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重组人α-防御素-3基因乳腺定位表达及抗菌效果检测

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目的:本研究通过构建减毒沙门氏菌重组菌人HNP-3基因乳腺定位表达系统,探讨减毒沙门氏菌介导的人HNP-3乳腺定位表达产物对革兰氏阴性菌的抗菌效果.方法:将构建的乳腺定位表达载体pEGFP-WAP-HNP-3经电转化导入减毒沙门氏菌ΔcrpC78-1,构建重组菌ΔcrpC78-1(pEGFP-WAP-HNP-3),将重组菌分点注射到怀孕20-22d母兔腹部乳腺分布区,收集试验组母兔分娩后不同时间段的的泌乳,Western·blot检测乳中HNP-3融合蛋白表达情况,ELISA检测乳中HNP-3融合蛋白的表达水平,活菌计数法检测泌乳中HNP-3融合蛋白的抑菌效果.结果:成功构建重组菌,重组菌分点注射到怀孕20-22d母兔腹部乳腺分布区,分娩后分泌的乳汁经Western·blot检测在40kDa处有HNP-3融合蛋白阳性杂交信号,母兔分娩后第5d HNP-3融合蛋白表达量最高,可达289ng·mL-1,及至第25d表达量仍可达到136ng·mL-1.血清和阴性对照乳中未检测到HNP-3.活菌计数法结果表明含HNP-3融合蛋白兔奶对大肠杆菌、沙门氏菌和绿脓杆菌有较好的抑菌效果,抑菌率分别为92.8％、42.0％和21.3％;结论:验证了减毒沙门氏菌氏菌介导HNP-3基因乳腺定位表达质粒在兔乳腺中定位表达的可行性,其表达的HNP-3融合蛋白乳腺定位表达产物对革兰氏阴性菌具有很好的抑菌效果,为动物乳房炎的预防和治疗以及进一步开发新型、安全的抗菌类药物提供了新思路.

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来源
《河南省畜牧兽医学会第八届会员代表大会暨2013年学术研讨会》|2013年|606|共1页
会议地点郑州
作者
陈慧敏; 李银聚; 张鹏; 程相朝; 张春杰; 吴庭才; 余宁;
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作者单位

河南省畜牧兽医学会;

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会议组织
正文语种
原文格式 PDF
中图分类 S857.26;
关键词
动物乳房炎; 人α-防御素-3基因; 定位表达; 减毒沙门氏菌; 抗菌效果;

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