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乳头状甲状腺癌的筛检新方法研究

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甲状腺癌是最常见的内分泌肿瘤,乳头状甲状腺癌(papillary thyroid cancer,PTC)占比最高,约为90％.建立快速准确的检测方法,无疑对于其早期诊断和病因分析具有重要意义.本研究主要建立了基于GAS8-AS1基因的检测技术,并用于乳头状甲状腺癌的早期筛检.首先提取PTC患者甲状腺癌及正常甲状腺组织的基因组DNA,通过测序来分析GAS8-AS1基因的突变情况;第二,利用转染技术,将lncRNA GAS8-AS1基因的质粒或针对lncRNA GAS8-AS1的siRNAs分别转染培养的甲状肿瘤细胞系(GLAG66、NPA和TPC-1),检测该基因对肿瘤细胞增长的影响,以验证基因突变与肿瘤细胞的相关性;第三,设计一对特异引物(F:CAACGAGCAAACAAGAAGGAG;R:TGAGCCAAACAGACCAGTCA),建立针对基因突变的实时定量PCR检测方法.结果发现,与正常甲状腺组织比较,PTC患者甲状腺癌组织的GAS8-AS1基因突变频率明显增加,遂确认该基因为PTC的易感基因;经GAS8-AS1基因或siRNAs转染后,表现为促进或抑制甲状肿瘤细胞系的增殖;利用所设计引物,可以检测出GAS8-AS1基因的突变情况.结论:GAS8-AS1基因与乳头状甲状腺癌关系密切,前者可作为后者的易感基因,所建立的实时定量PCR检测方法,可用于乳头状甲状腺癌的快速筛选和检测.

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