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Expression of human -defensin-1 in recombinant Escherichia coli and analysis of its antimicrobial spectrum

机译：人防御素1在重组大肠杆菌中的表达及其抗菌谱分析

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Escherichia coli?BL21(DE3) was transformed with a pHCD1 plasmid harboring the human β-defensin-1 (hBD1) gene fused in frame behind a disulfide bond isomerase (DsbC), a His-tag, and an enterokinase cleavage site. After induction, the DsbC-hBD1 was expressed as a ~36 kDa soluble fusion protein in recombinant?E. coli, which also inhibited host cell growth. After cell disruption, the soluble protein was easily recovered by Ni2+?affinity chromatography and cleaved by enterokinase to yield a mature hBD1 of about 4 kDa. Importantly, the mature hBD1 showed broad antimicrobial activity against Gram-positive and -negative pathogenic bacteria, including?Streptococcus pneumoniae,?E. coli?O157:H7, and?Klebsiella pneumoniae.
机译：用携带人β-防御素-1（hBD1）基因的pHCD1质粒转化大肠杆菌ΔBL21（DE3），该基因在框内融合在二硫键异构酶（DsbC），His标签和肠激酶切割位点之后。诱导后，DsbC-hBD1在重组ΔE中表达为〜36kDa的可溶性融合蛋白。大肠杆菌，它也抑制宿主细胞的生长。细胞破裂后，可溶蛋白可通过Ni2 +亲和层析轻松回收，并被肠激酶裂解，产生约4 kDa的成熟hBD1。重要的是，成熟的hBD1对革兰氏阳性和阴性病原菌（包括肺炎链球菌，大肠杆菌）表现出广泛的抗菌活性。大肠杆菌O157：H7和肺炎克雷伯菌。

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