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基于芯片电泳的人乳头状瘤病毒(HPV)基因分型筛查方法的研究

摘要

宫颈癌是威胁女性生命健康的第二大杀手,却也是至今病因明确的唯一癌症.超过99%的宫颈癌与人乳头状瘤病毒(HPV)的感染有因果关系.因此,对HPV感染情况的筛查成为重要而有效的预防宫颈癌的早期筛查手段.但是HPV的不同亚型的致病风险程度及其在不同地域人群中的分布都有所差异,直接对HPV进行分型检测显然更具有实际意义和价值.然而,目前仍然缺乏灵敏且经济适用的分型方法.近年来,实验室针对三种不同的核酸扩增技术联合芯片电泳对HPV16E6/E7mRNA检测做了比较型的研究。结果表明,芯片电泳具有高通量、高可靠性的特点,相对于传统耗时的毛细管电泳或分子信标检测方法,检测耗时大大缩短。建立了基于核酸序列扩增技术(NASBA)、一步法RT-PCR和两步法RT-PCR的HPV筛查检测技术。相信这种方法在进一步修改和完善后,能够在肛门-生殖器癌临床诊断和预后中发挥作用。建立了基于聚合酶链式反应(PCR),限制性片段长度多态性(RFLP)分析结合芯片电泳(MCE)的方法对HPV进行分型。以47种HPV类型为对象,与细胞学检查和DNA测序方法对比,考察了其在宫颈脱落细胞样品中的检测效果。结果显示阳性检出率是传统的细胞形态学检查的4倍,检测出单一感染占2/3,共测出11种HPV类型,分型准确度大于90%。证明了PCR-RFLP-MCE自动分型方法的优越性以及用于辅助宫颈癌早期诊断的HPV筛查的可能性。

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