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龙眼己糖激酶基因的克隆及原核表达分析

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克隆龙眼(Dimocarpus longan Lour.)己糖激酶基因,并对其进行生物信息学分析及表达分析,构建原核表达载体,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白,为下一步研究己糖激酶特性和调控龙眼果实糖代谢奠定理论基础.以龙眼总RNA为模板,采用RT-PCR结合RACE法获得基因全长cDNA序列,构建pET-32a-DlHXK原核表达载体,转化到大肠杆菌Rosetta (DE3)中诱导表达.龙眼己糖激酶(HXK)基因的cDNA全长序列,命名为DIHXK.DIHXK序列全长2101 bp,包括一个1488 bp的开放阅读框,预测编码496个氨基酸:进化树和同源性分析发现,该基因与温州蜜柑的同源性最近,达到了82％:荧光定量表达分析表明,DIHXK基因随着果实的发育成熟表达量逐渐上升;经IPTG诱导和SDS-PAGE检测,所构建的原核表达载体表达的融合蛋白与预期蛋白大小相吻合.利用RT-PCR结合RACE方法成功克隆了龙眼的己糖激酶基因,成功构建原核表达载体,能够在大肠杆菌中获得高效表达.

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来源
《2013年广东省研究生学术论坛——园艺分论坛》|2013年|419-428|共10页
会议地点广州
作者
SHUAI Liang; 帅良; LI Jing; 李静; HAN Dong-mei; 韩冬梅; WU Zhen-xian; 吴振先;
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作者单位

暨南大学;

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会议组织
正文语种
原文格式 PDF
中图分类 S667.2:S601;
关键词
龙眼; 己糖激酶基因; 基因克隆; 原核表达;

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