羽衣甘蓝S13-b位点受体激酶基因的克隆及激酶结构域的原核表达

蓝兴国; 杨佳; 王艳红; 李玉花

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羽衣甘蓝S13-b位点受体激酶基因的克隆及激酶结构域的原核表达

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目的:分离羽衣甘蓝S13-b位点受体激酶(SRK13-b)基因并进行序列及结构域分析,构建SRK13-b结构域的原核表达载体并进行重组蛋白质的原核表达和纯化.方法:提取羽衣甘蓝S13-bS13-b自交不亲和系花期柱头的RNA,用RTPCR法分离SRK13-b基因;将编码SRK13-b激酶结构域的序列插入大肠杆菌表达载体pET-14b中,构建原核表达质粒pET-SRK13-bCT,转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS菌株,经0.1 mmol/L IPTG诱导,用Ni-NTA亲和层析柱对SRK13-b激酶结构域蛋白进行纯化.结果:分离获得羽衣甘蓝SRK13-b基因的长度为2571 bp,编码856个氨基酸,GenBank收录号为EU180597;对SRK13-b激酶结构域蛋白进行诱导表达及纯化,SDS-PAGE显示相对分子质量约43×103的蛋白质特异表达,对表达产物进行分离纯化,获得了SRK13-b激酶结构域的融合蛋白.结论:羽衣甘蓝SRK13-b基因的克隆及激酶结构域的原核表达,为研究SRK的功能及自交不亲和性奠定了基础.

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来源
《生物技术通讯》 |2010年第2期|210-212|共3页
作者
蓝兴国; 杨佳; 王艳红; 李玉花;
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作者单位

东北林业大学,生命科学学院,黑龙江,哈尔滨,150040;

东北林业大学,生命科学学院,黑龙江,哈尔滨,150040;

东北林业大学,生命科学学院,黑龙江,哈尔滨,150040;

东北林业大学,生命科学学院,黑龙江,哈尔滨,150040;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类基因工程（遗传工程）;
关键词
羽衣甘蓝; 自交不亲和; S13-b位点受体激酶; 原核表达; 纯化;

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