龙眼己糖激酶基因的克隆及原核表达

帅良; 李静; 韩冬梅; 吴振先

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龙眼己糖激酶基因的克隆及原核表达

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摘要

[目的]克隆龙眼Dimocarpus longan己糖激酶(Hexokinase,HXK)基因,并对其进行生物信息学分析及原核表达分析.[方法]以龙眼总RNA为模板,采用RT-PCR结合RACE法获得基因全长cDNA序列,构建pET-32a-DlHXK原核表达载体,转化到大肠埃希菌Escherichia coli Rosetta(DE3)中诱导表达.[结果和结论]成功克隆龙眼己糖激酶基因的cDNA全长序列,命名为DlHXK,登录号为KF776906.1.龙眼DlHXK序列全长2 101 bp,包括1个1 488 bp的开放阅读框,预测编码495个氨基酸;进化树和相似性分析发现,该基因与温州蜜柑Citrus unshiu的相似性最高,达到了82％;荧光定量表达分析表明,DlHXK基因随着果实的发育成熟表达量逐渐上升;经IPTG诱导和SDS-PAGE检测,所构建的原核表达载体表达的融合蛋白与预期蛋白大小相吻合.由此可见,利用RT-PCR结合RACE方法成功克隆了龙眼的己糖激酶基因,构建原核表达载体,并在大肠埃希菌Rosetta (DE3)中获得高效表达.

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来源
《华南农业大学学报》 |2015年第3期|91-97|共7页
作者
帅良; 李静; 韩冬梅; 吴振先;
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作者单位

华南农业大学园艺学院;

广东广州510642;

华南农业大学园艺学院;

广东广州510642;

广东省农业科学院果树研究所;

广东广州510640;

华南农业大学园艺学院;

广东广州510642;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类龙眼（桂圆）;
关键词
龙眼; 己糖激酶; 基因克隆; 荧光定量PCR; 原核表达;

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