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鉴别高、低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒二重荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

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根据GenBank登录的高、低致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP/LP-PRRSV)的非结构蛋白(NSP2)基因序列设计特异性引物和TaqMan MGB荧光探针,经优化反应条件,建立了鉴别HP/LP-PRRSV二重TaqMan MGB实时荧光定量RT-PCR(fluorescent quantitative real-time PCR,FQ-PCR)检测方法;进行了二重FQ-PCR检测方法的敏感性、特异性和重复性实验,并对疑似PRRSV感染临床样品进行了应用检测,同时与HP/LP-PRRSV二重RT-P CR方法进行了对比实验.结果显示:成功建立了鉴别HP/LP-PRRSV的二重FQ-PCR检测方法,HP/LP-PRRSV标准曲线的曲线循环阈值与模板浓度具有良好的线性关系,相关系数分别为0.998和0.997;该方法灵敏度可达101拷贝/μL;特异性高,对HP/LP-PRRSV阳性对照扩增呈现阳性反应曲线,而对5个对照病原扩增曲线均呈现阴性反应;不同浓度的HP/LP-PRRSV重组质粒分别重复扩增3次,重复结果良好;对25份临床疑似PRRSV感染样品进行了应用检测,阳性检出率为92％,较二重RT-PCR方法阳性检出率高.

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来源
《河南省畜牧兽医学会第八届会员代表大会暨2013年学术研讨会》|2013年|481-485|共5页
会议地点郑州
作者
吴志明; 闫若潜; 孔刚锐; 李文山; 赵明军; 王东方; 赵雪丽; 陈慧娟; 靳利粉;
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作者单位

河南省畜牧兽医学会;

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会议组织
正文语种
原文格式 PDF
中图分类兽医诊断学;
关键词
猪繁殖与呼吸综合征; 高致病性病毒; 低致病性病毒; 二重荧光定量反转录聚合酶链反应; 临床诊断;

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