerase chain reaction,Real-time PCR)用于检测转染前后FGFR3及MMP9mRNA的表达水平. 结果：Lipo2000介导的FAM-siRNA对肺腺癌A549细胞的转染效率可达80％;在转染36h后,Transwell实验结果显示A组较B组、C组侵袭能力显著降低(P＜0.01).Real-time PCR结果显示,A组较B、C组的FGFR3和MMP9基因表达量明显下调(P＜0.01). 结论：FGFR3基因沉默可明显抑制肺腺癌A549细胞的侵袭能力,并能下调MMP9表达.为肺癌的治疗提供了新的靶点.

摘要： 寄主诱导的基因沉默(Host Induced Gene Silencing,HIGS)技术是在利用RNA沉默技术防治植物病毒病害的基础上发展起来的一种防控除植物病毒以外的其他病原物(真菌、细菌和线虫等)所引起病害的新方法.它通过将来源于病原物的目的基因片段导入寄主植物中，通过寄主植物的RNA沉默途径中的关键蛋白Dicer Like (DCL)切割病原物特定序列的双链RNA产生病原物特异的小RNA。当病原物侵染寄主植物的时候，寄主中表达的小RNA就会在一种尚不清楚的机制下跨物种转移到相应的病原物体内，并激活病原物体内自身的RNA沉默系统、导致病原物体内与该小RNA互补的同源基因的mRNA表达水平下降，从而达到防治病害的目的。

摘要： 随着人口老龄化,心血管疾病的发病率和死亡率逐年上升,因此迫切需要能有效减少心血管疾病危险因素的策略.运动作为重要策略之一,可改善心脏结构和功能的退行性变化延缓因增龄所致的心脏功能下降.衰老引发的心脏疾病可通过血清乳酸脱氢酶进行检测,当组织发生恶变时,血清LDH水平升高.乳酸脱氢酶(LDH)是糖酵解途径中的关键酶,具有5种同工酶,广泛存在于机体各组织中,尤以肝、心、肌肉等组织中含量较多.LDH是催化乳酸和丙酮酸互相转化的酶.据此推测在适宜强度运动时,LDH表达量减少,乳酸减少,NADH进入线粒体内氧化,丙酮酸就彻底分解呈CO2和H2O,而此时胞质中的糖无氧氧化途径受到抑制,促使代谢途径转向比较经济高效的有氧呼吸通路,释放能量供心肌肉使用.蜕皮素诱导基因(Ecdysone-inducible gene L3,Imp-L3)是果蝇体内唯一编码乳酸脱氢酶的基因,其编码合成的蛋白质与人类的乳酸脱氢酶有58％～61％的同源性和71％～75％的相似性.本研究借助时空可控性靶向系统可控性地在果蝇组织特异性表达目的基因，将温度敏感型转录激活子Gal4抑制物Gal80ts和Gal4/UAS双系统进行结合，通过温度的变化在特定的时间对基因表达进行控制。tub-Gal80ts是温度敏感Gal4激活子的抑制物，当环境温度为18°C时，tub-Gal80ts在组织中广泛表达，能有效抑制Gal4激活子的作用，当温度上升至30°C时，tub-Gal80ts失活，抑制作用被解除，因此可通过热休克来控制表达时间实现成体果蝇目的基因的沉默或过表达。本研究在已建立果蝇运动抗心脏衰老模型的基础上，利用时空可控性靶向系统对果蝇IMP-L3基因进行定位定时调控，采用果蝇平台运动装置进行运动训练，研究IMP-L3基因表达对运动后中老龄果蝇心脏功能的影响。结果显示，中老龄果蝇通过适宜强度运动后，IMP-L3基因沉默可降低果蝇心率，减少因衰老所引起的心律不齐指数、心舒张功能能不全指数、心收缩功能不全指数、纤维性颤动的发生，有效维持老龄果蝇心脏功能的正常。

摘要： 本研究利用VIGS技术对HyPRP1基因进行了沉默,并提取到棉株高质量的RNA;通过转录组测序技术获得了丰富和可靠的基因序列、注释、表达等数据.黄萎病菌胁迫12 h后,HyPRP1沉默棉花有1790个基因发生了差异表达,上调和下调表达基因分别显著富集于68个和76个KEGG通路中.表明HyPRP1不仅是一个假定的细胞壁蛋白,还与多种信号通路存在交集.

摘要： 本研究利用VIGS技术对HyPRP1基因进行了沉默,并提取到棉株高质量的RNA;通过转录组测序技术获得了丰富和可靠的基因序列、注释、表达等数据.黄萎病菌胁迫12 h后,HyPRP1沉默棉花有1790个基因发生了差异表达,上调和下调表达基因分别显著富集于68个和76个KEGG通路中.表明HyPRP1不仅是一个假定的细胞壁蛋白,还与多种信号通路存在交集.

摘要： 本发明提供了将多核苷酸递送至地下植物有害生物的方法。具体而言，本发明涉及通过用猝灭剂基本上猝灭带正电荷的残基来降低组合物与土壤结合的方法，所述组合物包含多核苷酸和阳离子聚合物。本发明还包括含有阳离子聚合物、多核苷酸和猝灭剂的组合物。

摘要： 本发明公开了一种用于TRV介导的基因沉默系统中的指示基因，其核酸序列如SEQ ID No:1所示，还公开了含有该序列的病毒诱导沉默载体及其构建方法，并利用该沉默载体侵染柑橘幼苗的方法。本发明为TRV介导的病毒诱导基因沉默体系提供有效的指示基因，是首次在柑橘中成功建立TRV介导的病毒沉默系统，成功地沉默了柑橘中的指示基因。利用本发明的沉默载体构建的沉默系统操作简单、转化效率高、能够快速地在柑橘中对基因进行功能验证。能够有效地抑制柑橘中的内源基因表达，表型显著。本发明提供的沉默载体为快速、有效地在柑橘中进行基因功能验证提供了可靠技术。

摘要： 本发明公开了一种用于沉默镰刀菌内源基因的沉默载体及其应用，所述沉默载体包括原始载体以及插入所述原始载体的正向沉默片段和反向沉默片段，所述原始载体为PFsilent‑1，或潮霉素抗性基因替换为G418抗性基因的载体PFsilent‑1；所述正向沉默片段插入所述原始载体中内含子上游的多克隆位点，所述反向沉默片段插入所述原始载体中内含子下游的多克隆位点。本发明还公开了所述沉默载体在沉默镰刀菌内源基因中的应用。本发明构建了能用于适用于禾谷镰刀菌、尖孢镰刀菌等镰刀菌基因沉默的沉默载体及高效遗传转化体系；利用本发明建立的沉默载体和转化体系，能使靶基因的表达量降低约80‑90%。

摘要： 本发明公开了一种用于TRV介导的基因沉默系统中的指示基因，其核酸序列如SEQ ID No:1所示，还公开了含有该序列的病毒诱导沉默载体及其构建方法，并利用该沉默载体侵染柑橘幼苗的方法。本发明为TRV介导的病毒诱导基因沉默体系提供有效的指示基因，是首次在柑橘中成功建立TRV介导的病毒沉默系统，成功地沉默了柑橘中的指示基因。利用本发明的沉默载体构建的沉默系统操作简单、转化效率高、能够快速地在柑橘中对基因进行功能验证。能够有效地抑制柑橘中的内源基因表达，表型显著。本发明提供的沉默载体为快速、有效地在柑橘中进行基因功能验证提供了可靠技术。

摘要： 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种中国石蒜LcCLA基因VIGS沉默载体、沉默体系及其构建方法和应用。本发明构建了中国石蒜LcCLA基因VIGS沉默载体和沉默体系，采用针头注射的方式将沉默体系导入中国石蒜叶片，诱导中国石蒜内源LcCLA发生沉默，有效降低了中国石蒜LcCLA基因的表达水平，获得病毒诱导的基因沉默植株，能够验证中国石蒜LcCLA基因功能，在中国石蒜的功能基因研究中具有应用价值。

摘要： 本发明公开了沉默桑实杯盘菌关键致病基因CsGPA1的沉默载体及其应用和方法，桑实杯盘菌关键致病基因CsGPA1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；通过利用宿主诱导的基因沉默技术，将含有靶向桑实杯盘菌关键致病基因CsGPA1的沉默片段的载体在植物中表达，通过对桑实杯盘菌致病力鉴定，转基因植物能够显著提高对桑实杯盘菌的抗性，因此可以利用此方法提高植物对桑实杯盘菌的抗性，防治桑实杯盘菌的感染。

摘要： 本发明公开了沉默桑实杯盘菌G蛋白β亚基编码基因CsGβ2的沉默载体及其应用和方法，桑实杯盘菌G蛋白β亚基编码基因CsGβ2的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；通过利用宿主诱导的基因沉默技术，将含有桑实杯盘菌G蛋白β亚基编码基因CsGβ2的沉默片段的载体在植物中表达，通过对桑实杯盘菌致病力鉴定，转基因植物能够显著提高对桑实杯盘菌的抗性，因此可以利用此方法提高植物对桑实杯盘菌的抗性，防治桑实杯盘菌的感染。

摘要： 本发明公开了沉默桑实杯盘菌G蛋白α亚基编码基因CsGPA3的沉默载体及其应用和方法，桑实杯盘菌G蛋白α亚基编码基因CsGPA3的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；通过利用宿主诱导的基因沉默技术，将含有桑实杯盘菌G蛋白α亚基编码基因CsGPA3的沉默片段的载体在植物中表达，通过对桑实杯盘菌致病力鉴定，转基因植物能够显著提高对桑实杯盘菌的抗性，因此可以利用此方法提高植物对桑实杯盘菌的抗性，防治桑实杯盘菌的感染。

摘要： 本发明公开了沉默桑实杯盘菌G蛋白γ亚基编码基因CsGγ的沉默载体及其应用和方法，桑实杯盘菌G蛋白γ亚基编码基因CsGγ的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；通过利用宿主诱导的基因沉默技术，将含有靶向桑实杯盘菌G蛋白γ亚基编码基因CsGγ的沉默片段的载体在植物中表达，通过对桑实杯盘菌致病力鉴定，转基因植物能够显著提高对桑实杯盘菌的抗性，因此可以利用此方法提高植物对桑实杯盘菌的抗性，防治桑实杯盘菌的感染。

摘要： 本发明公开了一种用于沉默镰刀菌内源基因的沉默载体及其应用，所述沉默载体包括原始载体以及插入所述原始载体的正向沉默片段和反向沉默片段，所述原始载体为PFsilent-1，或潮霉素抗性基因替换为G418抗性基因的载体PFsilent-1；所述正向沉默片段插入所述原始载体中内含子上游的多克隆位点，所述反向沉默片段插入所述原始载体中内含子下游的多克隆位点。本发明还公开了所述沉默载体在沉默镰刀菌内源基因中的应用。本发明构建了能用于适用于禾谷镰刀菌、尖孢镰刀菌等镰刀菌基因沉默的沉默载体及高效遗传转化体系；利用本发明建立的沉默载体和转化体系，能使靶基因的表达量降低约80-90%。